Questo protocollo misura l'attività fotosintetica delle alghe attaccate, mentre si attaccano ancora al plancton, proprio come in natura. Il vantaggio principale di questa tecnica è che la misurazione della fotofisiologia può essere eseguita in tempo reale senza distrazioni del campione. Per esaminare gli effetti degli individui di zooplancton sulla fluorescenza basale, preparare scapholeberis mucronata adulto dalla coltura senza organismi attaccati.
Ora affamare gli individui in FLW a 20 gradi Celsius per almeno 90 minuti per evitare la fluorescenza dal contenuto intestinale. Versare 1,5 millilitri di FWL in una cuvetta. Raccogli il numero desiderato di s.
individui mucronata che usano una pipetta al microscopio ottico a 100 volte l'ingrandimento e li trasferiscono nella cuvetta. Aggiungere FLW per portare il volume del campione fino a 2 millilitri e consentirgli di acclimatarsi in condizioni di scarsa illuminazione a 20 gradi Celsius è per 15 minuti prima della misurazione del fluorometro a velocità di ripetizione rapida. Quindi fare clic su act to run"per avviare la misurazione e ripetere le misurazioni più di tre volte per campione.
Leggete il valore F0 dal plottaggio risultante. Raccogli le specie di colacium con un carapace fuso usando una pipetta al microscopio ottico con ingrandimento 100 volte e lavale con FLW. Specie di colacium asetticamente inoculate nel mezzo AF-6 in un tubo di vetro da 10 millilitri su una panca pulita.
Mantenere la coltura a una temperatura NC2 in una camera di crescita, agitando delicatamente il tubo di vetro a mano almeno una volta al giorno per evitare l'insediamento cellulare. Per esaminare gli effetti degli individui di zooplancton sulla clorofilla una fluorescenza da specie di colacium, utilizzare s. mucronata adulto senza organismi attaccati.
Per evitare la fluorescenza dal contenuto intestinale, affamare gli individui in FLW per almeno 90 minuti. Impostare un fluorometro a velocità di ripetizione rapida di tipo cuvetta. Ora versa un sottocampione di 1,5 millilitri di specie di colacium pre-coltivate in una cuvetta.
Quindi trasferire il numero desiderato di individui s. mucronata in queste cuvette e portare il volume del campione fino a 2 millilitri con il mezzo filtrato. Acclimatare gli individui in condizioni di scarsa illuminazione a 20 gradi Celsius per 15 minuti prima di effettuare la misurazione del fluorometro a velocità di ripetizione rapida.
Fare clic su act to run" per avviare la misurazione, ripetendo le misurazioni più di tre volte per campione. Leggere i valori F0 e FM dal grafico risultante. Per correggere la fluorescenza basale, filtrare il terreno di coltura utilizzando un filtro di 0,2 micrometri e misurare la fluorescenza.
Sottrarre F0 del campione basale da F0 e FM di specie di colacium o modificare il valore di correzione in bianco nelle impostazioni nella scheda opzioni. Isolare gli individui s. mucronata con specie di colacium usando una pipetta al microscopio ottico.
Quindi lavare s. mucronata usando FLW. Trasferimento s.
mucronata in 100 millilitri di FLW e tenerli in condizioni di oscurità a temperatura NC2 per 90 minuti per la fame. Versare 1,5 millilitri di FLW in una cuvetta. Trasferimento di circa dieci s.
mucronata individui con specie di colacium in una cuvetta e aggiungere FLW per portare il campione fino a 2 millilitri. Acclimatare gli individui in condizioni di scarsa illuminazione a temperatura N2C per 15 minuti e misurare la clorofilla una fluorescenza, come menzionato nel manoscritto del testo. Per enumerare il numero di cellule attaccate, fissare il campione con il 2% di glutaraldeide dopo aver preso la misurazione del fluorometro a velocità di ripetizione rapida.
Quindi scattare foto a diverse profondità focali e posizioni di s. mucronata al microscopio ottico. Non vi è stato alcun effetto significativo sulla fluorescenza basale o sulla clorofilla una fluorescenza da s.
mucronata fino a 5 individui per millilitro. Tuttavia, la massima efficienza fotochimica e la tempra non fotochimica sono state significativamente influenzate quando la densità di s. mucronata era di 7,5 individui per millilitro.
La variazione stagionale nella fitofisiologia delle specie di colacium durante la fase di attaccamento e lo stadio planctonico per la fase stazionaria nel mezzo AF-6 hanno mostrato un'efficienza fotochimica massima media simile e una tempra non fotochimica. Per lo stadio attaccato delle specie di colacium in condizioni di oscurità, non vi è stata alcuna differenza significativa nei parametri fotofisiologici, tranne che la tempra non fotochimica è superiore per il manganese rispetto al calcio dopo tre ore e a bassa intensità luminosa a 21 ore. Per lo stadio planctonico, la sezione trasversale di assorbimento di PS2 era significativamente inferiore nel manganese rispetto al trattamento con calcio a tre ore.
L'efficienza fotochimica efficace era significativamente più alta, ma la tempra non fotochimica era inferiore nel trattamento con manganese rispetto al controllo a 21 ore. Sotto l'aumentare della luce, il manganese tendeva a diminuire la sezione trasversale di assorbimento della PS2 a tre ore, nella tempra non fotochimica a 21 ore, aumentando l'efficienza fotochimica effettiva a tre ore. Il calcio ha leggermente migliorato la tempra non fotochimica sotto luce crescente.
Tuttavia, ha diminuito l'efficienza fotochimica effettiva a tre ore. La cosa più importante è l'effetto degli organismi del substrato. Se le alghe sono attaccate a diverse specie o materiali, l'effetto può essere diverso.
Oltre a questo protocollo, la misurazione della fissazione del carbonio o dei tassi di produzione di ossigeno sono utili per chiarire la risposta della produttività del calcio alle manipolazioni sperimentali. Questo protocollo ci consente di chiarire come l'attività fotosintetica delle alghe attaccate risponde ai cambiamenti ambientali.
