Il modello di perforazione endovascolare combinato con la risonanza magnetica postoperatoria consente la verifica del sanguinamento e l'esclusione di altre patologie intercraniche. Uno dei vantaggi di questo approccio è la possibilità di quantificare il volume di sanguinamento per ulteriori analisi di sottogruppi. Inizia radendo i peli del collo del topo.
Applicare unguento oftalmico durante la procedura. Igienizzare la pelle con etanolo al 70% seguito da Betadine o clorexidina e applicare l'1% di lidocaina. Posizionare il mouse in posizione supina con la testa e il busto rivolti verso l'alto.
Stabilizzare il topo dorsalmente usando del nastro adesivo sulle quattro estremità. Allunga la pelle del collo ed elevala. Aprire la pelle del collo dal mento al bordo superiore dello sterno e separare le ghiandole salivari dal tessuto connettivo adiacente.
Esporre la guaina dell'arteria carotide comune separando i muscoli lungo un lato della trachea. Esporre il campo chirurgico con un divaricatore o un tampone di garza sterile e staccare l'arteria carotide e lasciare libero 8-0 sutura di seta senza legarlo, assicurando di non danneggiare il nervo vagale. Sezionare l'estremità distale dell'ECA e legare le navi due volte in posizione distale.
Nel punto medio del segmento di filamento due volte legato disgiunge l'ECA e crea un moncone del vaso. Lasciare una sutura di seta intorno all'ICA senza chiuderla. Predisporre una legatura per il filamento attorno al moncone ECA.
Non chiuderlo fino a quando l'inserimento del filamento non è riuscito. Chiudere temporaneamente ICA e CCA utilizzando una sutura o una micro clip. Usando le forbici microvascolari, fai un'incisione nell'ECA e inserisci un filamento di prolene 5-0 in alternativa 4-O e avanzalo in CCA.
Chiudere la legatura sull'ECA mentre si stacca la micro clip su ICA e CCA. Tirare indietro delicatamente il filamento e regolare il moncone ECA nella direzione cranica mentre si invagina il filamento attraverso la biforcazione nell'ICA. Posizionare la punta del filamento medialmente con un angolo di circa 30 gradi rispetto alla linea mediana tracheale in piano orizzontale e spingerla all'interno dell'ICA.
Alla biforcazione ACA-MCA si osserva resistenza. Spostare il filamento in avanti fino a tre millimetri e perforare l'ACA destro. Prelevare rapidamente il filamento al moncone ECA consentendo il flusso sanguigno nello spazio subaracnoideo.
Posizionare il filamento in questa posizione per 10 secondi. Ritirare il filamento. Il CCA può essere temporaneamente chiuso in anticipo per evitare un'eccessiva perdita di sangue e quindi ritirare il filamento.
Ligate l'ECA utilizzando suture prestabilite e riaprite il CCA se lo avete chiuso in precedenza. La presenza di tremori muscolari, miosi ipsilaterale, ansimare per il respiro, alterato ritmo cardiaco e incontinenza urinaria può essere la prova di successo della chirurgia. Assicurarsi che non vi siano perdite di sanguinamento e disinfettare la pelle.
Suturare la ferita. Metti il topo in una scatola termica e attendi che l'animale abbia una coscienza sufficiente per avere la reclinazione sternale. Per alleviare il dolore, somministrare 1,2 milligrammi per millilitro di paracetamolo.
Utilizzando uno scanner per roditori su un risonatore della testa del topo eseguire la risonanza magnetica dopo 24 ore di intervento chirurgico, Posizionare il mouse su una coperta d'acqua circolante riscaldata a 37 gradi Celsius. Innanzitutto, eseguire una scansione di riferimento rapido acquisendo tre pacchetti di sezioni ortogonali. Quindi utilizzare una sequenza di eco di rotazione turbo 2D pesata T2 ad alta risoluzione per l'imaging.
Trasferire i dati nel formato immagine DICOM e utilizzare il software Imagej per la classificazione SAH e la volumetria dei coaguli di sangue. Per garantire il corretto sito di sanguinamento ed escludere altre patologie intracraniche, le scansioni MRI sono state eseguite 24 ore dopo l'intervento. Il grado di sanguinamento SAH è stato quantificato in base alle scansioni MRI ponderate T2.
Tra i topi esaminati, il 14% degli animali è stato classificato come sanguinamento di grado zero senza evidenza radiologica per SAH o emorragia. La maggior parte degli animali ha mostrato gradi di sanguinamento compresi tra uno e tre e il 10% ha mostrato un grado di sanguinamento quarto che è stato definito SAH lungo l'ictus e / o ICH. È stato quantificato il volume di sanguinamento totale di ciascun grado SAH, in base allo spessore SAH, che aiuta a determinare l'area di sanguinamento.
Il volume di sanguinamento calcolato in base allo spessore assiale del SAH ha mostrato differenze significative nei rispettivi sottogruppi di grado da uno a tre. Durante l'intero intervento chirurgico, una dissezione accurata del tessuto connettivo circostante è fondamentale per il corretto posizionamento delle suture. Assicurati che la lunghezza del moncone ECA sia sufficiente in modo da avere uno spazio di lavoro confortevole per la legatura, l'incisione e l'inserimento del filamento.
Non spingere mai il filamento in avanti quando si avverte resistenza prima della biforcazione MCA-ACA per evitare la perforazione prematura del vaso.
