Das endovaskuläre Perforationsmodell in Kombination mit der postoperativen MRT ermöglicht die Überprüfung der Blutung und des Ausschlusses anderer interkranieller Pathologien. Einer der Vorteile dieses Ansatzes ist die Möglichkeit, das Blutungsvolumen für weitere Subgruppenanalysen zu quantifizieren. Beginnen Sie damit, die Nackenhaare der Maus zu rasieren.
Tragen Sie während des Eingriffs eine Augensalbe auf. Desinfizieren Sie die Haut mit 70% Ethanol, gefolgt von Betadin oder Chlorhexidin und tragen Sie 1% Lidocain auf. Bringen Sie die Maus in Rückenlage mit Kopf und Rumpf nach oben.
Stabilisieren Sie die Maus dorsal, indem Sie Klebeband an den vier Extremitäten verwenden. Strecken Sie die Haut des Halses und heben Sie sie an. Entfalten Sie die Halshaut vom Kinn bis zum oberen Rand des Brustbeins und trennen Sie die Speicheldrüsen vom angrenzenden Bindegewebe.
Legen Sie die gemeinsame Scheide der Halsschlagader frei, indem Sie die Muskeln entlang einer Seite der Luftröhre trennen. Belichten Sie das Operationsfeld mit einem Retraktor oder sterilen Mulltupfer und lösen Sie die Halsschlagader und lassen Sie ein freies 8-0 Seidennaht, ohne sie zu befestigen, um sicherzustellen, dass der Vagusnerv nicht beschädigt wird. Sezieren Sie das distale Ende des ECA und ligiieren Sie die Gefäße zweimal in distaler Position.
In der Mitte des doppelt ligierten Filamentsegments trennen sich die ECA und erzeugen einen Gefäßstumpf. Lassen Sie eine Seidennaht um den ICA herum, ohne ihn zu schließen. Ordnen Sie eine Ligatur für das Filament um den ECA-Stumpf vor.
Schließen Sie es erst nach erfolgreichem Einsetzen des Filaments. Schließen Sie ICA und CCA vorübergehend mit einer Naht oder einem Mikroclip. Machen Sie mit einer mikrovaskulären Schere einen Schnitt in die ECA und setzen Sie ein 5-0 alternativ 4-O Prolene-Filament ein und schieben Sie es in CCA.
Schließen Sie die Ligatur am ECA, während Sie den Mikroclip am ICA und CCA abnehmen. Ziehen Sie das Filament vorsichtig zurück und stellen Sie den ECA-Stumpf in Schädelrichtung ein, während Sie das Filament durch die Bifurkation in die ICA einspritzen. Platzieren Sie die Filamentspitze medial in einem Winkel von etwa 30 Grad zur Trachealmittellinie in horizontaler Ebene und drücken Sie sie in ICA.
Bei der ACA-MCA-Bifurkation wird ein Widerstand beobachtet. Bewegen Sie das Filament bis zu drei Millimeter nach vorne und perforieren Sie den rechten ACA. Ziehen Sie das Filament schnell zum ECA-Stumpf zurück, damit Blut im Subarachnoidalraum fließen kann.
Legen Sie das Filament für 10 Sekunden in diese Position. Ziehen Sie das Filament zurück. Der CCA kann vorher vorübergehend geschlossen werden, um einen übermäßigen Blutverlust zu vermeiden, und dann das Filament zurückziehen.
Ligatieren Sie die ECA mit vorgefertigten Nähten und öffnen Sie die CCA erneut, wenn Sie sie zuvor geschlossen haben. Das Vorhandensein von Muskelzittern, ipsilateraler Myose, Atemgassen, verändertem Herzrhythmus und Harninkontinenz kann ein Beweis für eine erfolgreiche Operation sein. Stellen Sie sicher, dass keine Blutungsleckage auftritt und desinfizieren Sie die Haut.
Nähen Sie die Wunde. Legen Sie die Maus in eine Thermobox und warten Sie, bis das Tier genügend Bewusstsein hat, um ein sternales Liegerad zu haben. Um die Schmerzen zu lindern, verabreichen Sie 1,2 Milligramm pro Milliliter Paracetamol.
Mit einem Nagetierscanner auf einem Mauskopfresonator MRT nach 24 Stunden Operation durchführen, Legen Sie die Maus auf eine beheizte zirkulierende Wasserdecke bei 37 Grad Celsius. Führen Sie zunächst einen Kurzübersichtsscan durch, um drei orthogonale Slice-Pakete zu erfassen. Verwenden Sie dann eine hochauflösende T2-gewichtete 2D-Turbo-Spin-Echosequenz für die Bildgebung.
Übertragen Sie die Daten in das DICOM-Bildformat und verwenden Sie die Imagej-Software für die SAH-Sortierung und Volumetrie von Blutgerinnseln. Um die korrekte Blutungsstelle zu gewährleisten und andere intrakranielle Pathologien auszuschließen, wurden MRT-Scans 24 Stunden postoperativ durchgeführt. Der SAH-Blutungsgrad wurde basierend auf T2-gewichteten MRT-Scans quantifiziert.
Unter den untersuchten Mäusen wurden 14% der Tiere ohne radiologische Beweise für SAH oder Blutungen als blutend eingestuft. Die Mehrheit der Tiere zeigte Blutungsgrade zwischen eins und drei, und 10% zeigten Blutungsgrade viertens, die SAH entlang des Schlaganfalls und / oder ICH definiert waren. Das Gesamtblutungsvolumen jedes SAH-Grades, basierend auf der SAH-Dicke, wurde quantifiziert, was zur Bestimmung des Blutungsbereichs beiträgt.
Das berechnete Blutungsvolumen basierend auf der axialen SAH-Dicke zeigte signifikante Unterschiede in ihren entsprechenden Untergruppen Grad eins bis drei. Während der gesamten Operation ist eine gründliche Sezierung des umgebenden Bindegewebes entscheidend für die korrekte Positionierung der Nähte. Stellen Sie sicher, dass die Länge des ECA-Stumpfes ausreicht, damit Sie einen komfortablen Arbeitsraum für die Ligatur, den Schnitt und das Einsetzen des Filaments haben.
Schieben Sie das Filament niemals nach vorne, wenn Sie vor der MCA-ACA-Bifurkation Widerstand verspüren, um eine vorzeitige Gefäßperforation zu verhindern.
