Il nostro protocollo è importante perché garantisce la purezza come controllo di qualità. Promuove anche gravi prestazioni di fermentazione e consistenza della resa nella fermentazione dei batteri lattici. Il vantaggio principale di questa tecnica è che può migliorare le prestazioni di fermentazione dei batteri dell'acido lattico attraverso la purezza, la vitalità e la funzionalità delle cellule.
Questa tecnica è facile da usare e può essere facilmente eseguita da qualsiasi persona grazie all'uso di solo attrezzature di base senza molti requisiti tecnici. Philip Yeboah è il nostro assistente di ricerca laureato e dimostrerà la procedura. Per iniziare, prendi lo stock di glicerolo preparato di batteri lattici, o ceppi LAB, in provette da centrifuga da due millilitri dal congelatore ultrabasso a meno 80 gradi Celsius.
Non permettere loro di scongelarsi prima dell'uso. Pulire e disinfettare l'apertura dei tubi della centrifuga con alcool al 70% e vortice delicatamente prima dell'uso. Pipettare circa 250 microlitri della coltura LAB stock dalle provette da centrifuga alle provette MRS fresche da due millilitri.
Vortice delicatamente le provette, parafilmarle e incubarle anaerobicamente durante la notte a 42 gradi Celsius per 12-16 ore. Quindi, prendere circa 500 microlitri dalle colture coltivate durante la notte dalle provette MRS da due millilitri alle provette MRS da sette millilitri fresche, vorticele e incubarle anaerobicamente durante la notte a 42 gradi Celsius per 12-16 ore. Valutare la crescita microbica misurando la densità ottica o la crescita delle colture a 610 nanometri con uno spettrofotometro UV visibile e registrare risultati accettabili tra 0,7 e 0,9.
Strisciare le colture notturne dai tubi MRS da sette millilitri su piastre di agar MRS e MRCMPYR e incubarle anaerobicamente per 72 ore a 42 gradi Celsius. Prelevare le colonie isolate dalle piastre di agar, trasferirle in provette MRS fresche da sette millilitri, vortice delicato e incubarle anaerobicamente durante la notte a 42 gradi Celsius per 12-16 ore. Conservare le piastre di agar contenenti i ceppi isolati a quattro gradi Celsius in frigorifero per una settimana.
Successivamente, misurare e confermare la densità ottica dalle provette MRS da sette millilitri delle colture LAB isolate dalle piastre striate a 610 nanometri e utilizzarle come colture di lavoro per tutti gli esperimenti correlati. Utilizzare nove millilitri di acqua peptone per eseguire l'inquinamento decuplicato delle colture LAB coltivate dalle provette MRS da sette millilitri finali per ottenere un rapporto da 1 a 10. Prelevare circa 250 microlitri dalle opportune delusioni seriali per tutti gli esperimenti di fermentazione e attivare il brodo contenente i ceppi trasferendoli in brodo MRS fresco da sette millilitri e incubandoli anaerobicamente a 42 gradi Celsius per 16 ore.
Ripetere i passaggi per garantire una crescita cellulare praticabile e superiore da colture LAB. La crescita morfologica cellulare dei ceppi di S9 e LB6 lactobacillus bulgaricus coltivati con il protocollo di controllo di qualità e dei ceppi di S9 lactobacillus bulgaricus coltivati senza il protocollo di controllo di qualità sono mostrati qui. I ceppi sono stati striati in triplice copia e sono stati incubati anaerobicamente a 42 gradi Celsius per 72 ore.
Quando si tenta questa procedura, assicurarsi di disinfettare i tubi di coltura dal congelatore con alcol al 70% per prevenire la contaminazione incrociata. La misurazione della densità ottica delle colture di crescita dovrebbe essere sempre compresa tra 0,7 e 0,9. Seguendo questo protocollo, è possibile ottenere fermentazioni LAB efficienti o operazioni di bioprocessing con un uso superiore della coltura.
