La tomografia a coerenza ottica è ampiamente utilizzata nella diagnosi clinica di diverse malattie della retina, ma è ancora difficile da applicare nei modelli murini. Questo protocollo descrive come gestire la tecnica OCT negli animali. Questa tecnologia può essere applicata ad animali con diverse dimensioni del bulbo oculare.
Consente l'imaging della sezione trasversale retinica non invasivo, ad alta risoluzione e in tempo reale, insieme a misurazioni quantitative dello spessore della retina. L'OCT aiuta nella diagnosi della retinopatia identificando le caratteristiche della lesione come la posizione, la gamma, la forma e le dimensioni delle lesioni, nonché tutte le sospette anomalie retiniche come la neovascolarizzazione retinica. Questo protocollo è applicabile agli studi sugli animali o alle malattie del fondo oculare, comprese le malattie della retina.
Prima di iniziare la procedura, essere preparati e seguire il protocollo passo dopo passo. Esegui l'esperimento quando l'animale è anestetizzato. Si dovrebbe essere in grado di ottenere immagini OCT di buona qualità dopo un po 'di pratica.
Per iniziare, accendere il computer e avviare il software. Fare clic sul pulsante del programma di test per completare il programma di test. Quindi, accendere il termostato e preriscaldarlo a 37 gradi Celsius.
Dopo il test del programma, avviare la procedura del modulo dello Strumento di personalizzazione di Office. Crea un nuovo soggetto e inserisci le informazioni del mouse. Quindi, preriscaldare la coperta elettrica e coprirla con asciugamani chirurgici.
Posizionare il topo anestetizzato sulla piattaforma della coperta elettrica e rivestire immediatamente entrambi gli occhi con gel ialuronato di sodio medico. Quindi, posizionare una lente a contatto 100D sulla cornea del topo con il lato concavo che tocca il gel ialuronato di sodio sulla superficie corneale. Quindi, posizionare il mouse sulla piccola piattaforma animale a temperatura costante del dispositivo cSLO.
Regolare l'angolo della lente a contatto con una pinza per mantenere la pupilla al centro della lente. Perfeziona le regolazioni della testa per rendere l'occhio rivolto dritto in avanti. Fare clic sul pulsante Strumento di personalizzazione di Office, scegliere il modulo mouse e avviare il programma cSLO.
Quindi, utilizzare la leva operativa per spostare lentamente la lente preimpostata verso la lente a contatto. Effettuare ulteriori regolazioni per allineare l'immagine del polo antero-posteriore, centrandola sulla testa del nervo ottico. Avviare quindi il programma dello Strumento di personalizzazione di Office e fare clic sull'indicatore di stato verso l'alto e verso il basso finché non viene visualizzata l'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office.
Regolare l'intervallo minimo compreso tra 0 e 20 e l'intervallo massimo tra 40 e 60. Quindi, regolare la distanza dell'obiettivo preimpostata e la direzione della posizione fino a ottenere un'immagine OCT ideale. Selezionare la posizione di scansione spostando la linea standard nel cSLO.
Quindi, fare clic su Media per sovrapporre il segnale dell'immagine cSLO e OCT e fare clic sul pulsante di scatto per acquisire l'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office SLO. Dopo l'esperimento, rimuovere la lente a contatto 100D e applicare il gel per gli occhi levofloxacina per proteggere la cornea. Per la correzione della stratificazione retinica, fare clic su Esame carico nell'interfaccia dello Strumento di personalizzazione di Office e richiamare le immagini dello Strumento di personalizzazione di Office da una finestra popup.
Quindi, fare doppio clic sull'immagine nel contenitore multimediale per visualizzarla sullo schermo. Quindi, fare clic sul rilevamento dello strato per completare la stratificazione automatica sulla retina. Dopo aver selezionato la linea di divisione su entrambi i lati del livello preparato per l'analisi, fate clic su Modifica livello per regolare la spaziatura e l'intervallo limite.
Quindi, modificare la linea spostando il cerchio rosso. Per misurare lo spessore della laminazione retinica, fare clic sul pulsante indicatore di misura e selezionare la linea di demarcazione del livello da analizzare per visualizzare il limite del livello sull'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office. Quindi, selezionate Connetti con layer e rimanete connessi in movimento.
Quindi, selezionare l'area in cui visualizzare i risultati e fare clic sulla posizione da analizzare sull'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office per visualizzare la linea di misurazione. Fare clic sulla colonna successiva per le misurazioni successive e per visualizzare i dati precedenti. Per misurare lo spessore completo della retina, selezionare la riga uno e la linea sette nell'elenco nell'angolo in alto a destra.
Quindi, dall'aspetto della struttura retinica sul bordo della papilla ottica, misurare quattro valori a intervalli di distanza di 200 micrometri sul righello orizzontale. Le immagini OCT dei topi C57BL / 6 hanno mostrato vari strati retinici con una chiara demarcazione. Al contrario, i topi knockout Vldlr hanno mostrato lesioni iperriflettenti anormali.
Le immagini OCT hanno mostrato alcune bande riflettenti centrali sulle superfici retiniche dei topi knockout Vldlr. Queste bande aderivano al vaso retinico, essendo coerenti con le caratteristiche OCT del distacco vitreo incompleto. Una lesione iperriflettente è apparsa sullo spazio sottoretinico e si è diffusa allo strato nucleare esterno, ma non ha sfondato lo strato plessiforme esterno.
L'aspetto OCT di questa lesione era coerente con i risultati patologici. La sezione patologica ha mostrato che la neovascolarizzazione ha rotto lo strato di epitelio pigmentato retinico, i segmenti interno-esterno del fotorecettore e la membrana limitante esterna, invadendo lo strato nucleare esterno, ma non lo strato plessiforme esterno. Un'altra banda di lesione iperriflettente, situata nello spazio sottoretinico, non ha coinvolto lo strato nucleare esterno.
Coerentemente con i risultati patologici, questa neovascolarizzazione sottoretinica non ha sfondato la membrana limitante esterna. Il confronto dello spessore retinico dell'occhio destro nelle direzioni temporale, nasale, superiore e inferiore del polare posteriore tra i due gruppi ha rivelato che lo spessore retinico dei topi knockout Vldlr era significativamente inferiore a quello dei topi C57BL / 6J. Quando si esegue il protocollo, posizionare correttamente una lente a contatto 100D sulla cornea, quindi regolare la posizione dell'immagine.
Selezionare la posizione di scansione e sovrapporre l'immagine prima di scattare. Seguendo questa procedura, è possibile l'OCT del segmento anteriore, che richiede la modifica della distanza tra la lente preimpostata e la cornea. Può mostrare la cornea, la camera anteriore, l'iride, il corpo ciliare e la lente.
Questa tecnica fornisce uno strumento importante per la ricerca sulla retinopatia in piccoli modelli animali, promuovendo il rilevamento non invasivo e la misurazione della retinopatia nella ricerca di base.
