La denervazione simpatica renale è un potenziale trattamento per l'ipertensione, che è stato dimostrato da molti studi clinici. Questa tecnica denerva i nervi renali a flusso libero senza danni alle arterie renali. Inoltre, è un modello semplice, critico, ripetibile e standardizzato.
A dimostrare la procedura sarà Ming Wang, un assistente di laboratorio del mio laboratorio. Iniziare disinfettando il tavolo operatorio con etanolo al 70%, quindi regolare la temperatura della piastra elettrica a 37 gradi Celsius. Prima dell'intervento chirurgico, sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici, comprese le forbici microchirurgiche, le pinze dritte sottili, le pinze curve sottili, le pinze emostatiche, le garze sterili e la pesatura della carta a 121 gradi Celsius per 30 minuti.
Dopo aver anestetizzato un topo maschio C57BKL/6 di 14 settimane, rimuovere i peli sulla schiena con un rasoio, quindi applicare un unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza. Posizionare il mouse su un tavolo operatorio in posizione dorsale. Scorri e pulisci l'area rasata con povidone-iodio, seguita da tre salviette con etanolo al 70%.
Usando una lama sterile di bisturi, fai un'incisione di un centimetro perpendicolare alla coda dietro l'orecchio sopra la scapola della gamba anteriore. Quindi, utilizzare un emostatico sterile per creare un tunnel sottocutaneo sotto la pelle e creare una tasca per la pompa. Inserire delicatamente una pompa osmotica riempita con angiotensina II nella tasca, assicurando spazio libero sufficiente per suturare la ferita senza allungare la pelle.
Sutura il muscolo con suture Vicryl 6-0 interrotte e chiudere la pelle con suture di nylon 4-0 interrotte. Quindi tamponare e pulire il sito della ferita con povidone-iodio. Mettere tutti gli strumenti chirurgici in uno sterilizzatore per 10 secondi e sostituire i guanti sterili tra un intervento chirurgico e l'altro.
Monitorare il mouse fino a quando non è completamente recuperato. Monitorare attentamente e osservare la guarigione delle ferite almeno due volte al giorno durante la prima settimana e una volta al giorno successivamente, inclusi arrossamenti, gonfiore e infezioni. Eseguire immediatamente la dissezione se il topo muore durante l'infusione di angiotensina II.
Misurare la pressione sanguigna al basale e ogni settimana dopo l'infusione di angiotensina II con il metodo di pletismografia della coda-cuffia nei topi coscienti. Una settimana dopo l'infusione di angiotensina II, selezionare i topi con pressione sanguigna elevata e registrare il loro peso. Scegli animali con un peso minimo di 24 grammi per la chirurgia di denervazione renale.
Quindi, rimuovere i peli sull'addome di un topo anestetizzato con un rasoio, quindi posizionare il mouse sul tavolo operatorio. Tenere l'addome in alto e fissare gli arti con del nastro adesivo. Disinfettare la pelle addominale con povidone-iodio, seguita da tre salviette con etanolo al 70%.
Dopo aver praticato un'incisione addominale ventrale mediana di due centimetri, tirare indietro l'intestino con una garza imbevuta di soluzione salina a 37 gradi Celsius per esporre l'arteria renale sinistra. Con attenzione, ma senza mezzi termini, sezionare il grasso lontano dall'arteria renale usando una pinzetta curva. Usando forbici affilate sterili, tagliare la carta pesata in un rettangolo delle stesse dimensioni dell'arteria renale.
Tagliare diversi pezzi di carta pesata alla volta per mantenere la forma uguale. Immergere la carta pesata in una soluzione di etanolo fenolico al 10% per almeno 30 secondi. Coprire la superficie dell'arteria renale sinistra e avvolgere la nave con la carta pesata per due minuti.
Utilizzare una garza per proteggere i tessuti circostanti per evitare che la carta pesata tocchi il rene e l'intestino. Ripetere la stessa procedura per l'arteria renale destra. Dopo l'intervento chirurgico, riposizionare i muscoli nella loro posizione iniziale e chiudere il peritoneo con suture Vicryl 6-0 in uno schema di sutura interrotto, quindi chiudere la pelle con suture di nylon 4-0 interrotte.
Monitorare tutti i mouse fino a quando non sono completamente recuperati. Un aumento significativo della pressione arteriosa sistolica è stato osservato una settimana dopo l'infusione di angiotensina II. Il gruppo angiotensina II con denervazione simpatica renale, o RDN, ha mostrato una significativa riduzione della pressione arteriosa sistolica rispetto al gruppo sham angiotensina II a 21 giorni dopo la procedura RDN.
Nessuna differenza significativa è stata osservata tra i gruppi sham e RDN a due settimane dopo la procedura RDN. La colorazione con ematossilina ed eosina del nervo simpatico renale e dell'arteria renale è mostrata qui. Nessun ispessimento dello strato intima dell'arteria renale è stato osservato nei quattro gruppi.
Rispetto ai nuclei shams group, frammentati e picnotici, la digestione e il gonfiore del tessuto endoneuriale sono stati osservati in entrambi i gruppi RDN. L'immunoistochimica dei fasci nervosi ha rivelato che l'espressione della tirosina idrossilasi era significativamente diminuita nel gruppo RDN e RDN angiotensina II rispetto a entrambi i gruppi shams. Il contenuto di noradrenalina corticale renale nei reni denervati sia nel gruppo normotensivo che in quello iperteso è stato significativamente ridotto rispetto al rene innervato.
La colorazione di Masson non ha mostrato un notevole aumento dell'intima media dell'aorta addominale tra i gruppi. Qui sono mostrate immagini rappresentative del miocardio in diversi gruppi. L'ipertrofia cardiaca indotta dall'infusione di angiotensina II è stata migliorata dal trattamento con RDN dalla diminuzione della fibrosi interstiziale e delle dimensioni dei cardiomiociti.
Durante la procedura, non toccare il fenolo al tessuto circostante tranne che all'arteria renale perché può causare ostruzione intestinale, infezione addominale e stenosi dell'arteria renale. Questo metodo può stabilire un modello RDN standardizzato per aiutare a studiare i meccanismi che controllano l'ipertensione. Le future applicazioni di questa tecnica possono contribuire ad ampliare i percorsi che sottolineano il processo di ipertensione e ipertrofia cardiaca.
