La misura in vitro è una misura adatta per ispezionare la dissoluzione di soluzioni di preparati solidi di medicina cinese che tengono conto degli effetti della disintegrazione del farmaco, del comportamento di dissoluzione e del contenuto del principio attivo. Il rilevamento di componenti multi-indice può riflettere meglio l'influenza neutra e la differenza di dissoluzione di diversi componenti. A dimostrare la procedura sarà Quinyun Du, uno studente straordinario del mio laboratorio.
Per iniziare, preparare la soluzione madre della sostanza di riferimento pesando separatamente 10,6 milligrammi di salidrocida, 5,24 milligrammi di acido gallico e 5,21 milligrammi di acido etilgallico su una bilancia analitica elettronica. Quindi aggiungerli singolarmente in un matraccio tarato da cinque millilitri. Quindi aggiungere metanolo di grado HPLC per dissolvere e diluire a cinque millilitri.
E infine, agitare bene per ottenere la soluzione madre della sostanza di riferimento con concentrazioni di massa di 2,120, 1,048 e 1,042 milligrammi per millilitro, rispettivamente. Per preparare la soluzione del campione di prova, estrarre 2,8 grammi di granuli di rhodiola con 10 millilitri di metanolo di grado HPLC, utilizzando una macchina per la pulizia ad ultrasuoni per 30 minuti. Quindi filtrarlo con un filtro da 0,22 micrometri per il test di adattabilità del sistema.
Quindi preparare una soluzione di riferimento mista che contiene 0,590 milligrammi per millilitro di salidrocida, 2,030 milligrammi per millilitro di acido gallico e 1,930 milligrammi per millilitro di gallato di etile. Per ottenere il contenuto teorico di ciascun componente caratteristico dei granuli di rhodiola, posizionare 2,8 grammi di granuli di rhodiola in un matraccio conico da 500 millilitri. Aggiungere 200 millilitri di acqua ultrapura ed estrarre ad ultrasuoni per 60 minuti.
Quindi filtrarlo con un filtro da 0,22 micrometri. Dopo aver determinato il contenuto della soluzione di prova, impostare le condizioni cromatografiche per la cromatografia liquida ad alte prestazioni come descritto nel manoscritto. Per studiare la relazione lineare, diluire le soluzioni madre di riferimento di acido gallico e gallato di etile e le soluzioni madre di riferimento di salidrocida per ottenere la soluzione di concentrazione del gradiente per disegnare una curva standard.
Quindi iniettare 10 microlitri della soluzione di riferimento mista nel sistema HPLC sei volte al giorno ed eseguire i campioni con le stesse condizioni HPLC, registrando l'area di picco di ciascun componente della caratteristica. Quindi iniettare 10 microlitri della soluzione campione preparata e determinare le aree di picco dell'HPLC in base alle condizioni cromatografiche a diversi intervalli di tempo. Prelevare sei campioni dello stesso lotto di granuli di rhodiola per preparare la soluzione del campione di prova come dimostrato in precedenza e iniettare 10 microlitri di ciascun campione nel sistema HPLC.
Eseguire i campioni come dimostrato in precedenza per determinare la riproducibilità. Dopo aver preparato sei porzioni dello stesso lotto di granuli di rhodiola per la soluzione di prova, aggiungere circa il 50% del substrato di riferimento di ciascun componente indice. Eseguire questi campioni nel sistema HPLC, come illustrato in precedenza, per calcolare il tasso di recupero come descritto nel manoscritto.
Per eseguire il test di dissoluzione, aggiungere 100 millilitri di acqua ultrapura nella tazza di dissoluzione dell'apparato di dissoluzione del farmaco e mantenere la temperatura a 37 gradi Celsius con una velocità di rotazione di 100 giri / min. Quindi aggiungere 2,8 grammi di granuli di rhodiola in una tazza di dissoluzione e iniziare a registrare immediatamente la durata della dissoluzione. Raccogliere un totale di un millilitro del campione con un iniettore a diversi intervalli di tempo e recuperare immediatamente il volume nel bicchiere di dissoluzione con un mezzo di dissoluzione alla stessa temperatura.
Riempire immediatamente i campioni raccolti attraverso una membrana microporosa da 0,22 micrometri e prelevare il successivo filtrato. Dopo aver determinato il contenuto di ciascun componente, in ogni punto temporale mediante HPLC, calcolare la dissoluzione di ciascun punto temporale e la dissoluzione cumulativa come descritto nel manoscritto. Sono stati ottenuti il cromatogramma del campione e la soluzione di riferimento.
Tre diversi picchi corrispondenti all'acido gallico, al salidrocida e al gallato di etile mostrano che il gradiente di eluizione aveva una buona risoluzione per i tre componenti dell'indice nei granuli di rhodiola. Le curve di dissoluzione di ciascun componente mostrano che la dissoluzione cumulativa dell'acido gallico era superiore all'80% dopo un minuto. Mentre per il salidrocida e l'acido etilgallico, era superiore al 65% dopo cinque minuti.
Tuttavia, la dissoluzione cumulativa di ciascun componente dell'indice è diminuita dopo 30 minuti. Regolando il problema della diluizione della curva standard, in base all'esperimento preliminare del trattamento del campione, i campioni devono essere raccolti rapidamente per evitare che manchino il punto temporale di raccolta speciale.
