I modelli animali di sindrome del midollo centrale potrebbero successivamente beneficiare della ricerca preclinica. La strategia in questo studio è vantaggiosa perché ha permesso di studiare i meccanismi di lesione producendo risultati coerenti. L'attuale protocollo di simulazione della sindrome del midollo centrale nei topi ha migliorato la ripetibilità e ridotto al minimo il danno operativo nei confronti degli animali da esperimento.
Evitando la rottura della loro struttura anatomica. Inizia organizzando gli strumenti chirurgici e la piattaforma coassiale per la lesione del midollo spinale. Una volta che il topo è stato adeguatamente anestetizzato, identifica la piccola sporgenza lungo la linea mediana dietro il collo dell'animale, che è il processo spinoso della seconda vertebra toracica, o T2. Radere i peli che circondano il processo spinoso T2 dietro il collo e disinfettare la pelle con tre cicli alternati di soluzione Iota 4 ed etanolo al 75%.
Quindi, posizionare il mouse in posizione prona sul tavolo operatorio. Applicare un unguento per gli occhi per proteggere gli occhi. Posizionare un cuscinetto di 3-4 millimetri di spessore sotto il torace dell'animale per facilitare l'inarcamento della curva del rachide cervicale, che consente l'esposizione dello spazio interlaminare e anche un passaggio d'aria senza ostacoli durante l'intervento chirurgico.
Successivamente, mentre lavori al microscopio, usa un bisturi per fare un'incisione longitudinale da 1 a 1,5 centimetri centrata sul processo spinoso T2 ed esponi lo strato fasciale. Con l'aiuto di micro forbici, rimuovere una porzione di tessuto adiposo al di sopra di T2 per esporre chiaramente il processo spinoso T2. Usando le microforbici, separa i muscoli trapezio bilaterale e romboide da C5 a T2 lungo la linea mediana.
Quindi, separare i muscoli sulla lamina delle vertebre da C5 a T2 e utilizzare micro divaricatori per ritrarre lo strato muscolare ai lati. Tagliare i muscoli multifidi e spinali cervicali presenti sulla superficie delle vertebre. Localizzare la vertebra T2 identificando il punto più alto dei processi spinosi.
Quindi, continuare a sondare i processi spinosi successivamente da T2, spostandosi verso l'estremità rostrale, fino a quando non si trova la sesta vertebra cervicale o C6. Usando una pinza, sollevare la lamina C6 per esporre il midollo spinale prima di tagliare la lamina. Clamp le faccette articolari da C6 a C7 con lo stabilizzatore vertebrale e bloccarlo.
Allineare la punta del peso con il midollo spinale esposto, assicurandosi che la parte inferiore della punta sia parallela alla superficie dorsale del midollo spinale. Regolare la manica in modo che il peso comprima il midollo spinale. Interrompere la regolazione quando il peso mantiene una posizione relativa costante con il midollo spinale.
Rimuovere il peso e lo stabilizzatore vertebrale dopo aver lasciato una compressione di cinque minuti. Al microscopio, osservare eventuali cambiamenti di colore del midollo spinale derivanti dalla compressione. Risciacquare il sito dell'operazione con soluzione fisiologica sterile tamponata con fosfato.
Successivamente, utilizzare l'aspirazione per pulire l'area. Suturare i muscoli e la pelle a strati utilizzando una sutura 6-0 in polipropilene non assorbibile. Dopo aver disinfettato l'area chirurgica, posizionare il mouse su un tappetino caldo fino a quando non riprende piena coscienza prima di rimetterlo nella sua gabbia.
La colorazione con ematossilina ed eosina o H&E della sezione sagittale del midollo spinale ha suggerito che l'area danneggiata nella materia grigia era più ampia nel gruppo con lesioni gravi rispetto a quella nel gruppo con lesioni lievi. Le sezioni coronali di HE hanno mostrato che in entrambi i gruppi, la lesione esisteva principalmente nella materia grigia. Nel gruppo grave, sebbene la struttura della sostanza bianca che circonda la sostanza grigia fosse più colpita, il suo contorno è stato comunque mantenuto.
La colorazione immunofluorescente ha anche rivelato che, sebbene la sostanza bianca che circonda la materia grigia fosse colpita nel gruppo grave, era ancora relativamente intatta. Non sono stati trovati globuli rossi nelle sezioni sagittali di HE a sette giorni dopo la lesione, sia nel gruppo lieve che in quello grave. La colorazione blu di Prussia ha rivelato l'emosiderosi solo nel gruppo grave.
L'immunofluorescenza ha rivelato aree di elevata espressione di GFAP e Iba1 sia in lesioni lievi che gravi, suggerendo una risposta infiammatoria e la formazione di una cicatrice gliale. Inoltre, il gruppo grave ha mostrato un'area di lesione più ampia rispetto al gruppo lieve. La risonanza magnetica ha suggerito che in entrambi i gruppi c'era un cambiamento di segnale ipo intenso nella lesione con un contorno di segnale elevato.
Il gruppo grave ha mostrato un'area di segnale ipo intenso significativamente più ampia. La rimozione dei tessuti molli davanti e dietro la lamina facilita il più possibile il rilassamento della lamina e il danneggiamento comprovato della campata tagliata durante il taglio parallelo. L'attuale volume di fase del protocollo modella la sindrome del midollo centrale e consente un'ulteriore comprensione ed esplorazione del segnale.
