La nostra ricerca si è concentrata principalmente sull'impatto dei cordoni ombelicali dei veicoli extracellulari derivati dalle MSC sulla guarigione delle ferite a livello di singola cellula. E l'obiettivo principale di questa parte dello studio è quello di stabilire un modello di massa di lesione stabile, acuto e a tutto spessore, che è una base cruciale per i nostri esperimenti. Il processo di guarigione delle ferite è estremamente complesso e coinvolge l'interazione sincronizzata di varie cellule nel tempo e nello spazio.
La singola cellula e il sequenziamento sono diventati l'ultimo metodo per studiare l'ingegnosità cellulare e prevedere la differenziazione cellulare e le traiettorie di sviluppo durante la guarigione ossea. E ottenere la sospensione di una singola cellula di alta qualità da tessuti distorti è la chiave di questa ricerca. Il nostro protocollo crea un modello di topi con lesioni più stabile e a tutto spessore, evitando problemi di ciclo dei capelli e tensione laterale e impedendo che i graffi del mouse e l'attività naturale influiscano sui risultati.
Inoltre, utilizziamo gli enzimi misti per un'efficiente dissociazione dei tessuti, producendo sospensioni di singole cellule di alta qualità. Per iniziare, assegna in modo casuale i topi ai gruppi di controllo e sperimentali e ospitali in una struttura specifica per animali priva di agenti patogeni. Fornire ai topi un accesso illimitato al cibo standard e all'acqua del rubinetto in autoclave.
Fissare delicatamente il mouse in posizione prona e pulire l'addome con tamponi di cotone imbevuti di alcol. Dopo aver anestetizzato il topo, applicare la crema depilatoria sulla schiena e attendere due minuti. Strofinare delicatamente la crema con una garza umida per evitare di danneggiare la pelle.
Quindi pulire la pelle con una garza sterile asciutta. Disporre il punzone per biopsia cutanea in autoclave, le forbici, le pinze e il panno chirurgico fresco su una piattaforma sterile. Posizionare il topo anestetizzato in posizione prona e disinfettare la pelle dorsale con tre tamponi alternati di Betadine e alcol al 70%.
Immergi il timbro nell'inchiostro e fai un segno nella parte centrale superiore del dorso del mouse. Usando le forbici chirurgiche, asportare con cura l'intero strato cutaneo della schiena lungo il segno circolare, esponendo completamente lo strato muscolare. Lasciare la ferita aperta senza medicazione, permettendole di formare naturalmente una crosta.
Somministrare 0,1 millilitri di buprenorfina cloridrato al 10% per via sottocutanea vicino alla ferita. Riposizionare il mouse nella sua gabbia individuale in posizione prona. Dopo l'anestesia, osservare e fotografare la ferita del topo ogni due giorni per misurare le dimensioni della ferita.
Per via sottocutanea, iniettare 100 microgrammi di esosoma derivato da cellule staminali mesenchimali del cordone ombelicale umano attorno al sito di incisione di un topo anestetizzato del gruppo di trattamento. Iniettare 200 microlitri di PBS intorno al sito di incisione del topo del gruppo di controllo. Il posizionamento delle ferite su entrambi i lati di un topo ha comportato notevoli differenze nell'area della ferita a causa dell'elasticità della pelle del topo.
Il gruppo di trattamento con esosoma derivato da cellule staminali mesenchimali del cordone ombelicale umano ha mostrato una guarigione più rapida rispetto al gruppo di controllo. La guarigione completa è avvenuta più rapidamente nel modello a timbro che nel gruppo ad anello metallico suturato.
