Lo studio indaga gli effetti cardioprotettivi di Munziq sul danno da perfusione miocardica nei ratti, in particolare quelli con anomalie nei fluidi corporei. Il nostro obiettivo è determinare se il pretrattamento con Munziq può mitigare il danno da ischemia-riperfusione miocardica, indurre cambiamenti patologici, proteggere la funzione cardiaca ed esplorare i suoi meccanismi, in particolare attraverso la via di segnalazione NF-kappa B. Il nostro gruppo di ricerca si è concentrato sullo studio del danno da ischemia-riperfusione miocardica.
La nostra scoperta suggerisce che l'inibizione della via NF-kappa B può alleviare il danno da ischemia-riperfusione miocardica, che può mitigare il danno da ischemia-riperfusione miocardica inibendo la via NF-kappa B, influenzando la funzione mitocondriale e il metabolismo miocardico. La nostra ricerca identifica Munziq come una potenziale terapia per il danno da ischemia-riperfusione miocardica, facendo progredire il campo esplorando un approccio di medicina naturale. Questa scoperta è significativa in quanto prende di mira la via NF-kappa B, un nuovo meccanismo per il trattamento del danno da ischemia-riperfusione miocardica.
I nostri risultati aprono la strada a un'ulteriore applicazione clinica della medicina tradizionale nella gestione delle malattie cardiovascolari. Per iniziare, ospita i ratti nel fluido corporeo anormale, o gruppo ABF, in un ambiente controllato all'interno di scatole climatiche e fornisci mangime ordinario. Fornire ai ratti mangime ordinario mescolato con cibo secco freddo, vale a dire semi di orzo e coriandolo, per 21 giorni per stabilire il modello ABF.
Utilizzando una tecnica di somministrazione intragastrica, somministrare cinque grammi per chilogrammo di Munziq ai ratti del gruppo Munziq per 21 giorni prima del danno da ischemia-riperfusione miocardica o dell'intervento chirurgico MIRI. Per stabilire il modello MIRI, dopo 21 giorni di pretrattamento, posizionare il ratto anestetizzato su un tavolo operatorio sterile. Eseguire una tracheostomia per consentire la respirazione assistita da ventilatore nel ratto.
Prima di aprire il torace, lavare il sito chirurgico con acqua saponosa, radere l'area e disinfettarla con una soluzione di iodio. Successivamente, utilizzando forbici, pinze e divaricatori sterili, apri la parete toracica per esporre il cuore e identificare l'arteria discendente anteriore sinistra, che si trova sulla superficie del cuore. Utilizzando una sutura 6-0, legare l'arteria per indurre l'ischemia regionale per 30 minuti.
Confermare l'occlusione efficace osservando un colore pallido nel miocardio. Dopo 30 minuti, rilasciare la legatura e lasciare la riperfusione per 120 minuti. Confermare la riperfusione del miocardio quando ritorna a un colore rosso vivo.
Dopo la riperfusione, utilizzare una provetta per la raccolta del sangue sottovuoto per raccogliere da uno a due millilitri di sangue dall'aorta addominale. Dopo l'eutanasia del ratto, utilizzare pinze e forbici sterili per raccogliere il tessuto del miocardio dall'area dell'infarto nel ventricolo sinistro. Mettere il tessuto raccolto in un contenitore sterile per ulteriori analisi.
Dopo aver raccolto il cuore infartuato di miocardio dal ratto stabilito da MIRI, utilizzare forbici e lama sterili per sezionare il cuore orizzontalmente in due metà lungo il punto medio dell'asse lungo del ventricolo sinistro perpendicolare alla direzione del cuore. Dividere una metà della parte apicale in due porzioni. Conservare una porzione in paraformaldeide al 4% a temperatura ambiente per un periodo compreso tra due e 24 ore per l'esame morfologico.
Mettere l'altra parte in glutaraldeide a quattro gradi Celsius per una o quattro ore per la microscopia elettronica. Quindi, dividi la parte base del cuore, comprese le aree ischemiche e non ischemiche, in due porzioni. Mettere una porzione in un crioviale e congelarla rapidamente in azoto liquido.
Trasferire il tessuto congelato in un congelatore a meno 80 gradi Celsius per i test di biologia molecolare. Centrifugare il sangue raccolto dalla vena cava inferiore a 1.000 g per 10 minuti. Conservare il siero separato in un congelatore a meno 80 gradi Celsius.
Posizionare le sezioni di tessuto fissate con formaldeide in un'incubatrice a 65 gradi Celsius per cuocere per 1,5-2 ore. Immergere le sezioni di tessuto cotte nello xilene per 10 minuti. Successivamente, immergere in sequenza le sezioni di tessuto in alcol anidro uno e due per cinque minuti ciascuna, seguite da alcol al 95%90%80% e 70% e infine in acqua distillata per cinque minuti ciascuna.
Colorare le sezioni di tessuto con ematossilina per tre minuti. Eseguire la differenziazione acida immergendo brevemente le sezioni di tessuto in una soluzione alcolica di acido cloridrico per uno o due secondi. Terminare la differenziazione risciacquando in acqua di rubinetto per cinque minuti.
Successivamente, immergere le sezioni di tessuto in acqua distillata, quindi in alcol al 70%80%90% e 95% per tre minuti ciascuna. Dopo aver immerso la sezione nell'alcol anidro uno e due, colorare le sezioni con lo 0,5% di eosina in etanolo per un minuto. Ora, sciacquare le sezioni in etanolo al 95% per rimuovere il colore rosso in eccesso.
Quindi, immergere le sezioni in etanolo anidro per cinque minuti, seguite dall'immersione in xilene uno e due per cinque minuti ciascuna. Montare le sezioni macchiate con balsamo neutro. Osservare i cambiamenti patologici nel tessuto al microscopio.
Il tessuto miocardico nel gruppo sham mostrava degenerazione granulare e vacuolare, limitata infiltrazione di globuli rossi e linfociti e occasionale dilatazione e congestione vascolare. Nel gruppo MIRI, c'era un grave danno al tessuto miocardico con estesa degenerazione granulare e vacuolare. Il danno miocardico è stato notevolmente grave nel gruppo ABF MIRI rispetto al gruppo MIRI di controllo, mostrando segni amplificati di degenerazione e infiltrazione tissutale.
Le cellule miocardiche trattate con Munziq sia nel gruppo di controllo che nel gruppo ABF MIRI hanno mostrato una ridotta degenerazione granulare e vacuolare con meno globuli rossi, infiltrazione di linfociti e congestione. Le cellule miocardiche nel gruppo sham hanno mantenuto intatta la struttura delle miofibrille, la lunghezza uniforme del sarcomero e numerosi mitocondri. Nel gruppo MIRI, le cellule miocardiche mostravano gonfiore, lunghezza variabile del sarcomero e miofilamenti interrotti, con esteso danno mitocondriale.
Il trattamento con Munziq ha ridotto il gonfiore delle cellule miocardiche e ha preservato la struttura miofibrillare, sarcomera e mitocondriale, in modo simile alle condizioni fittizie. I livelli sierici di cTn-T, CK-MB e ICAM-1 erano significativamente più alti nel gruppo ABF MIRI rispetto al gruppo MIRI di controllo. Il pretrattamento con Munziq ha ridotto notevolmente i livelli di cTn-T, CK-MB e ICAM-1 sia nel gruppo ABF che nel gruppo MIRI di controllo.
Il gruppo ABF MIRI ha mostrato un aumento dei livelli di malondialdeide e una diminuzione dei livelli di ossido nitrico nel tessuto miocardico rispetto al gruppo MIRI di controllo. Il pretrattamento con Munziq ha ridotto significativamente il contenuto di lattato deidrogenasi e malondialdeide, aumentando i livelli di ossido nitrico nel miocardio ischemico. Il gruppo ABF MIRI ha mostrato livelli elevati di interleuchina uno beta, interleuchina sei e TNF alfa, in particolare a livello proteico.
Il pretrattamento con Munziq ha ridotto i livelli sierici e di mRNA di interleuchina uno beta, interleuchina sei e TNF alfa, in particolare a livello proteico nel miocardio. I marcatori della via NF-kappa B erano sovraregolati nel tessuto MIRI, indicando l'infiammazione. Il trattamento con Munziq ha ridotto l'espressione dei marcatori della via, indicando una ridotta attivazione della via NF-kappa B.
