Vitreodynamic分析のための全硝子体液解剖

要約

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

要約

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

概要

この方法の目的は、細部にvitreodynamic分析の目的のために、死体の眼から、硝子体コアと皮質無傷で、全体、無傷の硝子体を単離するための技術です。硝子体生理学の分野が成長してきたように、このような流体力学の研究者としての学際的研究者は、硝子体¹の物理的および生体力学的特性を検討しています。そのためには、細部への学際的な研究者を支援するために、全体、無傷の硝子体を分離する技術が不可欠です。

セバーグら ²等^3は、ヒト死体の目にエレガントな全体硝子体解剖を実施し、その結果の説明図を示しました。しかし、使用される技術は、詳細に記載されなかった非専門家が独立した方法を複製することはできません。他の研究は、このような吸引または部分的切開などの簡単な方法を使用して、死体眼から硝子体を収穫しましたこれらは両方とも全体、無傷の硝子体にはなりません。 Gisladottis ら ⁴およびXu ら ^5は、死体の目から収穫硝子体液に透過性を調査します。硝子体抽出のない方法が記載されなかったので、それらはシリンジで硝子体液を吸引することを仮定しました。ワッツら ^6は、外科的手法でウサギ硝子体液を単離する方法を説明することによって、さらに一歩行ってきました。しかし、この方法だけではなく、硝子体コア硝子体皮質の単離をもたらします。シェイエら ^7は、後に4つのユニークな領域に硝子体を組織し、エレガントな分析のための各部分を分析する方法を説明しました。この技術は、しかしながら、全体としてそのまま硝子体をもたらさありません。

現在の技術は現在、死体の目で行われている生物物理学的実験を容易にするために開発されました。以前の方法は、記載のようにBOVEは、1）いずれも完全に全体の硝子体を分離しないため制限されている、2）収穫硝子体コアと皮質は3）硝子体の解剖学的構造が維​​持されていない、均質化されている、または4）解剖技術が十分に他の分野の研究者による複製のために詳述されていません。また、強​​膜と脈絡膜、硝子体の可視化の不透明度に起因するが、無傷の眼球に制限されています。これは、眼全体の内側にすることができる測定の精度と実現可能性を制限します。また、硝子体の周囲の解剖学的構造は、硝子体の生化学的および物理的性質の研究を混乱することができます。

近年では、硝子科学の本体は飛躍的に成長しており、全体の硝子体は、その個々の部分とは異なる特性を有することを信じる理由があります。 vitreodynamicsのresearcのための硝子体の物理的、生体力学的、および化学的特性を調査への関心の高まりがありますそのような薬物送達、硝子体内酸素⁸および硝子体切除などの臨床医学への応用を持っている時間、。硝子体を操作するための薬理学的物質を使用して薬理学的vitreodynamicsは、硝子体切除術の成果^9を改善するために使用することができます。生体力学的特性は、硝子体内薬物送達技術^10-12を改善するために使用することができる硝子体液の流れをモデル化するために使用されます。硝子体の様々なセグメントの物理的特性は、硝子体網膜酸素輸送^13を理解するために重要です。提案された硝子体切開法は、無傷硝子体液の種々の特性を研究するために使用することができます。これは、ベンチトップ実験をより見やすくして全体、無傷の硝子体上で行うことを可能にします。

要約すると、硝子体の研究のための現在の方法は、いずれの適切記載されていない、または不完全な分離に硝子体コアと皮質をもたらします。したがって、Eを実行する必要があります透明な眼モデルでxperiments死体の眼に存在する硝子体の解剖学的構造を保持したまま。

プロトコル

すべて摘出した目は、食肉処理場から入手し、すべての実験は、機関のバイオセーフティ法に従って行いました。

1. 表面に除核目を下に固定します。目の周りの過剰な組織を通じて組織ピンを配置し、発泡スチロールのボードにそれを固定することによってこれを行います。
2. 眼からperilimbal結膜を分析し、デタッチ。
   1. 輪部で結膜を切開し、ぶっきらぼう強膜からそれを分析するために微細な鉗子（0.3鉗子）とmicroscissors（ウェストコットのはさみ）を使用します。鈍的切開は、さらに切開を可能にするために進むように角膜輪部に沿って結膜をカット。
   2. できるだけ多くの強膜を露出させるためにすべての方法目（360度）の周りに結膜を削除します。
      注：これは、残りの手順の間に外科的ピンやピンセットで目を固定容易にするために、結膜の少量を残して便利です。
3. 一方に沿って十分な厚さの強膜フラップを作成目（手術用メスの刃69）の側面。
   1. 暗く着色された脈絡膜が表示されるまで、静かにメス（手術用メスの刃11）と強膜に切断して角膜縁に角膜​​輪部へ〜5ミリメ​​ートル強膜切開平行と3mmの後方を確認します。脈絡膜自体を切開しないように注意してください。
   2. それは内側に静かに脈絡膜を押すことにより、これらの組織との間の潜在的なスペースを大きくすることが可能になるまで慎重に、はさみ（鈍的切開を使用して）またはメスのいずれかで、強膜と脈絡膜の間に平面に沿って詳細に分析。
   3. T字型の切開を作成し、鋭いmicroscissorsとの最初の強膜切開に垂直な他の強膜切開を行います。
   4. そして、ぶっきらぼうに、基礎となる脈絡膜から強膜組織を除去し、穏やかに前述したように、強膜から離れて脈絡膜をプッシュする円周様式で解剖し続けています。
   5. 必要に応じて、強膜弁を拡大。
      1. 静かに強膜から脈絡膜を解剖鈍プロセス全体。
      2. 角膜輪部に垂直に切開が視神経に到達し、角膜輪部に切開製平行アイ円周（45°）の3分の1以上である。までフラップを拡大
      3. 鈍的切開中に目を操作するためのレバレッジのソースとして強膜弁を使用してください。フラップのカウンタートラクションを鈍的切開のためのそれが容易になります。
   6. 他の強膜弁の前の手順を繰り返します。
4. 脈絡膜の大面積を露光するために強膜フラップを切り取ります。
5. 眼の周囲に、ステップ3で切開（360度）を続けます。
6. 残りの脈絡膜、網膜組織を削除します。
   1. 露出された領域内に、静かに残りの脈絡膜、網膜組織をはねのけるために綿の先端を使用しています。代わりに、静かに鉗子で組織を取得し、基本となる硝子体からそれを剥がします。
   2. 必要に応じて、脈絡膜STに切開を作ります視神経からarting。その後、網膜と硝子体皮質を露出するために静かに脈絡膜を剥がします。
7. 離れて強膜からの脈絡膜を解剖鈍を継続した後、全体を得るために、脈絡膜をはがし、そのまま硝子体。
8. 所望の位置に全体硝子体を配置するために角膜に付着した強膜リムを使用してください。この時点で、硝子体が前方強膜とレンズに取り付けられています。
9. すべての強膜を除去し、レンズの周りに、強膜の内側から硝子体を解剖鈍いです。
10. 必要であれば離れた硝子体からのレンズをすくうために鈍いツールを使用します。様々なvitreodynamic実験用のサンプルを使用してください。
    1. 空気にさらされる既知の表面積を有するガラスビーカーに試料を配置します。サンプルの端に酸素感受性プローブ​​を配置します。サンプルに既知の距離（R）にプローブを移動させるためにマイクロマニピュレーターを使用してください。
    2. 理論拡散方程式を得るためにフィックの法則を使用してください。ダとTAステップ10.1に収集等の実験拡散係数/反応項を得ます

結果

プロトコルに続いて、コアおよび皮質（ 図3）をそのままにして、成功した硝子体切開につながります。これは、硝子体皮質に付着した網膜の残留個から明らかです。無傷の全体硝子体液は、特定のvitreodynamic実験のためのいくつかの方法で使用することができます。我々のケースでは、無傷の硝子体液中の酸素の拡散速度と、それが対応する時定数だが（ 図2）を検?...

ディスカッション

慎重に硝子体解剖中に実行されなければならない2つの重要なステップがあります。全層強膜フラップを作成するステップ3は、全体の解剖に重要です。ケアは、全層強膜フラップを作成する際に脈絡膜にカットしないように注意する必要があります。他の重要なステップは、脈絡膜から強膜を離れて解剖されています。このステップは、慎重に硝子体がこぼれることができ、そこから脈絡膜?...

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.3 forceps	Storz Opthalmics	E1793
Westcott Tenotomy Scissors Curved Right	Storz Opthalmics	E3320 R
Scalpel Handle No. 3	VWR	25607-947
Scalpel Blade, #11, for #3 Handle	VWR	470174-844