Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

요약

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

초록

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

서문

이 방법의 목적은 구체적으로 vitreodynamic 분석의 목적을 위해, 사체로부터 눈, 유리질 코어 및 피질 손상으로, 전체 그대로 유리체를 분리하는 기술이다. 유리체 생리학 분야는 유체 역학 연구원 등, 다양한 분야 연구자, 성장함에 따라, 유리체 ^1의 물리적, 역학적 특성을 조사하고 있습니다. 이를 위해, 그것은 세부 사항에 다양한 분야의 연구자를 지원하기 위해 전체 그대로 유리체를 분리하는 기술이 필수적이다.

Sebag 등. ² 등 ⁽³⁾ 인간의 시체 눈에 우아한 전체 유리체 해부를 수행하고 그 결과의 그림을 보여 주었다. 그러나, 사용되는 기술은 독립적으로 복제하는 방법을 할 수 없을 것이다 디테일 비전문가에 설명되지 않았다. 다른 연구는 이러한 포부 또는 부분 절개와 같은 간단한 방법을 사용하여 시체의 눈에서 유리체 수확 한그 중 둘은 전체 그대로 유리체가 발생하지 않습니다. Gisladottis 등. ^4, 쑤 외. ^(5)는 시체의 눈에서 수확 유리체 유머의 투과성을 조사합니다. 유리체 추출 할 수있는 방법을 설명하지 않았다 때문에, 그것은 그들이 주사기 유리체를 흡입하는 것으로 가정 하였다. 와트 등. ^6은 수술 기법과 토끼 유리체 유머를 분리하는 방법을 설명함으로써 한 단계 더 갔다. 그러나,이 방법은 유리질 코어의 단리없는 유리체 피질 초래한다. Skeie 등. ^(7)는 고유 한 후에 4 개의 영역으로 편성 유리체 우아 분석을 위해 각각의 부분을 절개하는 방법을 설명했다. 그러나이 기술은, 전체로서 유리체 그대로 발생하지 않는다.

현재의 기술은 현재 사체의 눈을 수행하는 생물 물리학 적 실험을 용이하게하기 위해 개발되었다. 이전 방법으로 설명보브는, 1) 없음이 완전히 전체 유리체를 분리하지 않기 때문에 제한됩니다, 2) 수확 유리체 코어 피질 3) 유리체 해부학 적 구조가 유지되지 않습니다, 균질화, 또는 4) 해부 기술은 적절하게 다른 분야의 연구자들에 의해 복제에 대해 자세히 설명하지 않습니다 . 또한 공막과 맥락막, 유리체의 가시화에 의한 불투명도가 그대로 안구 제한된다. 이것은 전체 눈 안에 이루어질 수 측정의 정밀도 및 가능성을 제한한다. 또한, 유리체 주변 해부학 적 구조는 유리질의 생화학 적 및 물리적 특성의 연구를 혼동 할 수있다.

최근 몇 년 동안, 유리체 과학의 몸은 엄청나게 성장하고 전체 유리체는 개별 부품과는 다른 특성을 가지고 있다고 생각하는 이유가있다. vitreodynamics의 researc의 유리체의 물리적, 역학적, 화학적 특성을 조사에 관심이 증가하고있다이러한 약물 전달, 체내 산소 ^(8)과 유리체 절제술 임상 의학에서 응용 프로그램이 시간. 유리체를 조작 약리학 제제를 사용 약리 vitreodynamics는, 유리체 결과 ^9을 향상 시키는데 사용될 수있다. 생체 역학적 특성은 유리 체내 약물 전달 기술 ^10-12을 개선하는데 사용될 수있다 유리질 유체의 흐름을 모델링하는 데 사용된다. 유리체의 다양한 세그먼트의 물리적 특성은 vitreo - 망막 산소 수송 ^(13)을 이해하는 데 매우 중요하다. 제안 된 유리체 박리 기술은 그대로 유리체 유머의 다양한 속성을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 벤치 탑 실험이 더 나은 시각화 전체 그대로 유리체 기관에서 수행 할 수 있습니다.

요약하면, 유리체의 연구를위한 현재의 방법은 어느 적절히 설명을 생략하거나, 불완전한 절연 및 유리질 코어 피질 초래한다. 따라서, 예를 수행 할 필요가있다투명한 눈 모델 xperiments은 시체의 눈에 존재하는 유리체의 해부학을 유지하면서.

프로토콜

모든 탈핵 눈은 도살장에서 얻은하고 모든 실험은 기관 바이오 안전성 법에 따라 수행되었다.

1. 표면에 세포핵이 제거 된 눈을 고정합니다. 눈 주위에 여분의 조직을 통해 조직의 핀을 배치하고 스티로폼 보드로를 확보하여이 작업을 수행합니다.
2. 해부 및 눈에서 perilimbal 결막을 분리합니다.
   1. 윤부에서 결막을 절개하고 퉁명스럽게 공막 떨어져 그것을 해부 미세 집게 (0.3 집게) 및 microscissors (웨스트 코트 위)를 사용합니다. 무딘 절개가 더 해부 할 수 있도록 진행으로 윤부 따라 결막을 잘라.
   2. 가능한 한 많은 공막을 노출 끝까지 눈 (360도)의 주위에 결막을 제거합니다.
      참고 :이 절차의 나머지 부분 동안 수술 핀이나 집게로 눈에 집착 용이하게하기 위해 결막의 작은 금액을 떠나 도움이됩니다.
3. 하나 따라 전체 두께 공막 편 만들기눈 (메스 블레이드 69)의 측면.
   1. 부드럽게 어둡게 착색 된 맥락막까지 메스 (메스 블레이드 11)과 공막으로 절단하여 윤부에 윤부 및 3mm 후방에 ~ 5mm 공막 절개 평행을 볼 수 있습니다. 맥락막 자체를 절개하지 않도록주의하십시오.
   2. 이 부드럽게 안쪽으로 맥​​락막을 눌러이 조직 사이의 잠재적 인 공간을 확대 할 수있을 때까지 조심스럽게, (무딘 절개를 사용하여) 가위 또는 메스 중, 공막과 맥락막 사이의 평면을 따라 해부.
   3. T 자형 절개를 작성, 날카로운 microscissors와 최초의 공막 절개에 수직 다른 공막 절개를합니다.
   4. 그리고 퉁명스럽게 기본 맥락막에서 공막 조직을 제거하고 부드럽게 위에서 언급 한 바와 같이 공막에서 멀리 맥락막을 밀어 원주 방식으로 해부하는 것을 계속한다.
   5. 필요에 따라 공막 편을 크게한다.
      1. 부드럽게 떨어져 공막에서 맥락막을 해부 무딘과정 전반에 걸쳐.
      2. 윤부 수직 만들어진 절개 시신경 도달 절개 윤부 평행이 눈 둘레 (45)의 적어도 1/3까지 이루어 플랩을 크게한다.
      3. 무딘 해부하는 동안 눈을 조작하기위한 지렛대의 소스로 공막 편을 사용합니다. 플랩에 반대 견인은 무딘 절개보다 쉽게​​ 만든다.
   6. 다른 공막 편에 이전 단계를 반복합니다.
4. 맥락막의 큰 영역을 노출하는 공막 플랩을 버려야.
5. 눈의 둘레 (360도)의 주위에 3 단계에서 만든 절개를 계속합니다.
6. 나머지 맥락막 - 망막 조직을 제거합니다.
   1. 노출 된 지역 내에서 조심스럽게 남아있는 맥락막 - 망막 조직을 브러시면 팁을 사용합니다. 또한, 부드럽게 집게로 조직을 잡고 기본 유리체 오프를 껍질.
   2. 필요하다면 맥락막 성으로 절개를시신경에서 arting. 그런 다음, 망막 및 유리체 피질을 노출 부드럽게 맥락막을 벗겨.
7. 멀리 공막에서 맥락막을 해부 무딘 계속하고 전체 그대로 유리체를 얻기 위해 맥락막을 벗겨.
8. 원하는 위치에서 전체 유리체의 위치를​​ 각막에 부착 된 공막 림을 사용합니다. 이 시점에서, 유리체는 전방 및 공막 렌즈에 부착된다.
9. 모든 공막을 제거, 렌즈 주위 공막의 내부로부터 해부 무딘 유리체.
10. 필요가있을 경우 멀리 유리체에서 렌즈를 특종 무딘 도구를 사용합니다. 다양한 vitreodynamic 실험 샘플을 사용합니다.
    1. 공기에 노출 알려진 표면적 유리 비커에 샘플을 놓습니다. 샘플의 가장자리에 산소에 민감한 프로브를 놓습니다. 샘플로 알려진 거리 (R)에 프로브를 이동하는 마이크로 매니퓰레이터를 사용합니다.
    2. 이론적 확산 방정식을 얻기 위해 확산의 픽의 법칙을 사용합니다. 다 함께TA는 단계 10.1에 수집 등 실험적 확산 계수 / 반응 조건을 구하는

결과

프로토콜을 따르는 것은 그대로 코어와 피질 (그림 3) 성공적인 유리체 박리로 이어질 것입니다. 이 유리체 피질에 부착 망막의 잔여 부분으로부터 명백하다. 본래 전체 유리체 특정 vitreodynamic 실험을위한 여러 가지 방법으로 사용될 수있다. 우리의 경우에는, 확산 유리체 그대로 산소의 속도와 그 대응하는 시간 상수 (도 2)의 조사 하였다. 우리의 방법을 사용하여 (코어 ?...

토론

조심스럽게 유리체 박리 동안 수행해야 두 가지 중요한 단계가 있습니다. 전체 두께 공막 편을 만드는 단계 3, 전체 박리에 결정적이다. 케어는 전체 두께 공막 편을 만들 때 맥락막으로 절단하지 않도록주의해야한다. 다른 중요한 단계는 맥락막에서 공막을 멀리 해부한다. 이 단계는주의 깊게 유리체가 밖으로 유출 할 수있는 맥락막에 여러 개의 구멍을 만드는 방지하기 위해 수행해야합니다. 프...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.3 forceps	Storz Opthalmics	E1793
Westcott Tenotomy Scissors Curved Right	Storz Opthalmics	E3320 R
Scalpel Handle No. 3	VWR	25607-947
Scalpel Blade, #11, for #3 Handle	VWR	470174-844