Всего Стекловидное тело Рассечение для Vitreodynamic анализа

Резюме

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

Аннотация

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

Введение

Цель этого метода является то, чтобы подробно методика, чтобы изолировать целом, интактный стекловидное тело, с стекловидного сердцевины и коры неповрежденной, из трупа глаза, для целей vitreodynamic анализа. Как поле стекловидного физиологии выросла, мульти-дисциплинарных исследователей, таких как исследователей гидромехаников, расследует физические и биомеханические свойства стекловидного ^1. Для этого важно, чтобы подробно методика изолировать весь, неповрежденный стекловидное тело, чтобы помочь междисциплинарных исследователей.

Сибэг др. ² и ³ выполнены другие элегантные целые стекловидных вскрытия трупов на глазах человека и показал иллюстрации результатов. Тем не менее, этот метод использовать не были подробно описаны и неспециалистами не сможет воспроизвести способ независимо. Другие исследования собирают стекловидного от трупных глазах, используя простые методы, такие как стремление или частичном вскрытии,оба из которых не приводит к целой неповрежденной, стекловидное тело. Gisladottis др. ⁴ и Сюй др. ⁵ исследовать проницаемость в стекловидное тело заготовленной от трупа глаза. Однако, поскольку ни один из методов экстракции стекловидного не было описано, было предположено, что они отсасывают стекловидного тела с помощью шприца. Вт и др. ⁶ пошел еще дальше, описывая метод выделения кролика стекловидного тела с хирургической техники. Тем не менее, этот метод приводит к выделению только стекловидного ядра, а не стекловидного коры. Skeie др. ⁷ позже организовал стекловидного в 4 уникальных регионов и элегантно описали метод препарировать каждую часть для анализа. Эта методика, однако, не приводит к интактной стекловидного тела в целом.

Тока метод был разработан для облегчения биофизических экспериментов, которые в настоящее время выполняется только в трупных глазах. Предыдущие способы, как описаноБове, ограничены, потому что 1) ни полностью не изолировать всю стекловидное тело, 2) собирают стекловидное ядро ​​и кора гомогенизируют, 3) стекловидное анатомическое строение не поддерживается, или 4) методы рассечение не адекватно подробно для репликации исследователями в других областях , Кроме того, из-за непрозрачности склеры и сосудистой оболочки, визуализации стекловидного тела ограничена в интактной глазного яблока. Это ограничивает точность и возможность измерения, которые могут быть сделаны внутри весь глаз. Кроме того, окружающие анатомические структуры стекловидного может путать изучение биохимических и физических свойств стекловидного тела.

В последние годы, тело стекловидное науки значительно вырос, и есть основания полагать, что вся стекловидное тело имеет различные свойства, чем его отдельных частей. Существует растущий интерес в расследовании физические, биомеханические и химические свойства стекловидного тела для vitreodynamics researcч, что имеет применения в клинической медицине, таких как доставка наркотиков, стекловидное тело оксигенации ⁸ и витрэктомии. Фармакологические vitreodynamics, который использует фармакологических агентов манипулировать стекловидное тело, может быть использован для улучшения результатов витрэктомии ^9. Биомеханических свойств используются для моделирования стекловидного поток жидкости, который может быть использован для улучшения технологий доставки лекарств в стекловидное тело ^10-12. Физические свойства различных сегментах стекловидного тела имеют решающее значение для понимания витреоретинальной транспорт кислорода ^13. Предлагаемый метод стекловидного рассечение может быть использован для изучения различных свойств неповрежденной стекловидного тела. Это позволяет Настольные эксперименты быть сделано на целых неповрежденных, стекловидного тела с лучшей визуализации.

В целом, современные методы исследования для стекловидного тела либо не адекватно описано, или привести к неполной изоляции стекловидное ядро ​​и кора. Таким образом, существует необходимость выполнять еxperiments в прозрачной модели глаза, сохраняя анатомию стекловидного тела, что существует в трупной глаза.

протокол

Все энуклеированным глаза были получены из скотобойни и все эксперименты были проведены в соответствии с институциональными законов в области биобезопасности.

1. Безопасный энуклеированным глаз вниз на поверхности. Сделайте это путем размещения контактов ткани через избыточной ткани вокруг глаз и обеспечения его на доске пенополистирола.
2. Проанализируйте и отсоединить perilimbal конъюнктиву от глаз.
   1. Используйте тонкий пинцет (0,3 щипцы) и microscissors (Westcott ножницы) надрезать конъюнктиву у лимба и прямо рассекают его склеры. Разрежьте вдоль конъюнктиву от лимба, как тупым переходит к возможности дальнейшего рассечение.
   2. Удалить все конъюнктиву путь вокруг глаз (360 градусов), чтобы выставить столько склеры, как это возможно.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это полезно, чтобы оставить небольшое количество конъюнктивы чтобы облегчить фиксации глаз с пальцев или хирургических щипцов во время остальной части процедуры.
3. Создание полного толщины склеры лоскут вдоль однойсторона глаза (скальпелем 69).
   1. Сделайте ~ 5 мм склеры разрез параллельно лимба и 3 мм кзади от лимба, осторожно не врезалась в склеры с помощью скальпеля (лезвие скальпеля 11) до тех пор, мрачно пигментированных сосудистой оболочки видна. Будьте осторожны, чтобы не надрезать сам сосудистую оболочку.
   2. Осторожно рассекают вдоль плоскости между склерой и сосудистой оболочки, либо с ножницами (с использованием тупым) или скальпелем, пока это не возможно, чтобы увеличить потенциальную пространство между этими тканями, нажав сосудистую оболочку аккуратно внутрь.
   3. Сделать еще склеры разрез перпендикулярно первому разреза склеры с острыми microscissors, создавая Т-образный разрез.
   4. Затем продолжают прямо рассекают в окружном образом, чтобы удалить склеры ткани от основной сосудистой оболочки и осторожно нажмите на сосудистую оболочку от склеры, как упоминалось выше.
   5. Увеличить склеры клапан по мере необходимости.
      1. Осторожно тупым рассекать сосудистую оболочку от склерыв течение всего процесса.
      2. Увеличить клапан до тех пор, разрез сделан перпендикулярно лимба не достигает зрительного нерва и разрез сделан параллельно лимбу, по крайней мере одна треть окружности глаз (45 °).
      3. Используйте склеры клапан в качестве источника заемных средств для манипулирования глаз во тупым. Счетчик-тяги на клапане облегчает тупым.
   6. Повторите предыдущий шаг с другой склеры клапаном.
4. Срежьте склеры закрылки разоблачить большую площадь сосудистой оболочки.
5. Продолжить разрез, достигнутый в шаге 3 вокруг окружности глаза (360 градусов).
6. Удалите остатки сосудистая-сетчатки ткани.
   1. В открытой области, использовать ватный наконечник-мягко стряхните сосудистое-сетчатка ткани оставшиеся. Кроме того, аккуратно захватить ткани с щипцами и очистить его от основной стекловидного тела.
   2. При необходимости сделать надрез в сосудистой оболочки мarting от зрительного нерва. Затем очистить от сосудистой оболочки осторожно, чтобы разоблачить сетчатки и стекловидного тела мозга.
7. Продолжить тупой рассекает сосудистую оболочку от склеры, а затем очистить от сосудистой оболочки, чтобы получить всю, нетронутыми стекловидного тела.
8. Использование ободком склеры, прикрепленный к роговице, чтобы расположить всю стекловидного в нужное место. В этот момент, стекловидное тело прикрепляется к переднему склеры и хрусталика.
9. Тупым рассекают стекловидного изнутри склеры, вокруг объектива, удаляя все склеры.
10. Используйте тупой инструмент, чтобы зачерпнуть объектив от стекловидного если это будет необходимо. Используйте образец для различных vitreodynamic экспериментов.
    1. Поместите образец в стеклянном стакане с известной площадью поверхности подвергается воздействию воздуха. Поместите зонд чувствительного к кислороду на краю образца. Использование микро-манипулятор для перемещения зонда на известном расстоянии (г) в образце.
    2. Использование законов диффузии Фика, чтобы получить теоретическое уравнение диффузии. С дата собраны в шаге 10.1, получаем термин коэффициент диффузии экспериментальная / реакции и т.д.

Результаты

После протокола приведет к успешному стекловидного вскрытия с ядром и корой (рис 3) без изменений. Это видно из остаточных частей сетчатки, прилипших к стекловидного коры. Неиспользованный вся стекловидного тела может быть использован несколькими способами для конкретных vitreo...

Обсуждение

Есть два важных шагов, которые должны быть тщательно выполненные во время стекловидного вскрытия. Шаг 3, создавая полную толщину лоскута склеры, имеет решающее значение для всей рассечение. Уход должны быть приняты, чтобы не врезаться в сосудистой оболочке при создании полной толщины с...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.3 forceps	Storz Opthalmics	E1793
Westcott Tenotomy Scissors Curved Right	Storz Opthalmics	E3320 R
Scalpel Handle No. 3	VWR	25607-947
Scalpel Blade, #11, for #3 Handle	VWR	470174-844