JoVE Logo
著者
お問い合わせ

サインイン

このコンテンツを視聴するには、JoVE 購読が必要です。 サインイン又は無料トライアルを申し込む。

この記事について

  • 要約
  • 要約
  • 概要
  • プロトコル
  • 結果
  • ディスカッション
  • 開示事項
  • 謝辞
  • 資料
  • 参考文献
  • 転載および許可

要約

ここでは、我々 は生体内の白血球、炎症、ナイーブから出口の定量化とマウス皮膚の悪性の方法を示します。我々 は 2 つのモデルの比較を実行: 経皮 FITC アプリケーションとその場で光電。さらに、光電性皮膚腫瘍から白血球出口を追跡するためのユーティリティを紹介します。

要約

末梢組織から排出リンパ節の白血球出口免疫監視の開始に重要ではありませんが、末梢組織の応答の解像度にも貢献しています。非リンパ系、末梢組織から白血球出口を定量化するためには、さまざまなメソッドを使用、文脈依存の出力を制御する細胞・分子メカニズムままかり。ここでは、マウスの皮膚腫瘍から白血球出口の定量分析のための in situ光電の使用について述べる。光電直接ラベル白血球の皮膚組織内で常駐が可能です。紫外光に肌の露出を引き起こすローカルも炎症反応によって特徴付けられる白血球浸潤と血管の水漏れしたため、蛍光トレーサーの経皮吸収型アプリケーションとの比較で光電具体的渡り鳥の樹状細胞集団をラベルし、皮膚微小と腫瘍から骨髄性とリンパの出口の定量化を同時に有効になっています。腫瘍内白血球複雑さの私達の理解の不足しているコンポーネントのまま白血球出口のメカニズムと免疫微小両方記載ツールのアプリケーションが腫瘍のダイナミクスにユニークな洞察を提供するため定常状態と治療への反応で。

概要

末梢組織の免疫反応は炎症のサイトに白血球動員だけでなく、後続の維持を調節するメカニズムによっても形成されます。したがって、防御免疫は、内で、滞在がリンパ管を介して末梢組織から移行というか白血球を入力すると、かどうかを決定する累積的な細胞および分子メカニズムによって決まります。重要なは、出口 (出口と呼ばれる) リンパ管を介して組織への白血球のための傾向は、その特殊な機能にリンクされます。樹状細胞 (DC) は、抗原輸送と排水のリンパ節 (dLN)、適応免疫1に必要なプロセスのプレゼンテーションにつながる成熟信号への応答での回遊行動を取得します。マクロファージや好中球などの清掃の骨髄細胞は貪食によりアポトーシス破片をオフになります。細菌感染時に好中球が組織を離脱、最終的に dLNs2で、DSS 誘発大腸炎モデルにおけるアポトーシスを受ける、データはマクロファージ出口局所炎症3を解決する必要がある仮説をサポートします。好中球とマクロファージの出口が炎症性のすべてのコンテキストで発生するかどうかも不明です。定常状態4,5,6、7、感染8、および炎症を起こして4,9,10、から T リンパ球の出口のための証拠11,12周辺機器、非リンパ系組織が、この出口を駆動する組織に基づく信号のままかり、T 細胞が積極的に循環させるを示します。いくつかの研究を特定 21 (CCL21) とその受容体 CCR74,11、ケモカイン (C C モチーフ) 配位子を含む出力の信号に向かってリンパ毛細血管を排出方向の移行に必要なその後 13ケモカイン (モチーフ C X) 12 (cxcl 12) リガンドとその受容体 CXCR42,14、そしてスフィンゴシン-1-リン酸 (S1P)10,,1516。しかし、これらのメカニズムはすべてのコンテキストでアクティブではない、未解決の問題が残っているかどうか、彼らはすべてのセル型の出力を決定します。重要なは、さらには、出口と疾患における関連性機能を制御するメカニズムに洞察力は体内の定量的分析の方法する必要があります。

複数モデル動物体内のリンパ管の直接カニューレ装着前のヴィヴォ標識白血球、蛍光トレーサーの経皮吸収型アプリケーションの養子の転送を含む出口を定量化するいくつかの方法が使用されています。ラベル付けされた粒子と生体内で光電17,18の注入。マウスの求心性リンパ管の直接穿刺が難しい、収集することができます流体のボリュームで小動物に限られました。大型の動物でカニュレーションが大きく行われてしたがって、(e.g。、羊) このような手術操作、実用的。これらの研究は、リンパ性と骨髄性リンパ10,19,20細胞の存在の直接的な証拠を提供します。さらに、羊のモデルは、急性および慢性の炎症がほぼ 100 の10、21でリンパでリンパ球の存在を増加することを明らかにします。

ラベルおよび遺伝子を組み換えられたリンパ球の養子の転送は CCR7 は CD4 の出口に必要な重要なは明らかに+ T 細胞急性炎症を起こした皮膚5,11, リンパ球の前処理中から小分子 S1P 受容体アゴニスト、FTY720、部分的にしか、出口10を抑制します。興味深いことに、慢性的な炎症を起こした皮膚から転送されたリンパ球の出口は CCR7 独立10が、部分的に CXCR49を必要があります。養子転送実験、ただし、提供ex vivoの非生理的番号活性およびラベル付けされたリンパ球挿入により、組織と間質性流体圧力の生体力学的環境を変える組織に初期リンパ毛細血管を開き、トランスポート プロパティ22を変更します。かに (FITC) 皮膚刺激の有無での代替、経皮吸収型アプリケーションとして (e.g、フタル酸ジブチル、DBP) または感染23,24の追跡が可能になります。トレーサーを蓄積し、dLNs に移行する貪食細胞。同様に、蛍光に分類された腫瘍は腫瘍材料25を飲み込んでいる貪食細胞を追跡する手段を提供します。これらのメソッドは、DC の出口13,14,17,26,の27を支配するが、非貪食を追跡することができるメカニズムの重要な洞察を提供しています。リンパ球と、解釈可溶性 FITC 非渡り鳥、こうしてラベリング LN バイオハザード Dc のリンパ排液無料によって複雑になることができます。

また、生体顕微鏡観察は、リアルタイム28,29生理関連の白血球ポピュレーションの生体内での追跡のためにできる強力なツールです。顕微鏡は空間の複合体を明らかにした生体レポーター マウスと体内に抗体を用いた免疫蛍光ラベリングと組み合わせて使用し、ダイナミクスの免疫細胞人身売買などの間質性の移行30、リンパ内皮、内リンパ腔と LN エントリ28,31に移行通路輪廻。生体イメージング技術の広範な採用経費、設定のための必要な専門知識によって制限され、種類の細胞を定量化のスループットを制限します。まだ、人口動態を分析定量メソッドを結合組織生体イメージング洞察を提供する追加と重要な機構運動とリンパ毛細血管内の移行のメカニズムに関して18,31,32。

その結果、生体内で光電として浮上しているメソッドをその場でラベルは、貪食活性の生理的白血球出口 (フローサイトメトリーによる結合) 時での定量化のために独立した、チャレンジの有無。楓 Tg マウスは恒常不可逆的赤い蛍光性 (楓赤)33に変換した後、紫の光にさらされるまで、蛍光グリーン (緑楓) を表わす石サンゴから分離した蛋白質を表現します。Photoconverted 細胞は末梢組織サイトから離脱する彼らを追跡できる、dLNs の蓄積します。これとその他似たような蛍光マウス モデル34,35肌36から制御性 T 細胞の構成の出口、パイエル板の37 から CXCR4 依存性 B 細胞の出口を含む重要な生物学を明らかにしました。、ペプチド再チャレンジ38、および広範な白血球腫瘍微小39から出口に常駐メモリー T 細胞の動員。ここで、皮膚の炎症や感染症蛍光法による既存データの直接比較を可能にするためのコンテキストで経皮 FITC アプリケーションと光電の比較を実行します。さらに、我々 は移植腫瘍における光電を示し、変換効率および腫瘍微小から選択的避難説明。など、私たちは腫瘍、腫瘍内白血球複雑さ、抗腫瘍免疫の解釈にとって重要な意義があるから白血球出口の重要な生物学の解明に更にこれらのメソッドのアプリケーションを必要と主張して療法への応答。

プロトコル

動物のすべてのプロトコルは、機関動物ケアとオレゴン健康及び科学大学で利用委員会によって承認されています。

1. 炎症とマウス耳介の FITC 絵画の誘導

  1. 層流フードの麻酔気化した isofluorane を用いた c57bl/6 マウス (3-5 %isofluorane で誘導し、1-3 %isofluorane; 維持酸素流量 0.5 〜 1.0 L/分)。ペダル反射の損失を監視することによって適切な anesthetization を確保する不随意運動と呼吸数の減少。
  2. 上を向いて耳の腹側をフラット耳を置きます。ピペット 20 μ L 5 %fitc 溶液の溶解フタル酸 1:1 アセトン: ジブチル (DBP) 耳介の腹側へ。数秒間乾燥する耳を許可します。
  3. FITC 塗布後 24 時間は、頚部転位続いて二酸化炭素暴露を介してマウスを安楽死させます。PBS に耳の耳介を収集するには、はさみを使って頭から耳を分離します。LNs を周囲の組織から分離するピンセットを使用して PBS に頸部 dLNs と鼠径非排水 LNs を収集します。鼠径部の非排水 LNs は、FITC+/Kaede 赤+白血球の存在に否定的なコントロールとして機能します。組織のプロトコルごとの死体を処分します。
    注: セルの種類および知られている移住性の動作の分析のための最適な時間ポスト光電によって異なります。たとえば、樹状細胞は、6 h ポスト DBP アプリケーションとして、早く dLNs に検出できます。

2. マウス耳介の炎症の誘導

  1. 層流フードのケタミン 80 mg/kg および 10 mg/kg キシラジン生理食塩水に溶解した腹腔内投与によって楓 Tg マウス (背景 C57Bl/6) を麻酔します。手順 1.1 で説明されているように、適切な anesthetization を確認します。
  2. 上を向いて耳の腹側をフラット耳を置きます。ピペット 20 μ L 1:1 アセトン: DBP、耳介の腹側への。数秒間乾燥する耳を許可します。
  3. DBP アプリケーション後アルミ箔の部分にスリットを切り、紫外線光源に耳を公開するスリットを介して耳を引き出します。耳が上向きに両面テープを使用して箔に耳を保護する背側で平ら。
  4. 3 分で 100 mw 405 nm 光源を使用して光源、および photoconvert の下で直接耳を配置します。
  5. 光電後、24 h 楓 Tg マウスを安楽死させるし、手順 1.3 で説明したように耳耳介、頸の LNs と鼠径 LNs を収穫します。
    注: 手順 1.3 で引用される考慮事項に加えて増殖率決定分析のタイミング楓赤の損失が急速に細胞分裂で発生するとします。

3. ワクシニア感染マウス耳介の FITC

  1. 手順 1.1 で説明されているように気化した isofluorane と c57bl/6 マウスを麻酔します。
  2. 耳の腹側を平らに横たわっていた。ピペット 5 x 106プラーク形成単位 (PFU) ワクシニア ウイルス (VacV) の耳の耳介に 10 μ L の PBS で希釈しました。29 ゲージ針を使用して、25 回40耳介を突きます。
  3. 24 h 後感染手順 1.1 およびピペット 20 μ L 5% 耳の耳介の腹側にアセトンに溶解した FITC で説明されているように isofluorane と VacV に感染したマウスを麻酔します。数秒間乾燥する耳を許可します。
  4. FITC 塗布後 24 時間はマウスを安楽死させるし、手順 1.3 で説明するように耳の耳介、頸部 LNs と鼠径 LNs を収集します。
    注: FITC DC さまざまな 24 h 間隔で人身売買を決定する任意の時間ポイント記事感染症に適用できます。我々 は、dLNs に DC 移行が日 1 に 3 記事感染41から同じようなレベルで維持されることを報告しました。

4. ワクシニア マウス耳介と光電の感染症。

  1. 手順 1.1 で説明されているように気化した isofluorane と楓 Tg マウスを麻酔します。
  2. ステップ 3.2 で説明されているように VacV と耳介を感染させます。
  3. 24 h 後の感染症は、楓の VacV 感染マウス ステップ 2.1 で説明されるように麻酔し、2.3 2.4 の手順で説明するよう光電を実行します。
  4. 光電後、24 h はマウスを安楽死させるし、手順 1.3 で説明したように耳耳介、頸の LNs と鼠径 LNs を収穫します。
    注: 手順 3.4 で上記のよう光電は任意の時間ポイントのポスト感染で管理できます。

5. 耳とリンパ節のフローサイトメトリー用処理

  1. 耳の耳介の単一細胞懸濁液を作成: 離れて 1 mg/mL コラゲナーゼ D と 80 U/mL DNase の希釈を含む 24 ウェル プレートのウェルに下に向けて耳の内側でピンセットと場所の 2 つのペアを使用して耳の耳介の腹側と背側の皮をむく ハンクの緩衝生理食塩水ソリューション (HBSS) (Ca2 +と Mg2 +を含む)。70 μ m ナイロン携帯こし器を通って 30 分押して消化組織の 37 ° C で孵化させなさい。
  2. LNs から単一細胞懸濁液を作成: 1 mg/mL コラゲナーゼ D と 80 U/mL DNase HBSS で希釈を含む 24 ウェル プレートの井戸の LNs を配置。リンパ節 2 つ 29 ゲージ針を使用してカプセルし、リンパ節の 37 ° C で 30 分間インキュベーションしていじめるオープンは、70 μ m ナイロン携帯こし器を通って消化組織を押します。

6. 皮内黒色腫腫瘍移植と光電。

  1. 電気かみそりを使用して楓 Tg マウスの背中の中心から毛を剃る。
  2. 29 ゲージ針を左と右の肩甲骨の間の背中の中央に位置し、掻き楓 Tg マウスの皮膚に 5 × 105腫瘍細胞 (50 μ L の生理食塩水で希釈) を注入します。腫瘍は、指定されたリンパ節 (すなわち、左と右の上腕腫瘍 LNs は背中の上部中央に配置) にリンパドレナージュをように慎重に位置する必要があります。これにより、皮膚の腫瘍を LNs の直接光電、dLN 上腫瘍を配置しないでください。
  3. 希望サイズ (100-650 mm3) に成長する腫瘍を許可します。
  4. 組織採取前 1 日楓 Tg マウスを麻酔は、2.1 で説明されると、腫瘍周辺新しく再成長毛を剃る。
  5. アルミ箔に穴をあけるし、光源に腫瘍を公開する腫瘍を通りぬけた。腫瘍が穴を通って戻って落ちるを防ぐために腫瘍よりわずかに小さい穴を開けるし、隣接する、非腫瘍性の皮膚の変換を最小限に抑えます。
  6. 5 分で 200 mw 405 nm 光源を使用して photoconvert と光源直下の腫瘍を位置します。
  7. 光電後、24 h は、手順 1.3 で説明するように、マウスを安楽死させます。PBS に腫瘍、上腕の dLNs と鼠径非排水 LNs を収集します。はさみを使用して周囲の皮膚から腫瘍を切り取って手順 1.3 で説明したように、LNs を削除します。

7. 腫瘍とリンパ節のフローサイトメトリー用処理

  1. 腫瘍から単一細胞懸濁液を作成: 1 mg/mL コラゲナーゼ D と 80 U/mL DNase HBSS で希釈を含む 24 ウェル プレートのウェルにハサミで腫瘍をミンチします。70 μ m ナイロン ストレーナー 1 h. プレス消化組織の 37 ° C で孵化させなさい。
  2. ステップ 5.2 で説明されているようにリンパ節の単一細胞懸濁液を作成します。

8. フローサイトメトリー用染色抗体

  1. 単一細胞懸濁液に組織を消化した後、興味のマーカーとセルにラベルを付ける標準流れ cytometry 染色法を実行します。96 ウェル プレートに、6セルを簡単に言えば、ピペット 2 x 10 です。Fc ブロック (1 μ g/mL) 氷; 上で 20 分間サンプルをインキュベートします。FACs バッファー (1% ウシ血清アルブミンの PBS) で 2 回洗浄します。ライブ/死者の汚れ (PBS で希釈) をサンプルに追加し、氷; 15 分間インキュベートFACs バッファーで 2 回洗浄します。氷; 上で 30 分間 FACs バッファーで希釈した一次抗体 (材料表) と孵化します。FACs バッファーで 2 回洗浄します。
    注: 緑楓と楓; FITC と PE fluorophores が付いて赤い蛍光性が重なっています。したがって、FITC や PE 標識抗体楓蛋白質との組み合わせでは使用できません。
  2. 汚損の後流れの cytometer でサンプルを実行します。また、2% のセルを修復する PFA。

9. フローサイトメトリー解析

  1. 範囲全体の 70-80% に FITC (緑楓) と PE (楓赤) チャネル PMT 電圧を設定 (人口約 10 のセンター4) 楓グリーン前のヴィヴォまたは楓赤単色脾細胞や血液を使用します。
    注: は、広がる大きい信号になるので楓の緑 (FITC) 楓赤 (PE) チャンネルの賠償しません。
    1. 単色楓コントロールを作成するには、楓 Tg マウスから脾臓や血液を収集します。ACK バッファーが付いて赤い血液細胞を溶解し、セルを 2 つのグループに分割: 楓の緑と変換後の楓赤をダブルクォートします。
    2. 単一色の楓赤コントロール中断 1 mL の PBS のセルと 100 の力で 405 nm 光源を使用して 5 分 24 ウェル プレートで photoconvert mW。これらの細胞を使用して楓楓緑 (FITC) を設定する流れの cytometer (ステップ 9.1) の赤の PMT 電圧。
  2. 楓蛋白質のため電圧を設定すると、単一分子蛍光ラベルの製造元の指示に従って補償ビーズを使用して他のすべての一次抗体の汚れを補正します。
  3. データを収集するために流れの cytometer でサンプルを実行します。
    注: 楓蛋白質は細胞によって生産されて継続的に。つまり、24 h、光電変換されたセル楓緑の二重肯定的なとが楓新生楓 (緑) として赤いタンパク質は細胞内蓄積してきた。
  4. FlowJo ソフトウェアまたは類似のソフトウェアを使用してデータを分析します。

結果

我々 はまず効率を評価し、マウス皮膚に関連付けられている炎症を決定する文献で公表された光電結果を複製しようと思う。耳の耳介は、100 mW の青紫の光にさらされた (405 nm) 3 分で33が前述の。単一の細胞懸濁液すべて CD45 の 78% の変換効率を明らかに露出の後すぐに、耳の皮膚や子宮頸 dLNs から生成された+ dLNs (図 1 a

ディスカッション

周辺機器、非リンパ系組織から白血球の出口は、開始と免疫応答の解像度の重要が、出口を支配する分子メカニズムはよくわかっていません。知識で、このギャップは主に定量化の vivoのためのツールの準備状況のためです。ここでは、蛍光マウス皮膚腫瘍から内因性白血球出口を定量化し、炎症性の FITC ペンキを直接頭に頭の比較を提供 (楓 Tg) と感染症モデルの使用について述べる?...

開示事項

著者を開示するとの競合があります。

謝辞

著者は、B6 を提供するため YUMM 1.1 YUMM 1.7 マウス黒色線と博士デボラ ・ j ・ Fowell を提供する博士マーカス ボーゼンベルクを感謝したいです。理研 BRC を通じて、国立生物資源文部科学省、日本の合意 cg Tg(CAG-tdKaede) 15Utr マウス。

資料

NameCompanyCatalog NumberComments
Collagenase DRoche11088866001
DNaseRoche4536282001
Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtorPrizmatix LtdV8144
Fluorescein isothiocyanate isomer ISigma-AldrichF4274
dibutyl phthalateSigma-Aldrich524980
acetoneMacron Fine Chemicals2440-02
29-guage syringesExel International26029
Evans BlueSigma-AldrichE2129
70 um cell strainersVWR732-2758
paraformaldehydeSigma-AldrichP6148
HBSSCaissonHBL06
LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain KitInvitrogenL34966
Purified Anti-mouse CD16/CD32Tonbo Biosciences70-0161-M001
BV605 CD11c (clone N418)Biolegend117334
PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2)BD Pharmingen562363
BV421 CD3e (clone 145-2C11)Biolegend100341
APC CD8a (clone 53-6.7)TonBo Biosciences20-0081-u100
APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11)Biolegend103116
BV650 CD19 (clone 6D5)Biolegend115541
PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4)Biolegend128011
Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8)Biolegend123121
APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8)Biolegend127623
BV711 CD11b (clone M1/70)Biolegend101241
BV605 CD45 (clone 30-F11)Biolegend103155
BV711 CD4 (clone RM4-5)BD Biosciences563726
Bovine serum albumin (Fraction V)Fisher ScientificBP1600-100
Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle SetBD Biosciences552845
Fortessa Flow CytometerBD Biosciences
FlowJo v10 SoftwareFlowJo

参考文献

  1. Banchereau, J., Steinman, R. M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 392 (6673), 245-252 (1998).
  2. Hampton, H. R., Bailey, J., Tomura, M., Brink, R., Chtanova, T. Microbe-dependent lymphatic migration of neutrophils modulates lymphocyte proliferation in lymph nodes. Nature Communications. 6, 7139 (2015).
  3. D'Alessio, S., et al. VEGF-C-dependent stimulation of lymphatic function ameliorates experimental inflammatory bowel disease. Journal of Clinical Investigation. 124 (9), 3863-3878 (2014).
  4. Debes, G. F., et al. Chemokine receptor CCR7 required for T lymphocyte exit from peripheral tissues. Nature Immunology. 6 (9), 889-894 (2005).
  5. Bromley, S. K., Yan, S., Tomura, M., Kanagawa, O., Luster, A. D. Recirculating memory T cells are a unique subset of CD4+ T cells with a distinct phenotype and migratory pattern. Journal of Immunology. 190 (3), 970-976 (2013).
  6. Tomura, M., et al. Activated regulatory T cells are the major T cell type emigrating from the skin during a cutaneous immune response in mice. Journal of Clinical Investigation. 120 (3), 883-893 (2010).
  7. Tomura, M., Itoh, K., Kanagawa, O. Naive CD4+ T lymphocytes circulate through lymphoid organs to interact with endogenous antigens and upregulate their function. Journal of Immunology. 184 (9), 4646-4653 (2010).
  8. Jennrich, S., Lee, M. H., Lynn, R. C., Dewberry, K., Debes, G. F. Tissue exit: a novel control point in the accumulation of antigen-specific CD8 T cells in the influenza a virus-infected lung. Journal of Virology. 86 (7), 3436-3445 (2012).
  9. Geherin, S. A., Wilson, R. P., Jennrich, S., Debes, G. F. CXCR4 is dispensable for T cell egress from chronically inflamed skin via the afferent lymph. PLoS One. 9 (4), e95626 (2014).
  10. Brown, M. N., et al. Chemoattractant receptors and lymphocyte egress from extralymphoid tissue: changing requirements during the course of inflammation. Journal of Immunology. 185 (8), 4873-4882 (2010).
  11. Bromley, S. K., Thomas, S. Y., Luster, A. D. Chemokine receptor CCR7 guides T cell exit from peripheral tissues and entry into afferent lymphatics. Nature Immunology. 6 (9), 895-901 (2005).
  12. Gomez, D., Diehl, M. C., Crosby, E. J., Weinkopff, T., Debes, G. F. Effector T Cell Egress via Afferent Lymph Modulates Local Tissue Inflammation. Journal of Immunology. 195 (8), 3531-3536 (2015).
  13. Ohl, L., et al. CCR7 governs skin dendritic cell migration under inflammatory and steady-state conditions. Immunity. 21 (2), 279-288 (2004).
  14. Kabashima, K., et al. CXCL12-CXCR4 engagement is required for migration of cutaneous dendritic cells. American Journal of Pathology. 171 (4), 1249-1257 (2007).
  15. Cyster, J. G., Schwab, S. R. Sphingosine-1-phosphate and lymphocyte egress from lymphoid organs. Annual Review of Immunology. 30, 69-94 (2012).
  16. Matloubian, M., et al. Lymphocyte egress from thymus and peripheral lymphoid organs is dependent on S1P receptor 1. Nature. 427 (6972), 355-360 (2004).
  17. Teijeira, A., Rouzaut, A., Melero, I. Initial afferent lymphatic vessels controlling outbound leukocyte traffic from skin to lymph nodes. Frontiers in Immunology. 4, 433 (2013).
  18. Hunter, M. C., Teijeira, A., Halin, C. T Cell Trafficking through Lymphatic Vessels. Frontiers in Immunology. 7, 613 (2016).
  19. Bujdoso, R., Hopkins, J., Dutia, B. M., Young, P., McConnell, I. Characterization of sheep afferent lymph dendritic cells and their role in antigen carriage. Journal of Experimental Medicine. 170 (4), 1285-1301 (1989).
  20. Young, A. J. The physiology of lymphocyte migration through the single lymph node in vivo. Seminars in Immunology. 11 (2), 73-83 (1999).
  21. Seabrook, T., et al. The traffic of resting lymphocytes through delayed hypersensitivity and chronic inflammatory lesions: a dynamic equilibrium. Seminars in Immunology. 11 (2), 115-123 (1999).
  22. Swartz, M. A., et al. Mechanics of interstitial-lymphatic fluid transport: theoretical foundation and experimental validation. Journal of Biomechanics. 32 (12), 1297-1307 (1999).
  23. Macatonia, S. E., Knight, S. C., Edwards, A. J., Griffiths, S., Fryer, P. Localization of antigen on lymph node dendritic cells after exposure to the contact sensitizer fluorescein isothiocyanate. Functional and morphological studies. Journal of Experimental Medicine. 166 (6), 1654-1667 (1987).
  24. Robbiani, D. F., et al. The leukotriene C(4) transporter MRP1 regulates CCL19 (MIP-3beta, ELC)-dependent mobilization of dendritic cells to lymph nodes. Cell. 103 (4), 757-768 (2000).
  25. Roberts, E. W., et al. Critical Role for CD103(+)/CD141(+) Dendritic Cells Bearing CCR7 for Tumor Antigen Trafficking and Priming of T Cell Immunity in Melanoma. Cancer Cell. 30 (2), 324-336 (2016).
  26. Forster, R., et al. CCR7 coordinates the primary immune response by establishing functional microenvironments in secondary lymphoid organs. Cell. 99 (1), 23-33 (1999).
  27. Johnson, L. A., Jackson, D. G. The chemokine CX3CL1 promotes trafficking of dendritic cells through inflamed lymphatics. Journal of Cell Science. 126, 5259-5270 (2013).
  28. Teijeira, A., et al. T Cell Migration from Inflamed Skin to Draining Lymph Nodes Requires Intralymphatic Crawling Supported by ICAM-1/LFA-1 Interactions. Cell Reports. 18 (4), 857-865 (2017).
  29. Kilarski, W. W., et al. Intravital immunofluorescence for visualizing the microcirculatory and immune microenvironments in the mouse ear dermis. PLoS One. 8 (2), e57135 (2013).
  30. Overstreet, M. G., et al. Inflammation-induced interstitial migration of effector CD4(+) T cells is dependent on integrin alphaV. Nature Immunology. 14 (9), 949-958 (2013).
  31. Russo, E., et al. Intralymphatic CCL21 Promotes Tissue Egress of Dendritic Cells through Afferent Lymphatic Vessels. Cell Reports. 14 (7), 1723-1734 (2016).
  32. Steven, P., Bock, F., Huttmann, G., Cursiefen, C. Intravital two-photon microscopy of immune cell dynamics in corneal lymphatic vessels. PLoS One. 6 (10), e26253 (2011).
  33. Tomura, M., et al. Monitoring cellular movement in vivo with photoconvertible fluorescence protein "Kaede" transgenic mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 105 (31), 10871-10876 (2008).
  34. Shand, F. H., et al. Tracking of intertissue migration reveals the origins of tumor-infiltrating monocytes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 111 (21), 7771-7776 (2014).
  35. Tomura, M., et al. Tracking and quantification of dendritic cell migration and antigen trafficking between the skin and lymph nodes. Scientific Reports. 4, 6030 (2014).
  36. Moran, A. E., et al. T cell receptor signal strength in Treg and iNKT cell development demonstrated by a novel fluorescent reporter mouse. Journal of Experimental Medicine. 208 (6), 1279-1289 (2011).
  37. Schmidt, T. H., Bannard, O., Gray, E. E., Cyster, J. G. CXCR4 promotes B cell egress from Peyer's patches. Journal of Experimental Medicine. 210 (6), 1099-1107 (2013).
  38. Beura, L. K., et al. T Cells in Nonlymphoid Tissues Give Rise to Lymph-Node-Resident Memory T Cells. Immunity. 48 (2), 327-338 (2018).
  39. Torcellan, T., et al. In vivo photolabeling of tumor-infiltrating cells reveals highly regulated egress of T-cell subsets from tumors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 114 (22), 5677-5682 (2017).
  40. Khan, T. N., Mooster, J. L., Kilgore, A. M., Osborn, J. F., Nolz, J. C. Local antigen in nonlymphoid tissue promotes resident memory CD8+ T cell formation during viral infection. Journal of Experimental Medicine. 213 (6), 951-966 (2016).
  41. Loo, C. P., et al. Lymphatic Vessels Balance Viral Dissemination and Immune Activation following Cutaneous Viral Infection. Cell Reports. 20 (13), 3176-3187 (2017).
  42. Radu, M., Chernoff, J. An in vivo assay to test blood vessel permeability. Journal of Visualized Experiments. (73), e50062 (2013).
  43. Morton, A. M., et al. Endoscopic photoconversion reveals unexpectedly broad leukocyte trafficking to and from the gut. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 111 (18), 6696-6701 (2014).
  44. Meeth, K., Wang, J. X., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations. Pigment Cell Melanoma Research. 29 (5), 590-597 (2016).
  45. Demkowicz, W. E., Littaua, R. A., Wang, J., Ennis, F. A. Human cytotoxic T-cell memory: long-lived responses to vaccinia virus. Journal of Virology. 70 (4), 2627-2631 (1996).
  46. Stewart, A. J., Devlin, P. M. The history of the smallpox vaccine. Journal of Infection. 52 (5), 329-334 (2006).
  47. Hammarlund, E., et al. Duration of antiviral immunity after smallpox vaccination. Nature Medicine. 9 (9), 1131-1137 (2003).
  48. Lund, A. W., et al. Lymphatic vessels regulate immune microenvironments in human and murine melanoma. Journal of Clinical Investigation. 126 (9), 3389-3402 (2016).
  49. Tomura, M., Kabashima, K. Analysis of cell movement between skin and other anatomical sites in vivo using photoconvertible fluorescent protein "Kaede"-transgenic mice. Methods in Molecular Biology. , 279-286 (2013).
  50. Bellingan, G. J., Caldwell, H., Howie, S. E., Dransfield, I., Haslett, C. In vivo fate of the inflammatory macrophage during the resolution of inflammation: inflammatory macrophages do not die locally, but emigrate to the draining lymph nodes. Journal of Immunology. 157 (6), 2577-2585 (1996).
  51. Gautier, E. L., Ivanov, S., Lesnik, P., Randolph, G. J. Local apoptosis mediates clearance of macrophages from resolving inflammation in mice. Blood. 122 (15), 2714-2722 (2013).
  52. Abadie, V., et al. Neutrophils rapidly migrate via lymphatics after Mycobacterium bovis BCG intradermal vaccination and shuttle live bacilli to the draining lymph nodes. Blood. 106 (5), 1843-1850 (2005).
  53. Beauvillain, C., et al. CCR7 is involved in the migration of neutrophils to lymph nodes. Blood. 117 (4), 1196-1204 (2011).
  54. Rigby, D. A., Ferguson, D. J., Johnson, L. A., Jackson, D. G. Neutrophils rapidly transit inflamed lymphatic vessel endothelium via integrin-dependent proteolysis and lipoxin-induced junctional retraction. Journal of Leukocyte Biology. 98 (6), 897-912 (2015).
  55. Hanahan, D., Coussens, L. M. Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment. Cancer Cell. 21 (3), 309-322 (2012).
  56. Binnewies, M., et al. Understanding the tumor immune microenvironment (TIME) for effective therapy. Nature Medicine. 24 (5), 541-550 (2018).

転載および許可

このJoVE論文のテキスト又は図を再利用するための許可を申請します

許可を申請

さらに記事を探す

143 FITC

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

個人情報保護方針

利用規約

一般データ保護規則

お問い合わせ

図書館への推薦

JoVE ニュースレター

研究

教育

著者

図書館員

JoVEについて

Copyright © 2023 MyJoVE Corporation. All rights reserved