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要約

本研究では、特定のshRNAを使用して、PERK経路の2つの下流シグナル伝達成分である細胞保護カルシニューリンとアポトーシス促進型CHOPの発現をノックダウンします。反対に、これらは小胞体ストレスの誘導後の神経突起萎縮に対する初代皮質ニューロンの感受性を調節する。

要約

ストレス状態によって引き起こされる小胞体(ER)内の折り畳まれていないタンパク質の蓄積は、特殊なセンサーの活性化を介して折り畳まれていないタンパク質応答(UPR)を引き起こします。UPRは最初に恒常性を回復しようとします。しかし、損傷が持続する場合、シグナル伝達はアポトーシスを誘導します。

持続的および未解決の小胞体ストレスが神経変性疾患を含む多くの病理学的状態に寄与するという証拠が増えています。UPRは細胞保護プロセスとアポトーシスプロセスを切り替えることによって細胞の運命を制御するため、この遷移を定義するイベントとその調節に関与する要素を理解することが不可欠です。

最近、GM2ガングリオシドの異常な蓄積がERCa2+ 含量の枯渇を引き起こし、それがUPRセンサーの1つであるPERK(PKR様ERキナーゼ)を活性化することを実証しました。さらに、PERKシグナル伝達は、GM2蓄積によって誘導される神経突起萎縮およびアポトーシスに関与する。この点、下流のPERK成分の発現を分子的に調節し、神経突起萎縮を起こす神経細胞の脆弱性を変化させる実験系を確立しました。

ラット皮質神経細胞培養におけるカルシニューリン(細胞保護)およびCHOP(アポトーシス促進)発現のノックダウンを行った。細胞をレンチウイルス送達特異的shRNAに感染させ、次いで異なる時間にGM2で処理し、固定し、抗MAP2(マイクロチューブ関連タンパク質2)抗体で免疫染色した。その後、蛍光顕微鏡を用いて細胞画像を記録し、パブリックドメインの画像処理ソフトウェアImageJを用いて全神経突起伸長を評価した。これらのPERKシグナル伝達成分の発現の阻害は、ERストレスによって誘発される神経突起性萎縮を加速または遅延させることを明らかに可能にした。

このアプローチは、ERストレスの細胞系モデルで、神経突起萎縮に対するニューロンの脆弱性を評価するために使用される可能性があります。

概要

小胞体(ER)ストレスは、細胞小器官のタンパク質折り畳み能力を損なう摂動として定義されます。小胞体内腔内の折り畳まれていないタンパク質の蓄積は、折り畳まれていないタンパク質応答(UPR)と呼ばれる形質導入カスケードシグナルを活性化します。この複雑なシグナル伝達経路は、PERK(プロテインキナーゼRNA[PKR]様ERキナーゼ)、IRE1(イノシトールを必要とする酵素1)、およびATF6(活性化転写因子6)の3つのストレスセンサーによって調整されています。全員が一緒に恒常性を回復しようとします。しかし、ストレスが続くと、UPRは最終的にアポトーシスによって細胞死を誘導します1。

小胞体膜貫通タンパク質であるPERKは、小胞体ストレス時に真核生物開始因子-2アルファ(eIF2α)のリン酸化を導き、全体的なタンパク質合成、ひいては小胞体2におけるタンパク質負荷を減少させる。我々は、ヘテロ二量体Ca2+ホスファターゼであるカルシニューリンA/B(CNA/B)がPERKの細胞質ドメインに直接結合し、その自己リン酸化を増加させ、タンパク質翻訳と細胞生存率の阻害を有意に増強することを実証しました3,4。興味深いことに、CNA/Bは哺乳類の脳に豊富にあり、CNのサブユニットAの2つのアイソフォーム、αとβを区別しています。

持続的なERストレス下では、PERKシグナル伝達経路は活性化されたままの唯一のUPR分岐であり、したがって生存促進応答とアポトーシス応答の両方を媒介します。慢性期における下流の主要な事象の1つは、転写因子であるCHOP(CCAAT/エンハンサー結合タンパク質相同タンパク質)の誘導です5。慢性小胞体ストレスはまた、神経変性疾患を含む広範な病理学的障害への共通の寄与物としてますます認識されています6。UPRが細胞死の代わりに細胞保護シグナル伝達をどのように促進できるかを理解することが重要です 7。しかし、現在のところ、これら2つのUPR相間の遷移を制御する正確なメカニズムについてはほとんど知られていません。

最近、培養ニューロンにおいて、ガングリオシドGM2が小胞体膜に蓄積し、管腔カルシウム枯渇を誘導することを見出しました。これにより、神経突起萎縮とアポトーシスを媒介するPERKシグナル伝達が活性化されます 8。本研究では、培養ニューロンにおけるGM2の蓄積を、小胞体ストレス誘発性神経突起萎縮症の細胞系モデルとして用いる。具体的には、CN-AαとCHOPの2つのPERK因子発現が操作され、初期/保護イベントと慢性/アポトーシス段階の間の遷移が切り替わります。これを達成するために、それぞれの遺伝子は沈黙しています。したがって、初代皮質ニューロン培養物は、レンチウイルス送達された特異的shRNAに感染している。ウェスタンブロット解析では、スクランブルshRNAを保有するレンチウイルスに感染した対照細胞と比較して、CN-AαおよびCHOP発現レベルが大幅に低下することが明らかになりました。この処理の後、ニューロンは、外因性GM2の異なるインキュベーション時間に供され、固定され、抗微小管関連タンパク質2(MAP2)抗体9で免疫染色される。画像は落射蛍光顕微鏡で取得されます。全神経突起伸長は、総細胞数に対して評価される。

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プロトコル

動物の手順は、実験動物の世話と使用のための国立衛生研究所ガイドの承認されたプロトコルに従って実行されます。研究の実施の承認は、INIMEC-CONICET-UNC(決議番号014/2017 Bおよび006/2017 A)の動物管理および倫理委員会(CICUAL)によって付与されます。

1. 初代ラット皮質ニューロン培養

  1. E18 Wistar妊娠ラットをCO 2チャンバーに80%CO2 / 20%O2の混合物で60秒間麻酔し、次に頸椎を脱臼させて犠牲にします。
  2. 層流フードで次の手順を実行します。鉗子スタイル#3とまっすぐな鋭い小さなスプリングはさみ(材料の表)で胚から脳を細胞培養皿のハンクス溶液に抽出します。
  3. 2つの先端の細かい鉗子スタイル#5を使用して、20倍の虫眼鏡の下で組織を解剖し、前頭皮質を髄膜から分離します。前頭皮質を15 mLの円錐管に移し、3〜4 mLのトリプシン-EDTA(0.25%)で37°Cで15分間インキュベートし、化学的消化を行います。
  4. 消化後、3〜4mLのダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)と10%ウシ胎児血清(FCS)で希釈します。次に、遠心分離により、Ca 2 + / Mg2 + 遊離ハンクスバランスソルト溶液と0.1%グルコースで3回洗浄します(3000 gで5分間)。
  5. DMEMと10%FCSを加えた1000 μLチップを使用して上下にピペッティングすることにより、組織を10回機械的に解離します(材料表)。次に、ホモジネートを100 x gで1分間遠心分離し、上清を収集して残りの容量を1000 μLに完成させます。
  6. 細胞懸濁液を、10%FCS、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、および1%の必須アミノ酸添加剤を含む2 mLのDMEMを使用して、520 cell/mm2 の密度で細胞培養皿にプレートします( 材料の表を参照)。その後、5%CO2 を含む加湿環境下で37°Cで2時間インキュベートします。
    1. 細胞培養皿の有機物除去とポリ-L-リジンコーティング
      1. ガラス材料を反応チャンバーに入れて有機物を取り除き、96%エチルアルコールを加えて材料をほぼ覆います。次に、茶色がかった緑がかった泡が現れ始めるまで、68%(w / v)の硝酸を一滴ずつ加えます。これが発生したら、容器を部分的に覆い、爆発が止まるまで反応を継続させます。
        注意: 有毒ガスにさらされないように、ガス抽出キャビンの下の有機物を取り除きます。
      2. ポリ-L-リジンコーティングの前に、滅菌Mili-Q水でガラスを約10回すすいでください。次に、培養ガラスとディッシュを0.1 μg/μLのポリ-L-リジンで4時間インキュベートしてから使用します。インキュベーション後、滅菌Mili-Q水でガラスを約10回すすいでください。
  7. 神経細胞の分化を可能にするには、無血清サプリメントを使用して、無血清神経基礎培地に培地を変更します(材料の表)。処理するまで培養物を5%CO2 で37°Cに保ちます。

2.レンチウイルス産生

注:CN-AαアイソフォームまたはCHOPのいずれかの3'UTRを標的とする配列を含み、非標的配列(スクランブル)を持つオリゴヌクレオチドを 表1に示します。

  1. アニーリングでは、アニーリングバッファー(10 mM Tris-HCl、pH 7.5-8.0、50 mM NaCl、1 mM EDTA)を使用して、相補配列を持つ2つの一本鎖オリゴヌクレオチドを等モル量で混合します。
  2. 95°Cで2分間加熱した後、サンプルをヒートブロックまたはウォーターバスから室温のベンチトップに移してゆっくりと冷却します。得られた生成物[凝集末端を有する短いヘアピンRNA(shRNA)]を最終濃度0.5 μMに希釈し、分注して-20°Cで保存します。
  3. shRNAインサートをレンチウイルスベクターpLKO.3Gにクローニングし、GFPを緑色蛍光マーカーとして使用します。このために、滅菌チューブ中で以下を混合することにより、EcoRIおよびPacI制限酵素を含む1 μgのベクターを消化します:2 μLの10x制限酵素バッファー(100 mMビス-トリスプロパン-塩酸塩、pH 6.5、100 mM MgCl2、1 mg/mLウシ血清アルブミン)、1 μLの1 μg/μL pLKO.3G、0.5 μLの10 U/μL ECoRI、 0.5 μLのPacI(10 U/μL)、および16 μLの滅菌イオン水。
    1. ピペッティングで穏やかに混ぜます。反応液を37°Cで3〜4時間インキュベートします。
      注:一晩の消化は一般的に不要であり、DNA分解を引き起こす可能性があります。
  4. ライゲーションの場合は、消化したベクターを混合し、モル比3:1で挿入し、T4リガーゼおよびリガーゼバッファー(メーカー提供)とともに16°Cで一晩インキュベートします。
    注:この時点で、ライゲーション反応はさらに使用するまで4°Cで保存できます。
  5. DH5αコンピテントセル(材料の表)または別の適切な 大腸菌 株を以下のようにライゲーション反応で形質転換する。
    1. コンピテント 大腸菌 をライゲーション反応の総量と混合し、氷上で15分間冷やし、42°Cの浴に2分間置いた後、再び氷上で15分間冷やします。
    2. ヒートショックを受けた全量を15 mLチューブに移し、予め37°Cに維持したLuria-Bertani(LB)液体培地で1000 μLまで容量を完成させます。 約330rpmのオービタルシェーカーで37°Cで90分間細菌を振とうします。
    3. 5,000 x gで4°Cで5分間遠心分離し、900 μLの上清を廃棄します。残りの上清を使用してペレットを再懸濁します。細菌懸濁液を固体アンピシリン(100 μg/mL)LBプレート上に均等に広げます。
    4. 37°Cで一晩インキュベートし、細菌の増殖を確認します。この時点で、細菌は4°Cで4〜5日間保存することができます。
    5. 単一のコロニーを選び、10 mLのLB液体培地とアンピシリン(100 μg/mL)を含む50 mLチューブに移します。バクテリアを37°Cで約330rpmで振とうします。
    6. 培養液を遠心分離して細菌を5,000 x gで4°Cで5分間ペレット化し、上清を廃棄して細菌ペレットを保存します。これは-20°Cで保存することができます。
  6. プラスミドを細菌ペレットからDNA精製キットで精製するには、製造元の指示に従ってください(材料表)。260 nmでの吸光度を測定し、次の関係を使用して希釈係数を掛けて、DNA濃度を計算します:1.0 = 50 μg/mLの純粋な二本鎖(ds)DNAの260 。

3.レンチウイルス感染症

注意: クラスII層流フードでレンチウイルス生成手順を実行します。

  1. トランスフェクションの24時間前に、1-5 ×10 6 HEK 293細胞を8 mLの増殖培地中の直径100 mmの培養皿に播種し、37°C、5%CO2 で一晩インキュベートします。
  2. 14 μgのpKLO.3Gベクターを特異的インサート、10.5 μgのパッキングプラスミドpsPAXおよび3.5 μgのエンベローププラスミドpMD2.Gを混合します(材料表)。45 μLのプラスミドトランスフェクション試薬(材料表)を700 μLの還元血清培地(材料表)で希釈し、室温で5分間インキュベートします。次に、DNA混合物を希釈したプラスミドトランスフェクション試薬と混合し、穏やかに混合し、室温で20分間インキュベートします。
  3. 一方、HEK 293細胞培養の培養皿の培地を新鮮なDMEM用に交換した(トランスフェクション時に70%コンフルエント)。次に、DNA溶液の全量を一滴ずつ加えます。皿をそっと揺さぶる。トランスフェクション後に培地を追加/変更する必要はありません。
  4. 細胞を37°C、5%CO2で48時間〜72 時間インキュベートし、shRNAが最適な形質導入に到達できるようにし、蛍光顕微鏡を使用してGFP蛍光によって確認しました。その後、培地をレンチウイルスで回収し、4°Cで保存します。
  5. ウイルス上清を0.45 μmのナイロンメンブレンでろ取ります。フロースルーを1 mLで分注します。次に、17,000 x gで4時間遠心分離します。上清を捨ててペレットを保存してください。目に見えないペレットを乾燥させ、乾燥したら-80°Cで保管します。
    1. フラックスサイトメトリーによるウイルス滴定を行います。4 x 105 HEK 293細胞を24ウェルプレートに播種し、37°Cで24時間インキュベートします。次に、ウイルス粒子を200 μLのDMEM培地(材料表)に再懸濁し、各ウェルに0.05、0.02、および0.005 μLを加えます。
    2. ウイルス感染を72時間インキュベートし、培地を除去し、トリプシン処理(0.05%トリプシン、1mL)を3分間行います。10%FCS溶液に1 mLのDMEMを加え、500 x gで5分間遠心分離します。上清を捨て、ペレットをPBSで2回洗浄する。
    3. ペレットを100 μLのPBSで再懸濁し、100 μLの2%パラホルムアルデヒド(PFA)をPBSに固定します。フラックスサイトメーターで細胞を分析し、GFP蛍光細胞の割合を決定します。このデータを収集し、次の式を使用してウイルス滴定を計算します。
      ウイルス滴定
      figure-protocol-4814

4. ガングリオシドGM2蓄積ストレスによる初代ニューロン培養と抗MAP2抗体を用いた免疫細胞化学

  1. 初代皮質ニューロン培養物(in vitroで15日間)にCN-AαまたはCHOPの3' UTRを標的とする特定のshRNAオリゴヌクレオチドを感染させ、5%CO2 を含む37°Cで1日間インキュベートします。
    注:細胞が高い神経突起の成長を示す場合は、 in vitro で7〜8日間の初代皮質ニューロン培養も使用できます。
    1. エタノール中のガングリオシドGM2の500μMストック溶液を調製し、1時間超音波処理する。
    2. GM2ストック溶液を最終濃度2 μMの培養皿培地に加え、5%CO2 と共に37°Cで16時間、24時間、48時間インキュベートします。
  2. いくつかの培養物を使用して、ウェスタンブロット分析用の細胞ホモジネートを調製します(抗体の仕様については、 材料表を参照してください)。
  3. 手順 1.4 に従います。および1.5。次いで、細胞を4%PFAおよび120mMスクロースでPBS中で37°Cで20分間固定し、次いでPBSで洗浄する。ウェットチャンバー内の滑り止め膜でこの手順を実行します。その後、透過処理液(0.2%トリトンX-100 PBS溶液)を5分間加え、PBSで洗浄します。
    1. ブロッキングを可能にするためにPBSで45分間希釈した5%BSAを使用し、ブロッキング溶液で1:800に希釈した抗MAP2抗体と4°Cで一晩インキュベートします。
    2. インキュベーション時間の終了時に、PBSで2回洗浄し、二次抗体(材料表)とともに1時間インキュベートします。次に、細胞をPBSで洗浄し、水性封入剤を使用してガラスをスライドにマウントします(材料表)。

5. 神経突起萎縮解析

  1. CCDカメラを搭載した落射蛍光倒立顕微鏡を用いて、20倍エアレンズ(NA 0.8)で画像を取得します。ImageJプラグインを使用して画像を分析します。このためには、画像をImageJにロードし、[プロセス]をクリックして背景を減算 します|背景を減算します。
  2. 画像をクリック |調整 |しきい値を指定する か、Ctrl キー (または Cmd) + Shift + T キーを押します。最小値を調整するためのウィンドウが開き、パストレースとソーマトレースを区別できます。バイナリ画像をクリックします(神経突起と体細胞は白色です)。この画像では、フリーハンド選択を使用してソーマを削除します。選択したソーマ領域が再び黒くなります。
  3. トレースを選択し、[編集] をクリックします。セレクション |選択範囲を作成します。クリックするとROIを取得します Ctrl (または Cmd) と T 選択範囲のキーと 保存 します。元の画像を開き、ROIマネージャーパネルをクリックして、以前に取得した所属ROIを選択します。次に、元の画像をクリックします。
  4. ROIが画像にトレースされたら、Ctrlキー( またはCmd) キーと M キー(分析|測定)。ウィンドウが開きます。平均値(任意の単位a.u.)をコピーして、統計分析を処理します。
    注:μmとして値を取得するには、[ 分析]|スケールを設定します。値を設定するためのウィンドウが開きます。必ず正しい縮尺を追加してください(分析|スケールを設定)使用する顕微鏡の特性に応じて。

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結果

ここでは、2つのPERK下流成分のサイレンシングが小胞体ストレス細胞モデルのUPRの移行段階に影響を与えるかどうかという問題に取り組みます。これを達成するために、我々は、CN-Aα遺伝子ならびにCHOP遺伝子を、それぞれについて2つの特異的shRNA配列(表1)によって1日10の初代ニューロン培養においてサイレンシングした。発現はウエスタンブロッティングによ?...

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ディスカッション

神経細胞モデルにおける生存期からアポトーシスUPR期への移行の分子調節を可能にする実験系について述べる。

神経突起萎縮の適切な分析のためには、多数の長く高度に分岐したプロセスを有する初代ニューロン培養物を得ることが不可欠である9,11。これにより、ニューロン突起の伸長の検査が容易になり、処理間の明確な?...

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開示事項

著者は競合する金銭的利益を持っていません。

謝辞

イメージングに関する貴重な支援を提供してくれたゴンザロ・クアソロ博士と、細胞培養技術サポートを提供してくれたアンドレア・ペレグリーニ博士に感謝します。

この研究は、米国国立衛生研究所(#RO1AG058778-01A1、UTHSCSA-Instituto Instituto Investigación Médica M M Ferreyra間のサブアワード契約No 165148/165147)およびアルゼンチン国立科学技術振興庁(ANPCyT、PICT 2017 #0618)からの助成金によって支援されました。

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資料

NameCompanyCatalog NumberComments
Alexa Fluor 488 anti-MouseThermo Fisher Scientific#R37120
anti-CHOPThermo Fisher# MA1 - 250
Anti-CN-AαMillipore# 07-067
Anti-GM2Matreya#1961
anti-MAP2Sigma Aldrich# M2320
anti-β-actinThermo Fisher# PA1 - 183
aprotininSanta Cruz Biotechnology#3595
Axiovert 200 epifluorescence microscopeZeiss
B27 supplementLife Technologies#17504944
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)Life Technologies#11966025
EcoRIPromega#R6011
Fetal Calf Serum (FCS)Life Technologies#16000044
Fine-tippeds forceps  style #5Dumont
Forcep style #3Dumont
HEK 293ATCC#CRL-1573
IRDye 680 CW secondary antibodyLI-COR Biosciences#92632221
IRDye 680 secondary antibodyLI-COR Biosciences#92632220
IRDye 800 CW secondary antibodyLI-COR Biosciences#92632210
IRDye 800 CW secondary antibodyLI-COR Biosciences#92632211
lentiviral envelope plasmid pMD2.GAddgene#12259
lentiviral packing plasmid psPAX2Addgene#12260
lentiviral vector pLKO.3GAddgene#14748
Leupeptin hemisulfateSanta Cruz Biotechnology#295358
Lipofectamine LTX & Plus Reagent (plasmid transfection reagent)Life Technologies#A12621
MISSION shRNASigma Aldrich
Monosialoganglioside GM2Matreya#1502
NanoDrop 2000Thermo Scientific
Neurobasal MediumLife Technologies#21103049
Nitrocellulose membrane 0.45 µmBIO-RAD#1620115
Odyssey infrared imaging systemLI-COR Bioscience
OneShot Top 10Life Technology#C404010
Opti-MEM (Reduced serum media)Life Technologies#105802
PacIBioLabs#R0547S
penicillin-streptomycinLife Technologies#15140122
Pepstatin ASanta Cruz Biotechnology#45036
phenylmethylsulfonyl fluorideSanta Cruz Biotechnology#329-98-6
Poly-L-lysinesigma aldrichP#2636
Straight sharp small spring scissorsFine Science Tools
T4 DNA LigasePromega#M1801
Trypsin-EDTA 0.25 %Life Technologies#25200056
Vibra-Cell Ultrasonic Liquid Processor (VCX 130)Sonics
Wizard plus SV Minipreps DNA purification systemPromega#A1330

参考文献

  1. Schroder, M., Kaufman, R. J. The mammalian unfolded protein response. Annual Review of Biochemistry. 74, 739-789 (2005).
  2. Cui, W., Li, J., Ron, D., Sha, B. The structure of the PERK kinase domain suggests the mechanism for its activation. Acta Crystallographica. Section D, Biological Crystallography. 67, 423-428 (2011).
  3. Bollo, M., et al. Calcineurin interacts with PERK and dephosphorylates calnexin to relieve ER stress in mammals and frogs. PLoS One. 5, 11925(2010).
  4. Chen, Y., Holstein, D. M., Aime, S., Bollo, M., Lechleiter, J. D. Calcineurin beta protects brain after injury by activating the unfolded protein response. Neurobiology of Disease. 94, 139-156 (2016).
  5. Harding, H. P., et al. An integrated stress response regulates amino acid metabolism and resistance to oxidative stress. Molecular Cell. 11, 619-633 (2003).
  6. Hetz, C., Saxena, S. ER stress and the unfolded protein response in neurodegeneration. Nature Reviews Neurology. 13, 477-491 (2017).
  7. Lin, J. H., Li, H., Zhang, Y., Ron, D., Walter, P. Divergent effects of PERK and IRE1 signaling on cell viability. PLoS One. 4, 4170(2009).
  8. Virgolini, M. J., Feliziani, C., Cambiasso, M. J., Lopez, P. H., Bollo, M. Neurite atrophy and apoptosis mediated by PERK signaling after accumulation of GM2-ganglioside. Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Cell Research. 1866, 225-239 (2019).
  9. Ferreira, A., Busciglio, J., Landa, C., Caceres, A. Ganglioside-enhanced neurite growth: evidence for a selective induction of high-molecular-weight MAP-2. The Journal of Neuroscience. 10, 293-302 (1990).
  10. Moore, C. B., Guthrie, E. H., Huang, M. T., Taxman, D. J. Short hairpin RNA (shRNA): design, delivery, and assessment of gene knockdown. Methods in Molecular Biology. 629, 141-158 (2010).
  11. Kaech, S., Banker, G. Culturing hippocampal neurons. Nature Protocols. 1, 2406-2415 (2006).
  12. Rusnak, F., Mertz, P. Calcineurin: form and function. Physiological Reviews. 80, 1483-1521 (2000).
  13. Hogan, P. G., Chen, L., Nardone, J., Rao, A. Transcriptional regulation by calcium, calcineurin, and NFAT. Genes & Development. 17, 2205-2232 (2003).
  14. Endo, M., Mori, M., Akira, S., Gotoh, T. C/EBP homologous protein (CHOP) is crucial for the induction of caspase-11 and the pathogenesis of lipopolysaccharide-induced inflammation. Journal of Immunology. 176, 6245-6253 (2006).

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170 UPR RNA PKR PERK GM2 CN CHOP CCAAT 2 MAP2

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