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この記事について

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要約

以下の研究では、リアルタイムのハイスループットスクリーニング技術である電気セル基板インピーダンスセンシング(ECIS)を利用して、選択された金属有機フレームワークの毒物学的プロファイルを評価します。

要約

金属有機構造体(MOF)は、有機溶媒中で金属イオンと有機リンカーが配位して形成されるハイブリッドです。生物医学および産業用途でのMOFの実装は、その安全性に関する懸念につながっています。本明細書において、選択されたMOF、ゼオライトイミダゾールフレームワークのプロファイルを、ヒト肺上皮細胞への曝露時に評価した。評価のためのプラットフォームは、リアルタイム技術(すなわち、電気セル基板インピーダンスセンシング[ECIS])でした。この研究では、曝露された細胞に対する選択されたMOFの有害な影響のいくつかを特定し、議論します。さらに、この研究は、包括的な細胞評価のために他の生化学的アッセイと比較してリアルタイム法を使用することの利点を示しています。今回の研究では、観察された細胞挙動の変化は、異なる物理化学的特徴を持つMOFへの曝露と、使用されているそれらのフレームワークの投与量によって誘発される可能性のある毒性を示唆している可能性があると結論付けている。細胞の挙動の変化を理解することにより、物理化学的特性を具体的に調整することにより、生物医学的アプリケーションに使用されるMOFのセーフバイデザイン戦略を改善する能力が予測されます。

概要

金属有機構造体(MOF)は、有機溶媒中で金属イオンと有機リンカー1,2の組み合わせによって形成されるハイブリッドである。このような組み合わせの多様性により、MOFは構造の多様性3、調整可能な多孔性、高い熱安定性、および高い表面積4,5を備えています。このような特性により、ガス貯蔵6,7から触媒作用8,9まで、および造影剤10,11から薬物送達ユニット12,13まで、さまざまな用途で魅力的な候補となります。ただし、このようなアプリケーションへのMOFの実装により、ユーザーと環境の両方に対する安全性に関する懸念が生じています。予備的な研究では、例えば、細胞がMOF合成に使用される金属イオンまたはリンカーにさらされると、細胞機能と成長が変化することが示されています1,14,15。例えば、Tamames-Tabarらは、ZnベースのMOFであるZIF-8 MOFが、ZrベースおよびFeベースのMOFと比較して、ヒト子宮頸がん細胞株(HeLa)およびマウスマクロファージ細胞株(J774)においてより多くの細胞変化をもたらしていることを実証した。このような効果は、おそらくZIF-8の金属成分(すなわち、Zn)によるものであり、フレームワークの崩壊およびZnイオン放出時に細胞のアポトーシスを誘発する可能性がある1。同様に、Gandara-Loeらは、CuベースのMOFであるHKUST-1が、10 μg/mL以上の濃度で使用された場合、マウス網膜芽細胞腫細胞の生存率を最も低下させることを実証しました。これはおそらく、このフレームワークの合成中に取り込まれたCu金属イオンによるものであり、一度放出されると、露出した細胞15に酸化ストレスを誘発する可能性がある。

さらに、分析は、異なる物理化学的特性を有するMOFへの曝露が、曝露された細胞の異なる応答につながる可能性があることを示した。例えば、Wagnerらは、不死化ヒト気管支上皮細胞の曝露に使用されるZIF-8およびMIL-160(Alベースのフレームワーク)が、フレームワークの物理化学的特性、すなわち疎水性、サイズ、および構造特性に依存する細胞応答をもたらすことを実証しました16。補完的に、Chenらは、ヒト正常肝細胞(HL-7702)に曝露された160 μg/mLの濃度MIL-100(Fe)が、おそらくこの特定の骨格の金属成分(すなわちFe17)に起因する細胞生存率の最大の損失を引き起こすことを実証した。

これらの研究は、物理化学的特性と曝露濃度に基づいて細胞系に対するMOFの有害な影響を分類しているため、特に生物医学分野でのフレームワークの実装に関する潜在的な懸念が生じていますが、これらの評価のほとんどは単一時点の比色アッセイに基づいています。例えば、(3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド)テトラゾリウム(MTT)および水溶性テトラゾリウム塩(WST-1)アッセイを使用した場合、これらの生化学的試薬は、細胞も曝露された粒子との相互作用時に偽陽性につながる可能性があることが示されました18。テトラゾリウム塩と中性赤色試薬は、粒子の表面への高い吸着または結合親和性を有することが示され、その結果、薬剤信号干渉が生じた19。さらに、MOFに曝露された細胞の変化を評価するために使用されることが以前に示されたフローサイトメトリーなどの他のタイプのアッセイ20,21では、粒子の有害な影響の実行可能な分析を検討するには、大きな問題を回避する必要があることが示されました。特に、粒子のサイズの検出範囲、特にMOFによって提供されるものや、細胞が変化する前にキャリブレーションに使用される粒子の参照によって提供されるような混合集団では、対処する必要があります22。また、このようなサイトメトリーアッセイのための細胞標識中に使用される色素も、細胞が曝露されたナノ粒子を妨害する可能性があることが示された23。

この研究の目的は、リアルタイムのハイスループット評価アッセイを使用して、選択したMOFへの曝露時の細胞挙動の変化を評価することでした。リアルタイム評価は、曝露のウィンドウに関連する時間依存の影響に関する洞察を提供するのに役立ちます16。さらに、それらは、細胞-基質相互作用、細胞形態、および細胞-細胞相互作用の変化、ならびにそのような変化が目的の材料の物理化学的特性および曝露時間にそれぞれどのように依存するかに関する情報を提供する24,25。

提案されたアプローチの有効性と適用性を実証するために、ヒト気管支上皮(BEAS-2B)細胞、ZIF-8(ゼオライトイミダゾレート16の疎水性フレームワーク)、および電気細胞-基質インピーダンスセンシング(ECIS)を使用しました。BEAS-2B細胞は肺曝露のモデルであり26、以前は、ナノクレイとその熱分解副産物への細胞の曝露時の変化を評価するために使用されてきました26、27、28、および単層カーボンナノチューブ(SWCNT)18などのナノ材料の毒性を評価します。さらに、このような細胞は、肺上皮機能のモデルとして30年以上にわたって使用されている29。ZIF-8は、触媒作用30におけるその幅広い実装、およびバイオイメージングおよび薬物送達32のための造影剤31として、したがってそのような用途中の肺曝露の拡張の可能性のために選択された。最後に、非侵襲的なリアルタイム手法であるECISは、以前は、分析対象物(材料と薬物の両方)とばく露された細胞との間のさまざまな相互作用の結果として、細胞の接着、増殖、運動性、および形態の変化を評価するために使用されていました16,26.ECISは、交流(AC)を使用して、金電極に固定化されたセルのインピーダンスを測定し、インピーダンスの変化により、セル-金基板界面での抵抗と静電容量の変化、セル-セル相互作用によって誘発されるバリア機能、およびそのような金電極のセル層被覆率に関する洞察が得られます33、34。ECISを使用すると、ナノスケールの分解能で非侵襲的でリアルタイムの方法で定量的な測定が可能になります26,34。

この研究では、MOFによる細胞挙動の変化をリアルタイムで評価することの単純さと容易さを、シングルポイントアッセイ評価と比較します。このような研究は、関心のある他の粒子への曝露に応答して細胞プロファイルを評価するためにさらに外挿することができ、したがって、安全な設計による粒子試験とその後の実装の支援を可能にします。さらに、この研究は、単一点評価である遺伝的および細胞アッセイを補完する可能性があります。これは、細胞集団に対する粒子の有害な影響について、より多くの情報に基づいた分析につながる可能性があり、そのような粒子の毒性をハイスループット方式でスクリーニングするために使用することができる16,35,36。

プロトコル

1. ZIF-8合成

  1. この例では、1:10:100(金属:リンカー:溶媒)の質量比を使用してZIF-8を合成します。このために、硝酸亜鉛六水和物を測定し、測定を記録します。例えば質量比を利用して、リンカー、2−メチルイミダゾール、および溶媒(すなわち、メタノール)に必要な量を計算する。
  2. 硝酸亜鉛六水和物とリンカーを2つの異なるガラスバイアルに入れます。計算された量のメタノールの半分を硝酸亜鉛六水和物に、残りの半分をリンカーに加える。各溶液を溶解させます。
  3. 2つの溶液(すなわち、それぞれ金属およびリンカーを含む溶液)を組み合わせます。反応用溶液を入れた容器を攪拌板に置き、室温(RT)で700rpmで24時間攪拌します。

2. ZIF-8コレクション

  1. 上記の反応が終了したら(つまり、24時間後)、溶液を50 mLの遠沈管に入れ、3,075 x g で5分間遠心分離します(等量を使用し、ローターのバランスを取ります)。遠心分離チューブから上清を除去します。
  2. メタノール(5-15 mL)を遠沈管に加え、粒子を再分散させます。
  3. 遠心分離と洗浄のステップを少なくとも2〜4回繰り返します。最後の洗浄後、上清を排出します。
    注意: 洗浄ステップでは、沈殿していない種がすべて除去されます。
  4. チューブの蓋を外し、パラフィルムテープを上に置きます。続いて、パラフィルムに穴を開けます。サンプルを含むチューブをRTの真空チャンバーに入れ、24時間乾燥させます。

3. ZIF-8表面形態(走査型電子顕微鏡[SEM])

  1. ZIF-8の乾燥粉末をカーボンテープにマウントし、SEM分析中に発生する可能性のある帯電を防ぐために、金パラジウムで120秒間スパッタします。
  2. 顕微鏡の加速電圧を15 kVに設定します。粒子にピントを合わせ、倍率を調整します(500倍、1,000倍、1,500倍、4,000倍、10,000倍、20,000倍、30,000倍、40,000倍の倍率を使用)。
  3. 明確な粒子サイズと形態評価の両方を可能にする倍率で粒子を画像化します(5 μm、10 μm、および20 μmの粒子の範囲を考慮することをお勧めします)。
  4. 少なくとも 3 つの異なる視野からデータを収集し、それぞれについて異なる倍率を検討します。

4. ZIF-8元素組成

  1. SEMイメージングの手順に従います。
  2. SEM顕微鏡のエネルギー分散型X線(EDX)分光装置を用いて、試料の元素組成を分析する。
  3. SEMの加速電圧と倍率がEDXモニターと一致していることを確認してください。SEM顕微鏡の赤外線カメラをオフにします。
  4. EDXモニターで、[ スペクトルの 収集]に移動し、200秒の収集時間を入力します。これは、誤った評価につながる可能性のある粒子の帯電や崩壊を避けるために推奨されます。
  5. 少なくとも 3 つの異なる視野からデータを収集します。収集が完了したら、データを分析し、関心のある要素を特定します。

5. 細胞培養

  1. 5%ウシ胎児血清(FBS)および0.2%ペニシリン/ストレプトマイシンを添加した培地で不死化BEAS-2B細胞を培養します。
    注:5〜10の間の継代を使用して、使用されている細胞バッチで表現型の変化が以前に起こっていないことを確認する必要があります37 (すべての試薬は 材料表に記載されています)。
  2. 100 mm細胞培養プレートを取り、10 mLの培地をプレート上に置きます。1 mLのBEAS-2B細胞溶液をプレートに加えます。
  3. プレートをインキュベーター(37°C、5%CO2)に入れ、細胞を増殖させます。
  4. 24時間後にプレートをチェックして、細胞が80%コンフルエントに達したかどうかを判断します。ここで、80%コンフルエンシーとは、接着細胞によって覆われた表面の割合をいう。そうでない場合は、培地を交換し、80%のコンフルエンシーレベルに達するまで細胞を増殖させます。

6.細胞カウント

  1. プレート上の細胞が80%のコンフルエントに達したら、プレートから培地を取り出します。プレートを5 mLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄します。
  2. プレートからPBSを取り外します。2 mLのトリプシンをプレートに加え、インキュベーター(37°C、5%CO2)に2分間入れます。
  3. 2 mLの培地をプレートに加え、培地を上下にピペットで動かしてプレートから細胞を取り除きます。溶液を15 mLチューブに移し、123 x g で5分間遠心分離します。
  4. チューブから上清を取り出し、2 mLの培地を加えます。培地を上下にピペットして細胞を再分散させます。
  5. 1.5 mLチューブを使用して、20 μLのトリパンブルーを加え、次に20 μLの細胞溶液(トリパンブルー:細胞溶液の1:1の比率)を加えます。
  6. 10 μLの細胞混合物をスライドガラス上に置き、自動セルカウンターに置きます。画面にフォーカスが合うまで待ってから、[ キャプチャ]を選択します。
  7. 画面には、生細胞数と細胞生存率が表示されます。測定範囲は1 x 104-1 x 107 セルです。
  8. あるいは、血球計算盤を使用して手動で細胞をカウントします。
    1. このために、15〜20μLのトリパンブルー処理細胞溶液を血球計算盤に加える。
    2. 血球計算盤のグリッド線に10倍の対物レンズフォーカスを備えた正立顕微鏡を使用します。
    3. 4つの外側の正方形のセルの数を数え、その数を4で割ります。次に、10,000を掛けて、生細胞数を取得します。
    4. 細胞生存率を計算するには、生細胞数と死細胞数を合計して総細胞数を求め、続いて生細胞数を総細胞数で割ります。

7. ZIF-8用量調製

  1. 1 mg/mL の ZIF-8 ストック溶液を作成します。このために、ZIF-8の量を測定し、粒子に脱イオン(DI)水を加えて1 mg / mL濃度にします。
  2. 超音波処理(超音波処理器を超音波処理器に設定)ZIF-8ストック溶液を水浴中で30秒間隔で2分間処理する。
  3. 式C 1 V1= C 2 V2を使用して、所望の用量に達するために必要なストック溶液とダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)の量を計算することにより、細胞曝露のためにZIF-8の異なる用量を作成します。用量は0〜950μg/ mLの範囲になります。
    注:この実験では、0 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、および950 μg/mLの用量を選択しました。

8.ハーフ最大阻害濃度(IC 50)

  1. 細胞カウント後、BEAS-2B細胞を4 x 104 細胞/mLの密度で96ウェルプレートに100 μL/ウェルの容量で播種します。
    1. 4 x 104細胞/mLの密度に達するには、C 1 V1 = C2 V2を使用して、培地と組み合わせるために必要な細胞溶液の量を計算します。
    2. 各用量のブランクウェルを維持するようにしてください。ZIF-8曝露までこれらのウェルを空のままにします。
  2. 96ウェルプレートを37°C、5%CO2 のインキュベーターに入れ、細胞を24時間にわたってコンフルエントな単層に増殖させます。
  3. 培地をウェルから取り出し、BEAS-2B細胞を0〜950 μg/mLの範囲のZIF-8用量にさらします。100 μLのZIF-8をそれぞれのブランクウェルとセルウェルに加えます。
  4. 96ウェルプレートをインキュベーターに戻し、48時間の暴露時間をかけます。
  5. ばく露後、10 μLの4-[3-(4-イドフェニル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-5-テトラゾリオ]-1,3-ベンゼンジスルホネート(WST-1)を各ウェル(ブランクおよびセルウェル)に加え、2時間インキュベートします。培地は井戸に残ります。比率は1:10(試薬:培地)です。
  6. 485 nmの吸光度を使用して、プレートリーダーで吸光度の変化を読み取ります。
  7. IC50値を決定するためにソフトウェアを通して細胞生存率を計算する(セクション10 を参照されたい)。

9. 電気セル基板インピーダンスセンシング(ECIS)

  1. 96ウェルプレート(96W10idf)を使用してECIS分析を実行します。プレート28 は、約4mm2の領域をカバーする指間接続電極を含む。
  2. まず、すべてのウェルがセンサーによって読み取られていることをテストします。このためには、96ウェルプレートをウェルステーションに置き、 セットアップ ボタンをクリックします。
  3. ウェルが正しく接続されている場合、緑色が表示されます。接続されていない井戸は赤で識別されます。このような場合は、ウェルプレートを取り外して再度挿入し、すべてのウェルが実行可能な緑色の測定値を提供するまで、 セットアップ ボタンをもう一度クリックします。
  4. 電位ドリフトを防ぐために、ウェルあたり200 μLの媒体で電極を40分間安定させます。使用する各ウェルに200 μLの培地を添加し、96ウェルプレートをECISステーションに置きます。 セットアップ/チェック をクリックして、プレートが正しく接続されていることを確認します。 [安定]をクリックします。
  5. 安定化が完了したら、ステーションからプレートを取り外し、各ウェルから培地を取り出します。
  6. BEAS-2B細胞を4 x 104 細胞/mLの密度で、ウェルあたり100 μLの容量で細胞を含むウェルに播種し、プレートをインキュベーターのECISステーションに置きます。
  7. モニターで [ チェック ] をクリックして、すべての電極がステーションのセンサーによって読み取られていることを確認します。
  8. [複数の周波数/時間(MFT)]を選択して、タイムコース測定を設定します。プログラムは、7つの異なる周波数で各井戸を測定します。
  9. [開始]をクリックして24時間実行し、セルがコンフルエントな単層を形成できるようにします。
  10. 24時間後、細胞を含むウェルはモニター上で増加した抵抗を示すであろう。これは、セルが電極に付着していることを示す指標です。
  11. モニターの [一時停止 ] を押して、データ収集を停止します。
  12. 上記のセクション7で概説した手順に従って、計算されたIC8 値の上、上、および下でZIF-50用量を作成します。
  13. ZIF-8ナノ粒子をそれぞれのブランクウェルとセルウェルに1ウェルあたり100 μLの容量でさらし、96ウェルプレートをステーションに戻します。
  14. モニターの[ チェック ]をもう一度クリックして、センサーがすべての電極を読み取っていることを確認します。[ 再開] をクリックし、システムを72時間実行して、セルラーの動作と添付ファイルを監視します。
  15. データ収集が完了したら、モニターの [完了 ]をクリックします。ファイルを保存するには、[ファイル] > [名前を付けて保存] をクリックします。データをスプレッドシート ファイルとして保存します。
  16. アルファパラメータを取得するには、 モデルをクリックします。画面のポップアップで、[メディアのみのウェル]をクリックし、 メディアのみのウェルを選択します。
  17. [ 参照の設定 ]をクリックします。モニターで、[ 検索]をクリックします。
  18. システムに表示されている井戸が選択したものと同じでない場合は、手順 9.16 を繰り返します。
  19. [設定]をクリックします。[Tレンジのフィット]をクリックして、データ収集に必要な時間範囲を決定します。
  20. 処理中に、[ アルファ]をクリックします。分析が終了したら、[ RbAの保存 ]をクリックしてスプレッドシートファイルとして保存します。
    注意: 製造元のWebサイト38にあるECISマニュアルを参照してください。

10.データ分析

  1. セム
    1. イメージングソフトウェアを開き、SEM画像を解析します。[ ファイル] > [開く] をクリックし、分析する画像を選択します。
    2. 画像>タイプ>8ビットをクリックして画像をグレースケールに変換し、しきい値操作を実行します。
    3. ピクセルの距離測定値をミクロンに調整します。 直線 ツールをクリックして、測定する各粒子の長さを追跡します。
    4. [ 分析] をクリックし、[ スケールの設定] をクリックします。既知の距離は、SEM画像上のスケールバーのサイズの長さに設定されます。長さの既知の単位はミクロンに設定されます。 [グローバル ] をオンにして [OK] をクリックします。
    5. 直線ツールをクリックし、粒子の直径をトレースしてから、[分析と測定]を選択します。長さの結果を記録します。
    6. 収集したすべての画像に対して繰り返します。適切な統計評価のために少なくとも60個の粒子からの全ての直径を平均する。
  2. ティッカー
    1. 収集されたすべての画像から、各要素のすべての重量パーセンテージを一緒に平均します(上記のEDXセクションを参照)。
    2. スプレッドシートを使用して、各要素の棒グラフをX軸にプロットし、それらの平均元素重量パーセンテージをY軸にプロットします。
  3. IC50
    1. ブランクウェルを平均化し、各反復について用量ウェルを平均化する。
    2. 用量ブランク平均から対照ブランク平均を差し引くことにより、調整ブランクを計算する。平均線量値から調整ブランクを差し引くことにより、各線量の真の細胞値を計算します。
    3. 平均対照値から各用量の調整済みブランク値を差し引きます。式を使用して各用量の細胞生存率を計算します:細胞生存率=(真の細胞値/(対照値-調整済みブランク値))x 100。
    4. 他のすべての反復に対してこれを繰り返します。
    5. 各複製の細胞生存率を一緒に平均して、各用量の最終的な細胞生存率を取得します。
    6. ソフトウェアで、画面の [XY] タブを選択します。
    7. 濃度(用量)の値をX列に入力し、各用量からの細胞生存率(%)をY列に入力します。
    8. [分析] > [変換] > [OK] をクリックして X 値を 変換し、[X = Log(X)] に変換します。
    9. Y 値を正規化するには、[ 変換されたデータ ] シートを選択し、[ 分析] をクリックして、[ 正規化] を選択します。
    10. 変換の 正規化 データシートを選択し、 分析をクリックして、 非線形回帰(カーブフィット)を選択します。 用量- 反応-阻害を選択し、 ログ(阻害剤)対反応変数の傾き(4つのパラメータ)をクリックします。[ OK] をクリックして結果を表示します。
  4. エコシス
    1. スプレッドシートから、各反復(ブランクウェルと線量ウェル)の抵抗(オーム)列を取得し、4,000Hzの周波数からそれらを一緒に平均します。この周波数は、細胞間接触評価38を可能にする。
    2. 各反復の平均線量から平均ブランクを差し引くことにより、補正抵抗を計算します。各用量の反復に対する補正抵抗を平均化する。
    3. アルファ値に対して同じ手順を繰り返して、平均アルファ パラメータを計算します。x軸を時間(h)としてプロットし、y軸を各線量値の平均抵抗/アルファ値としてプロットします。

11. 統計解析

  1. セム
    1. ZIF-8粒子の平均直径を計算したスプレッドシートファイルで標準偏差を実行します。
    2. スプレッドシートの STDEV 関数を使用して、60個の粒子のデータをハイライト表示し、 Enterをクリックします。計算した各平均直径の標準偏差をグラフ化します。
  2. ティッカー
    1. SEM(ステップ11.1.1-11.1.2)と同様に、スプレッドシートの STDEV 関数を使用して、各平均元素組成の標準偏差を計算します。各平均元素組成の標準偏差をグラフ化します。
  3. IC50
    1. IC50 の計算に使用するソフトウェアを開き、 グループ化されたデータシートをクリックします。
    2. グループA、グループBなどのラベルの付いた行にZIF-8用量を入力します。各用量の平均細胞生存率を入力し、ZIF-8用量に対応する列に複製します。
    3. 「分析」をクリックし、「列分析」で「一元配置分散分析」(およびノンパラメトリックまたは混合)を選択します。
    4. 実験計画タブで、マッチングまたはペアリングなしを選択します。残差のガウス分布で、はい、分散分析を使用します。最後に、等しいSDを仮定で通常の分散分析検定を使用するはいを選択します。
    5. 多重比較タブで、各列の平均を制御列の平均と比較を選択します。[OK]をクリックして結果を表示します。

結果

この研究は、一般的な in vitro モデル細胞株39 (BEAS-2B)を使用して、実験室で合成されたMOFへの曝露時の細胞挙動の変化を評価するためのECISの実現可能性と適用性を実証することを目的としていました。これらの変化評価は、従来の比色アッセイによる分析によって補完されました。

フレームワークの物理化学的特性は、採用された方法の再現性、...

ディスカッション

以前の分析では、ECISを使用して、分析物(すなわち、カーボンナノチューブ35、薬物43、またはナノクレイ16)にさらされた細胞の挙動を評価できることが示されました。さらに、Stueckleらは、ECISを使用して、ナノクレイとその副産物に曝露されたBEAS-2B細胞の毒性を評価し、細胞の挙動と付着がそのような材料の物理化学的特性に依存するこ...

開示事項

著者らは、この研究における利益相反はないと報告している。

謝辞

この研究の一部は、国立総合医学研究所(NIGMS)のT32プログラム(T32 GM133369)と国立科学財団(NSF 1454230)によって資金提供されました。さらに、WVU共有研究施設と応用生物物理学の支援とサポートが認められています。

資料

NameCompanyCatalog NumberComments
 4-[3-(4-idophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-5-tetrazolio]-1,3-benzene disulfonate (WST-1 assay) Roche5015944001
0.25% Trypsin-EDTA (1x)Gibco25255-056
100 mm platesCorning430167
1300 Series A2 biofume hoodThermo Scientific323TS
2510 Branson bath sonicatorProcess Equipment & Supply, Inc. 251OR-DTH
2-methylimidazole, 97%Alfa Aesar693-98-1
5 mL sterile microtubeArgos TechnologiesT2076S-CA
50 mL  tubes Falcon352098
96W10idf well platesApplied Biophysics 96W10idf PET
96-well platesFisherbrandFB012931
BiorenderBiorenderN/A
Countess cell counting chamber slidesInvitrogenC10283
Countess II FL automated cell counterLife TechnologiesC0916-186A-0303
Denton Desk V sputter and carbon coaterDenton VacuumN/A
Dimethly sulfoxide Corning25-950-CQC
DPBS/ModifiedCytivaSH30028.02
Dulbecco's modified Eagle mediumCorning10-014-CV
ECIS-ZΘApplied Biophysics ABP 1129
ExcelMicrosoftVersion 2301
Falcon tubes (15 mL)Corning352196
Fetal bovine serumGibco16140-071
FLUOstar OPTIMA plate readerBMG LABTECH413-2132
GraphPad Prism Software (9.0.0)GraphPad Software, LLCVersion 9.0.0
HERAcell 150i CO2 IncubatorThermo Scientific50116047
Hitachi S-4700 Field emission scanning electron microscope equipped with energy dispersive X-ray Hitachi High-Technologies CorporationS4700 and EDAX TEAM analysis software
ImageJ softwareNational Institutes of HealthN/A
Immortalized human bronchial epithelial cellsAmerican Type Culture CollectionCRL-9609
Isotemp freezerFisher Scientific 
Methanol, 99%Fisher Chemical67-56-1
Parafilm sealing filmThe Lab DepotHS234526A
Penicillin/SteptomycinGibco15140-122
Sorvall Legend X1R Centrifuge Thermo Scientific75004220
Sorvall T 6000BDU PONT T6000B
Trypan blue, 0.4% solution in PBSMP Biomedicals, LLC1691049
Vacuum ChamberBelart999320237
Zinc Nitrate Hexahydrate, 98% extra pureAcros Organic101-96-18-9

参考文献

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