虚血および蘇生中の脳イメージングおよび脳生理学的モニタリングのためのマウス心停止モデル

要約

このプロトコルは蘇生のための胸の圧迫を要求しない窒息の心停止の独特なマウス モデルを示す。このモデルは、心停止および蘇生中の脳生理学のダイナミクスをモニタリングおよびイメージングするのに役立ちます。

要約

ほとんどの心停止(CA)生存者は、さまざまな程度の神経学的欠損を経験します。CA誘発性脳損傷のメカニズムを理解し、効果的な治療法を開発するためには、実験的なCA研究が不可欠です。この目的のために、いくつかのマウスCAモデルが確立されています。これらのモデルのほとんどは、心肺蘇生法(CPR)のための胸骨圧迫を行うために、マウスを仰臥位に置きます。しかし、この蘇生手順では、CAおよび蘇生中の脳生理学のリアルタイムイメージング/モニタリングが困難になります。そのような重要な知識を得るために、本プロトコルは、胸骨圧迫CPRステップを必要としないマウス仮死CAモデルを提示する。このモデルにより、CA前のベースラインからCA後の早期再灌流までの血流、血管構造、電位、および脳組織酸素の動的変化を研究できます。重要なのは、このモデルが老齢マウスに適用されることです。したがって、このマウスCAモデルは、CAが脳生理に及ぼす影響を読み解くための重要なツールとなることが期待されます。

概要

心停止(CA)は依然として世界的な公衆衛生上の危機です¹。米国だけでも、年間356,000件以上の院外および290,000件の院内CA症例が報告されており、CAの被害者のほとんどは60歳以上です。特に、CA後の神経学的障害は生存者によく見られ、これらはCA管理にとって大きな課題となっている^2,3,4,5。CA後の脳病理学的変化と神経学的転帰への影響を理解するために、さまざまな神経生理学的モニタリングおよび脳組織モニタリング技術^が患者に適用されています6、^7、8、⁹、^10、11、12。近赤外分光法を用いて、CAラットのリアルタイム....

プロトコル

ここで説明するすべての手順は、研究における動物のケアと使用に関する国立衛生研究所(NIH)のガイドラインに従って実施され、プロトコルはデューク動物ケアおよび使用委員会(IACUC)によって承認されました。本研究では、8〜10週齢のC57BL/6雄および雌マウスを使用しました。

1.手術の準備

1. デジタルスケールでマウスの重量を量り、4インチ x 4インチ x 7インチのプレキシガラス麻酔導入ボックスに入れます。
2. 麻酔気化器を5%イソフルランに、酸素流量計を30に、窒素流量計を70に調整します( 材料表を参照)。
3. 動物を誘導ボックスから取り出し、呼吸数が毎分30〜40呼吸に減少したら、手術台に仰臥位で横たえます。.
4. 鈍い鉗子で舌を引き出し、利き手ではない方の手で持ちます。利き手を使って喉頭鏡( 資料表参照)をマウスの口に挿入し、声帯を視覚化します。
5. 利き手でない方の手を使用して、ガイドワイヤーと20Gの静脈内カテーテルを口に挿入します。ガイドワイヤーを気管にそっと挿入します。
6. カテーテルの翼部分が鼻先と平らになるまで、カテーテルを気管に押し込みます。
   注:完全に麻酔されていないマウスは、気管を傷つけて気道出血を引き起こす可能性があるため、挿管しないでくださ....

ディスカッション

実験的CA研究では、窒息、塩化カリウム注射、または電流由来の心室細動がCA^16、17、¹⁸、¹⁹、^20、21、^22、23を誘発するために使用されています。通常、これらのCAモデル、特にマウスでは蘇生にC.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adrenalin	Par Pharmaceutical	NDC 42023-159-01
Alcohol swabs	BD	326895
Animal Bio Amp	ADInstruments	FE232
BP transducer	ADInstruments	MLT0699
Bridge Amp	ADInstruments	FE117
Heparin sodium injection, USP	Fresenius Kabi	NDC 63323-540-05
Isoflurane	Covetrus	NDC 11695-6777-2
Laser Doppler perfusion monitor	Moor Instruments	moorVMS-LDF1
Laser speckle imaging system	RWD	RFLSI III
Lubricant eye ointment	Bausch + Lomb	339081
Micro clip	Roboz	RS-5431
Mouse rectal probe	Physitemp	RET-3
Needle electrode	ADInstruments	MLA1213	29 Ga, 1.5 mm socket
Nitrogen	Airgas	UN1066
Optic plastic fibre	Moor Instruments	POF500
Otoscope	Welchallyn	728	2.5 mm Speculum
Oxygen	Airgas	UN1072
PE-10 tubing	BD	427401	Polyethylene tubing
Povidone-iodine	CVS	955338
PowerLab 8/35	ADInstruments
Rimadyl (carprofen)	Zoetis	6100701	Injectable 50 mg/ml
Small animal ventilator	Kent Scientific	RoVent Jr.
Temperature controller	Physitemp	TCAT-2DF
Triple antibioric & pain relief	CVS	NDC 59770-823-56
Vaporizer	RWD	R583S
0.25% bupivacaine	Hospira	NDC 0409-1159-18
0.9% sodium chroride	ICU Medical	NDC 0990-7983-03
1 mL plastic syringe	BD	309659
4-0 silk suture	Look	SP116	Black braided silk
6-0 nylon suture	Ethilon	1698G
8.4% sodium bicarbonate Inj., USP	Hospira	NDC 0409-6625-02
20 G IV catheter	BD	381534	20GA 1.6 IN
30 G PrecisionGlide needle	BD	305106	30 G X 1/2