免疫組織化学とデジタル画像解析に基づく子宮内膜免疫細胞の定量的検出のためのプラットフォーム

要約

ここでは、着床期間中に反復流産した患者の子宮内膜免疫細胞を定量的に分析するために、デジタル免疫組織化学画像解析プラットフォームが開発され、検証されました。

要約

反復流産(RM)患者の子宮内膜免疫微小環境を評価するために、黄体中期の子宮内膜免疫細胞を定量的に分析するためのデジタル免疫組織化学画像解析プラットフォームが開発され、検証されました。すべての子宮内膜サンプルは、月経周期の黄体中期に収集されました。パラフィン包埋子宮内膜組織を厚さ4 μmのスライドに切片化し、CD56+ uNK細胞、Foxp3+ Treg、CD163+ M2マクロファージ、CD1a+ DC、CD8+ T細胞などの子宮内膜免疫細胞を検出するために免疫組織化学(IHC)染色を実施しました。パノラマスライドはデジタルスライドスキャナーでスキャンし、定量分析には市販の画像解析システムを使用しました。子宮内膜免疫細胞の割合は、子宮内膜細胞全体の免疫細胞数を割って算出しました。市販の画像解析システムを用いることで、従来の画像解析では解析が困難または不可能であった子宮内膜免疫細胞の定量的評価を簡便かつ正確に解析することが可能となりました。この方法論は、免疫細胞間の相互作用を含む子宮内膜微小環境、およびさまざまな生殖不全患者の不均一性を定量的に特徴付けるために適用できます。子宮内膜免疫細胞の定量的評価のためのプラットフォームは、RM患者の診断と治療にとって重要な臨床的意義を持つ可能性があります。

概要

不定育症(RM)とは、2回以上連続して妊娠ができない病気で、近年、臨床医から注目されている複雑な疾患です。出産可能年齢の女性におけるRMの発生率は1%〜5%^です1。以前の研究の結果は、免疫因子がRM2,3,4,5の病因と密接に関連していることを示しています。母体と胎児の界面における免疫ホメオスタシスの維持は、胚の着床と発育に必要です。子宮内膜免疫細胞は、栄養膜浸潤の促進、螺旋動脈のリモデリング、胎盤の発達への寄与など、この恒常性を維持するためにいくつかの調節的役割を果たします^6,7,8,9。

RMの女性における子宮内膜免疫細胞の異常は以前に報告されています。結果は、高密度の子宮ナチュラルキラー細胞(uNK)と^RM10,11,12

プロトコル

研究内容とプロトコルは、深セン中山泌尿器科病院の研究倫理委員会によって倫理的にレビューされ、承認されています。研究に参加したすべての女性(20〜40歳)は、サンプルの収集と使用についてインフォームドコンセントを提供しました。

1.病理組織の獲得

1. ティッシュ採取用のツール、つまり測定定規、ピンセット、埋め込みカセット、埋め込み紙、ティッシュバスケットを準備します。
2. ピペルカテーテルによる標準的なアプローチを使用して収集された子宮内膜組織(緑豆よりも大きい)の量が十分であるかどうかを観察します。
3. 子宮内膜組織をホルマリンからピンセットで包埋紙に転写し、定規で子宮内膜組織の寸法を測定します。
4. 子宮内膜組織を包埋紙で包み、包埋カセットに入れます。
5. 包埋カセットをティッシュバスケットに入れて脱水します。

2.組織の脱水

1. 組織バスケットを脱水機の反応チャンバーに入れ( 材料表を参照)、日常的な組織脱水の手順を開始します:ホルマリンを100分間。ホルマリンを100分間。アルコール度数75%で60分。アルコール度数85%で60分。アルコール度数95%で60分。アルコール度数100%で60分。アルコール度数1....

ディスカッション

このプロトコルは、RM患者の子宮内膜免疫細胞を定量的に分析するためのデジタル免疫組織化学画像解析プラットフォームを確立しました。ここでは、RM患者の子宮内膜免疫微小環境を評価するために、6つの子宮内膜免疫マーカーが検出されました。

黄体中期の受容性子宮内膜は、着床と妊娠を成功させるための鍵です^27,28。?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Automated coverslipper	Sakuraus	DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2
CD163	GrowGn Biotechnology	NCL-L-CD163
CD1a	Gene Tech	GM357129
CD56	Gene Tech	GT200529
CD8	Novocastra	NCL-L-CD8-4B11
Dehydrator	Thermo Fisher	Excelsior ES
Digital pathology and	Indica labs	HALO
Foxp3	YILIFANG biological	14-477-82
IHC stainer	Leica	BOND III
Image analysis platform	Indica labs	HALO
Slide Scanner	Olympus life science	VS200