Plateforme de détection quantitative des cellules immunitaires de l’endomètre basée sur l’immunohistochimie et l’analyse d’images numériques

Résumé

Ici, une plateforme numérique d’analyse d’images d’immunohistochimie a été développée et validée pour analyser quantitativement les cellules immunitaires de l’endomètre de patientes présentant des fausses couches à répétition dans la fenêtre d’implantation.

Résumé

Afin d’évaluer le microenvironnement immunitaire de l’endomètre des patientes présentant des fausses couches récurrentes (RM), une plateforme numérique d’analyse d’images immunohistochimiques a été développée et validée pour analyser quantitativement les cellules immunitaires de l’endomètre pendant la phase mi-lutéale. Tous les échantillons d’endomètre ont été prélevés pendant la phase mi-lutéale du cycle menstruel. Les tissus endométriaux enrobés de paraffine ont été sectionnés en lames de 4 μm d’épaisseur, et une coloration immunohistochimique (IHC) a été effectuée pour détecter les cellules immunitaires de l’endomètre, y compris les cellules uNK CD56+, les Tregs Foxp3+, les macrophages M2 CD163+, les DC CD1a+ et les lymphocytes T CD8+. Les diapositives panoramiques ont été numérisées à l’aide d’un scanner numérique et un système commercial d’analyse d’images a été utilisé pour l’analyse quantitative. Le pourcentage de cellules immunitaires de l’endomètre a été calculé en divisant le nombre de cellules immunitaires dans le nombre total de cellules de l’endomètre. En utilisant le système d’analyse d’images commercial, l’évaluation quantitative des cellules immunitaires de l’endomètre, qui sont difficiles ou impossibles à analyser avec l’analyse d’image conventionnelle, pourrait être facilement et avec précision. Cette méthodologie peut être appliquée pour caractériser quantitativement le microenvironnement de l’endomètre, y compris l’interaction entre les cellules immunitaires, et son hétérogénéité pour différentes patientes souffrant d’insuffisance reproductive. La plate-forme d’évaluation quantitative des cellules immunitaires de l’endomètre peut être d’une importance clinique importante pour le diagnostic et le traitement des patientes atteintes de RM.

Introduction

Les fausses couches récurrentes (RM) sont la perte de deux grossesses consécutives ou plus et sont une maladie complexe qui a attiré l’attention des cliniciens ces dernières années. Le taux d’incidence de la MR chez les femmes en âge de procréer est de 1 % à 5 % ¹. Les résultats d’études antérieures montrent que les facteurs immunitaires sont étroitement associés à la pathogenèse de RM 2,3,4,5. Le maintien de l’homéostasie immunitaire à l’interface mère-fœtus est nécessaire à l’implantation et au développement de l’em....

Protocole

Le contenu et le protocole de la recherche ont été examinés et approuvés par le comité d’éthique de la recherche de l’hôpital d’urologie Zhongshan de Shenzhen. Toutes les femmes (âgées de 20 à 40 ans) qui ont participé à l’étude ont donné leur consentement éclairé pour le prélèvement et l’utilisation de l’échantillon.

1. Acquisition de tissus pathologiques

1. Préparez les outils pour le prélèvement des tissus, à savoir la règle de mesure, la pince à épiler, la cassette d’enrobage, le papier d’enrobage et le panier à mouchoirs.
2. Observez si la quantité de tissu endométrial (plus gros qu’un haricot mungo), pré....

Discussion

Ce protocole a permis d’établir une plateforme numérique d’analyse d’images immunohistochimiques permettant d’analyser quantitativement les cellules immunitaires de l’endomètre des patientes atteintes de RM. Ici, six marqueurs immunitaires de l’endomètre ont été détectés pour évaluer le microenvironnement immunitaire de l’endomètre chez les patientes atteintes de RM.

Un endomètre réceptif pendant la phase mi-lutéale est la clé d’une implantation et d’une grosses.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Automated coverslipper	Sakuraus	DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2
CD163	GrowGn Biotechnology	NCL-L-CD163
CD1a	Gene Tech	GM357129
CD56	Gene Tech	GT200529
CD8	Novocastra	NCL-L-CD8-4B11
Dehydrator	Thermo Fisher	Excelsior ES
Digital pathology and	Indica labs	HALO
Foxp3	YILIFANG biological	14-477-82
IHC stainer	Leica	BOND III
Image analysis platform	Indica labs	HALO
Slide Scanner	Olympus life science	VS200