Plataforma para Detecção Quantitativa de Células Imunes Endometriais Baseada em Imunohistoquímica e Análise Digital de Imagens

Resumo

Aqui, uma plataforma de análise de imagens de imunohistoquímica digital foi desenvolvida e validada para analisar quantitativamente as células imunes endometriais de pacientes com abortos espontâneos recorrentes na janela de implantação.

Resumo

Para avaliar o microambiente imune endometrial de pacientes com abortamento recorrente (RM), uma plataforma de análise de imagem imunoistoquímica digital foi desenvolvida e validada para analisar quantitativamente as células imunes endometriais durante a fase lútea média. Todas as amostras de endométrio foram coletadas durante a fase lútea média do ciclo menstrual. Os tecidos endometriais incluídos em parafina foram seccionados em lâminas de 4 μm de espessura, e a coloração imunoistoquímica (IHQ) foi realizada para detectar células imunes endometriais, incluindo células uNK CD56+, Tregs Foxp3+, macrófagos CD163+ M2, DCs CD1a+ e células T CD8+. As lâminas panorâmicas foram escaneadas por meio de um scanner digital de lâminas e um sistema comercial de análise de imagens foi utilizado para análise quantitativa. A porcentagem de células imunes endometriais foi calculada dividindo-se o número de células imunes nas células endometriais totais. Usando o sistema de análise de imagem comercial, a avaliação quantitativa de células imunes endometriais, que são difíceis ou impossíveis de analisar com a análise de imagem convencional, poderia ser analisada com facilidade e precisão. Esta metodologia pode ser aplicada para caracterizar quantitativamente o microambiente endométrio, incluindo a interação entre células imunes, e sua heterogeneidade para diferentes pacientes com falência reprodutiva. A plataforma para avaliação quantitativa de células imunes endometriais pode ser de importante importância clínica para o diagnóstico e tratamento de pacientes com RM.

Introdução

O aborto espontâneo recorrente (MR) é a perda de duas ou mais gestações consecutivas e é uma doença complexa que tem chamado a atenção dos clínicos nos últimos anos. A taxa de incidência de RM em mulheres em idade fértil é de 1%-^5%1. Resultados de estudos prévios mostram que fatores imunológicos estão intimamente associados à patogênese da RM2,3,4,5. A manutenção da homeostase imune na interface materno-fetal é necessária para a implantação e desenvolvimento do embrião. As células imunes endometriais desempenham vário....

Protocolo

O conteúdo e o protocolo da pesquisa foram eticamente revisados e aprovados pelo comitê de ética em pesquisa do Hospital de Urologia Zhongshan de Shenzhen. Todas as mulheres (20-40 anos) envolvidas no estudo assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido para coleta e utilização da amostra.

1. Aquisição de tecido patológico

1. Prepare as ferramentas para a colheita de tecidos, ou seja, régua de medição, tweezer, de incorporação, papel de incorporação e cesto de tecido.
2. Observe se a quantidade de tecido endometrial (maior que um feijão mung), coletada por abordagem padrão com cateter pipelar, é sufic....

Discussão

Este protocolo estabeleceu uma plataforma de análise de imagens de imuno-histoquímica digital para analisar quantitativamente células imunes endometriais de pacientes com RM. Aqui, seis marcadores imunes endometriais foram detectados para avaliar o microambiente imune endometrial em pacientes com RM.

Um endométrio receptivo durante a fase lútea média é fundamental para o sucesso da implantação e gravidez^27,28. Portanto, a aval.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Automated coverslipper	Sakuraus	DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2
CD163	GrowGn Biotechnology	NCL-L-CD163
CD1a	Gene Tech	GM357129
CD56	Gene Tech	GT200529
CD8	Novocastra	NCL-L-CD8-4B11
Dehydrator	Thermo Fisher	Excelsior ES
Digital pathology and	Indica labs	HALO
Foxp3	YILIFANG biological	14-477-82
IHC stainer	Leica	BOND III
Image analysis platform	Indica labs	HALO
Slide Scanner	Olympus life science	VS200