Платформа для количественного обнаружения иммунных клеток эндометрия на основе иммуногистохимии и анализа цифровых изображений

Резюме

Здесь была разработана и валидирована цифровая платформа иммуногистохимического анализа изображений для количественного анализа иммунных клеток эндометрия пациенток с повторяющимися выкидышами в окне имплантации.

Аннотация

Для оценки иммунного микроокружения эндометрия пациенток с привычным невынашиванием беременности (РМ) была разработана и валидирована цифровая платформа иммуногистохимического анализа изображений для количественного анализа иммунных клеток эндометрия в середине лютеиновой фазы. Все образцы эндометрия были собраны во время среднелютеиновой фазы менструального цикла. Залитые парафином ткани эндометрия разделяли на предметные стекла толщиной 4 мкм, и проводили иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание для выявления иммунных клеток эндометрия, включая CD56+ мNK-клетки, Foxp3+ Tregs, CD163+ M2-макрофаги, CD1a+ DC и CD8+ Т-клетки. Панорамные слайды сканировались с помощью цифрового сканера слайдов, а для количественного анализа использовалась коммерческая система анализа изображений. Процентное содержание иммунных клеток эндометрия рассчитывали путем деления количества иммунных клеток в общем количестве клеток эндометрия. Используя коммерческую систему анализа изображений, можно легко и точно проанализировать количественную оценку иммунных клеток эндометрия, которые трудно или невозможно проанализировать с помощью обычного анализа изображений. Данная методика может быть применена для количественной характеристики микроокружения эндометрия, в том числе взаимодействия между иммунными клетками, и его гетерогенности у пациентов с различными репродуктивными пороками. Платформа для количественной оценки иммунных клеток эндометрия может иметь важное клиническое значение для диагностики и лечения пациенток с РМ.

Введение

Привычный выкидыш (РМ) представляет собой потерю двух или более последовательных беременностей и является сложным заболеванием, привлекающим внимание клиницистов в последние годы. Частота РМ у женщин детородного возраста составляет 1%-5%¹. Результаты предыдущих исследований показывают, что иммунные факторы тесно связаны с патогенезом РМ 2,3,4,5. Поддержание иммунного гомеостаза на границе между матерью и плодом необходимо для имплантации и развития эмбриона. Иммунные клетки эндометрия выполняют несколько регуляторных ....

протокол

Содержание и протокол исследования были этически проверены и одобрены комитетом по этике исследований урологической больницы Шэньчжэнь Чжуншань. Все женщины (в возрасте от 20 до 40 лет), участвовавшие в исследовании, дали информированное согласие на сбор и использование образцов.

1. Приобретение патологической ткани

1. Подготовьте инструменты для сбора ткани, а именно: измерительную линейку, пинцет, закладную кассету, бумагу для закладки и корзину для салфеток.
2. Понаблюдайте за тем, достаточно ли количества эндометриальной ткани (размером больше маша), собранной с помощью стандартного подхода с помощью пипет....

Результаты

С целью количественной оценки иммунных клеток эндометрия и снижения нестабильности, вызванной техногенными операционными ошибками, мы создали платформу цифрового количественного анализа иммунных клеток эндометрия с использованием автоматического иммуногистохимического обнаруже?.......

Обсуждение

Этот протокол создал цифровую платформу иммуногистохимического анализа изображений для количественного анализа иммунных клеток эндометрия пациенток с РМ. Здесь было выявлено шесть иммунных маркеров эндометрия для оценки иммунного микроокружения эндометрия у пациенток с РМ.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Automated coverslipper	Sakuraus	DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2
CD163	GrowGn Biotechnology	NCL-L-CD163
CD1a	Gene Tech	GM357129
CD56	Gene Tech	GT200529
CD8	Novocastra	NCL-L-CD8-4B11
Dehydrator	Thermo Fisher	Excelsior ES
Digital pathology and	Indica labs	HALO
Foxp3	YILIFANG biological	14-477-82
IHC stainer	Leica	BOND III
Image analysis platform	Indica labs	HALO
Slide Scanner	Olympus life science	VS200