脳卒中の一過性中大脳動脈閉塞モデル

要約

このプロトコルは中間の大脳の動脈のintraluminal閉塞によってマウスの一時的な焦点の大脳の虚血のモデルを記述する。さらに、磁気共鳴画像法と行動テストを使用した結果評価の例が示されています。

要約

脳卒中は、世界的に死亡または慢性障害の主な原因となっています。それにもかかわらず、既存の最適な治療法は、虚血性脳卒中の急性期の再灌流療法に限定されています。脳卒中の生理病理学に関する洞察を得て、革新的な治療法を開発するために、脳卒中の in vivo げっ歯類モデルが基本的な役割を果たします。遺伝子改変動物が利用できるようになったことで、特にマウスが脳卒中の実験モデルとして利用されるようになった。

脳卒中患者では、中大脳動脈(MCA)の閉塞がよく見られます。その結果、最も一般的な実験モデルには、頭蓋切除術を必要としない低侵襲技術であるMCAの管腔内閉塞が含まれます。この手順では、モノフィラメントを外頸動脈(ECA)に挿入し、MCAの分岐点に達するまで内頸動脈(ICA)を通って進めます。45分間の動脈閉塞後、モノフィラメントを除去して再灌流を行います。プロセス全体を通して、脳血流がモニターされ、閉塞中の減少と再灌流後のその後の回復が確認されます。神経学的および組織の結果は、行動テストと磁気共鳴画像法(MRI)研究を使用して評価されます。

概要

WHOによると、脳卒中は世界中で年間約1,500万人が罹患する壊滅的な病気です。患者の約3分の1がこの症状に屈し、別の3分の1が永久的な障害を経験します。脳卒中は、神経細胞や末梢免疫細胞、血管系、全身反応など、さまざまな種類の細胞が関与する複雑な病態です¹。脳卒中によって引き起こされる反応の複雑なネットワークは、システムレベルでは、現在のところin vitro モデルを使用して再現することはできません。したがって、実験動物モデルは、病気のメカニズムを掘り下げ、新しい治療法を開発およびテストするために不可欠です。現在、早期組織再灌流は、組織型プラスミノーゲンアクチベーター(tPA)による血栓溶解または血管内血栓摘^{出術のいずれか}による唯一の承認された介入です1。

中大脳動脈(MCA)の閉塞は脳卒中患者によく見られます。その結果、一過性MCA閉塞(tMCAo)のげっ歯類モデルが最初にラットで開発されました^2,3,4。現在、遺伝子改変マウスは、実験的な脳卒中モデルで最も一般的に使用されている動物です。本研究では、マウスにおける管腔内tMCAoの低侵襲モデルについて述べる。アプローチは、頭....

プロトコル

動物実験は、カタルーニャ州とスペインの法律(Real Decreto 53/2013)と欧州指令に従い、バルセロナ大学の倫理委員会(Comité Ètic d'Experimentació Animal, CEEA)とカタルーニャ州議会の地方規制機関の承認を得て実施されました。研究はARRIVEガイドラインに準拠して報告されています。この手順は、年齢制限なしで、8週齢から開始する成体マウスで実施するように設計されています。ここでは、10〜12週齢のC57BL/6マウスで開発された外科的処置の例を提供します。マウスの系統による解剖学的違いを考慮する必要があります。

1.動物の調製

1. 外科的処置を開始する前に、必要なすべての材料と道具を集めて滅菌します。必要なすべての手術材料で手術台をセットアップします( 材料表に記載されています)。
2. 酸素と亜酸化窒素の混合物(30%/70%)中のイソフルラン吸入を使用して動物を麻酔します。
3. 鎮痛を提供し、痛みや不快感を和らげるために、0.05 mg / kg BWの投与量でブプレノルフィン( 材料表を参照)を皮下投与します。.
   注:鎮痛は必須ですが、異なるプロトコルが受け入れられます。痛みや不快感の兆候も、MCAo後の最初の数日間はコントロールする必要があります(ステップ4を参照)....

ディスカッション

管腔内tMCAo手順は、基礎研究における再灌流を伴う限局性脳虚血の最も一般的に使用されるモデルです。現在、マウスは遺伝子組み換え株が入手可能なため、好ましい動物モデルです。しかし、遺伝子組み換えマウスとその遺伝的背景が脳の血管新生に影響を与える可能性があることを認識することが不可欠です。異なる動脈領域間の側副循環と吻合の存在は、実験手順の結果に大きな影響?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
6/0 suture	Arago		Vascular ligatures
6/0 suture with curved needle	Arago		Skin sutures
9 mg/mL Saline	Fresenius Kabi	CN616003 EC	For hydration
Anaesthesia system	SurgiVet
Blunt retractors, 1 mm wide	Fine Science Tools	18200-09
Buprenorfine	Buprex		For pain relief
Clamp applying forceps	Fine Science Tools	S&T CAF4
Dumont mini forceps	Fine Science Tools	M3S 11200-10
Forceps	Fine Science Tools	91106-12
Glue	Loctite		To stick LDF probe to the skull
Grip Strength Meter	IITC Life Science Inc.	#2200
Isoflurane	B-Braun	CN571105.8
LDF Perimed	Perimed	Periflux System 5000
LDF Probe Holders	Perimed	PH 07-4
Medical tape
MRI magnet	Bruker BioSpin, Ettlingen, Germany		BioSpec 70/30 horizontal animal scanner
Needle Holder with Suture Cutter	Fine Science Tools	12002-14
Nylon filament	Doccol	701912PK5Re
Recovery cage with heating pad
Sirgical scissors	Fine Science Tools	91401-12
Small vessel cauterizer kit	Fine Science Tools	18000-00
Stereomicroscope and cold light	Leica	M60
Suture tying forceps	Fine Science Tools	18025-10
Thermostat, rectal probe and mouse pad	Letica Science Instruments	LE 13206
Vannas spring scissors (4mm cutting edge)	Fine Science Tools	15019-10
Vascular clamps	Fine Science Tools	00396-01