Модель транзиторной окклюзии средней мозговой артерии при инсульте

Резюме

Данный протокол описывает модель транзиторной фокальной ишемии головного мозга у мышей через внутрипросветную окклюзию средней мозговой артерии. Кроме того, показаны примеры оценки результатов с использованием магнитно-резонансной томографии и поведенческих тестов.

Аннотация

Инсульт является одной из основных причин смерти или хронической инвалидности во всем мире. Тем не менее, существующие оптимальные методы лечения ограничиваются реперфузионной терапией во время острой фазы ишемического инсульта. Для получения информации о физиопатологии инсульта и разработки инновационных терапевтических подходов фундаментальную роль играют модели инсульта у грызунов in vivo . Доступность генетически модифицированных животных особенно стимулировала использование мышей в качестве экспериментальных моделей инсульта.

У пациентов, перенесших инсульт, окклюзия средней мозговой артерии (МЦА) является распространенным явлением. Следовательно, наиболее распространенная экспериментальная модель включает внутрипросветную окклюзию MCA, минимально инвазивный метод, который не требует краниэктомии. Эта процедура включает в себя введение мононити через внешнюю сонную артерию (ЭКА) и продвижение ее через внутреннюю сонную артерию (ВСА) до тех пор, пока она не достигнет точки разветвления МКА. После 45-минутной артериальной окклюзии монофиламент удаляют для проведения реперфузии. На протяжении всего процесса контролируется мозговой кровоток для подтверждения уменьшения во время окклюзии и последующего восстановления после реперфузии. Неврологические и тканевые исходы оцениваются с помощью поведенческих тестов и магнитно-резонансной томографии (МРТ).

Введение

По данным ВОЗ, инсульт является разрушительным заболеванием, от которого ежегодно страдают около 15 миллионов человек во всем мире. Около трети пациентов умирают от этого заболевания, в то время как другая треть испытывает постоянную инвалидность. Инсульт — это сложная патология, в которой участвуют различные типы клеток, такие как нейронные и периферические иммунные клетки, сосудистая сеть и системные реакции¹. Сложная сеть реакций, вызванных инсультом на системном уровне, в настоящее время не может быть воспроизведена с помощью моделей in vitro . Таким образом, экспериментальные модели на животных необходимы для изучения механизмов з....

протокол

Работа с животными проводилась в соответствии с законами Каталонии и Испании (Real Decreto 53/2013) и Европейскими директивами, с одобрения этического комитета (Comité Ètic d'Experimentació Animal, CEEA) Университета Барселоны и местных регулирующих органов Женералитата Каталонии. Результаты исследований публикуются в соответствии с рекомендациями ARRIVE. Эта процедура предназначена для проведения у взрослых мышей, начиная с 8-недельного возраста, без возрастных ограничений. Примеры хирургического вмешательства, разработанного на мышах C57BL/6 в возрасте 10-12 недель, приведены здесь. Следует учитывать анатомические различия в зависимости от штамма мышей.

Результаты

Существуют различные подходы к оценке результатов процедуры tMCAo. Здесь используются методы нейровизуализации in vivo (МРТ) и поведенческое тестирование.

У мышей развиваются ишемические поражения в головном мозге, в основном затрагивающие территорию, поставляемую MCA и?.......

Обсуждение

Внутрипросветная процедура tMCAo является наиболее часто используемой моделью фокальной ишемии головного мозга с реперфузией в фундаментальных исследованиях. В настоящее время мыши являются предпочтительной животной моделью из-за наличия генетически модифицированных штаммов. Тем не .......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
6/0 suture	Arago		Vascular ligatures
6/0 suture with curved needle	Arago		Skin sutures
9 mg/mL Saline	Fresenius Kabi	CN616003 EC	For hydration
Anaesthesia system	SurgiVet
Blunt retractors, 1 mm wide	Fine Science Tools	18200-09
Buprenorfine	Buprex		For pain relief
Clamp applying forceps	Fine Science Tools	S&T CAF4
Dumont mini forceps	Fine Science Tools	M3S 11200-10
Forceps	Fine Science Tools	91106-12
Glue	Loctite		To stick LDF probe to the skull
Grip Strength Meter	IITC Life Science Inc.	#2200
Isoflurane	B-Braun	CN571105.8
LDF Perimed	Perimed	Periflux System 5000
LDF Probe Holders	Perimed	PH 07-4
Medical tape
MRI magnet	Bruker BioSpin, Ettlingen, Germany		BioSpec 70/30 horizontal animal scanner
Needle Holder with Suture Cutter	Fine Science Tools	12002-14
Nylon filament	Doccol	701912PK5Re
Recovery cage with heating pad
Sirgical scissors	Fine Science Tools	91401-12
Small vessel cauterizer kit	Fine Science Tools	18000-00
Stereomicroscope and cold light	Leica	M60
Suture tying forceps	Fine Science Tools	18025-10
Thermostat, rectal probe and mouse pad	Letica Science Instruments	LE 13206
Vannas spring scissors (4mm cutting edge)	Fine Science Tools	15019-10
Vascular clamps	Fine Science Tools	00396-01