ソース: ムニエシルヴァン^1,2,3, パーチェットティボー^1,2,3, ソフィー・ノヴォール^{ト 4}, レイチェル・ゴルブ^1,2,3
リンパポイシス^{のための1}ユニット、免疫学科、パスツール研究所、パリ、フランス
² INSERM U1223, パリ, フランス
³ユニバーシテ パリ ディデロ, ソルボンヌ パリ シテ, セルレ パストゥール, パリ, フランス
⁴フローサイトメトリープラットから, サイトメトリーとバイオマーカー UtechS, 翻訳科学センター, パスツール研究所, パリ, フランス

養子細胞移植は、疾患を治療したり、血腫症などの生物学的プロセスを研究するために、患者または研究生物に細胞を導入する方法である。養子縁組移転の目的はさま々あります。それは基礎生物学だけでなく医学で使用することができる(1、2)。マウスモデルでは、転移した細胞の移動と分布を調べたり、追跡システム(細胞表面マーカー、CFSEによる染色など)を行うことができます。マウスモデルに関する癌研究では、特定の細胞集団の転移を腫瘍に対する実験的治療として用いることができる。この技術の別の例は、重篤な免疫不全表現型を有する照射マウスまたはマウスに骨髄細胞を移すことによってキメラマウスの作成である。このマウスモデルは、例えば特定の細胞集団に対する遺伝子欠失の影響を評価するために使用することができる。骨借用細胞の移動は、ヒトの治療にも使用されます。がん治療の場合に患者に照射される場合、骨髄の養子縁組は免疫系の再構成を可能にする。

この技術の最初のステップは、目的の細胞集団を得ることである。この母集団を分離するために選択される手法は、対象となる母集団の特異性のレベルに依存します。選択の最大のレベルは、臓器内に存在するすべての細胞集団が取られる臓器全体です。より正確な方法は、多くの場合、1つのセル表面マーカーによって選択されるターゲットセル母集団の選択です。この場合、細胞をソートする理想的な方法は、磁気ソートです。最後に、最も厳しいレベルは、非常に特定の細胞集団をソートするために、いくつかのセル表面マーカーによる細胞の選択です。フローサイトメトリーソートは、このレベルの選択に最も一般的な方法です。対象の母集団が取得されると、ホストに転送できます。養子移植の前に、宿主とドナーの間の互換性を確保することが不可欠です。実際、転写目標にかかわらず、細胞拒絶反応を起なさずに宿主による細胞の採用を保証するためには、互換性が重要である。

この実習では、CD45.2マウスからCD45.1 Ragγマウス(リンパ球欠損)に脾細胞を移移し、4日後にフローサイトメトリーを用いて脾細胞転移を確認することで、養子細胞転写技術を実証する(図1参照)。 ).

図1:養子転移の概略表現。(1)脾細胞はCD45.2マウスから単離され(2)CD45.1 Ragγマウスに転移し、対照マウスはPBSのみを注入する。 (3)養子転移の4日後に、脾細胞をマウスから回収し、(4)フローサイトメトリーにより分析した。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

1. 準備

1. 始め始めの前に、実験室の手袋と適切な防護服を着用してください。
2. すべての解剖ツールを殺菌し、まず洗剤で、次に70%のエタノールで乾燥させ、その後完全に乾燥させます。
3. 2%の胎児子牛血清(FCS)を含むハンクのバランス塩溶液(HBSS)の50 mLを調調します。

2. 解剖

1. 二酸化炭素送達システムを用いて、低酸素症でマウスを安楽死させる。サパンの位置の解剖プレート上で安楽死マウスを固定し、はさみと鉗子を使用して縦開腹術を行います。
2. 鉗子を使用すると、腹部の右側に腸と胃を動かして胃と脾臓を露出させる。脾臓は胃に付着している。
3. 鉗子を使用して慎重に胃から脾臓を取り外し、HBSS 2%FCSの5 mLを含むペトリ皿の上に置きます。

3. 免疫細胞分離

1. 脾臓を40

Ragγマウスは、主にリンパ球を欠いている免疫系組成を変化させた。脾細胞の養子移植は、TおよびB細胞などの欠けている集団の導入を可能にする。我々の染色には、宿主細胞とドナー細胞をそれぞれ区別するために、細胞表面マーカーCD45.1とCD45.2が含まれていた(図2A)。また、CD4 T細胞などのRagγマウスに存在しない細胞集団を強調?...

養子縁組移転は、医学の応用を伴う科学の異なる分野における翻訳技術です。この技術は、特定の細胞集団における細胞移動およびトロピズムまたはタンパク質欠乏の発生率を研究するために使用することができる。最後のケースでは、異なる技術、特に特定の細胞集団が本質的に欠乏しているGMOマウスを使用することができます。しかし、GMOマウスを得るための遺伝的構築は、非常に複雑?...

1. Restifo, N. P., Dudley, M. E. and Rosenberg., S. A. Adoptive immunotherapy for cancer: harnessing the T cell response. Nature reviews. Immunology, 12 (4): 269-281, (2012).
2. Bonini, C., and Mondino, A. Adoptive T-cell therapy for cancer: The era of engineered T cells. European journal of immunology, 45 (9): 2457-69, (2015).