我々は、このプロトコルでのコメントの子宮内および ex vivo網膜エレクトロポレーション技術を、それぞれ、と博士は櫻井でのヘルプは博士リチャードヴァレとBrikhaシュレスタに感謝。この作品は、健康補助金の国立研究所F31 NS051008（超えないこと）、財団原子核Medicale、とヒューマンフロンティアサイエンスプログラム（AR）とR01 EY12736（CM）によってサポートされていました。

<ol>
	<li>Chalupa, L. M., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Eye Retina and the Visual Systems of the Mouse. , (2008).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).</li><li>Ishikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GDNF+gene+transfer+into+axotomized+retinal+ganglion+cells+using+in+vivo+electroporation+with+a+contact+lens-type+electrode.">Effect of GDNF gene transfer into axotomized retinal ganglion cells using in vivo electroporation with a contact lens-type electrode.</a> Gene Ther. 12, 289-298 (2005).</li><li>Donovan, S. L., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+square+wave+electroporation+of+retinal+explant+cultures.">Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures.</a> Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).</li><li>Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+into+mouse+retinal+ganglion+cells+by+in+utero+electroporation.">Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation.</a> BMC Dev Biol. 7, 103-10 (2007).</li><li>Petros, T. J., Shrestha, B. R., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sufficiency+of+EphB1+in+driving+the+ipsilateral+retinal+projection.">Specificity and sufficiency of EphB1 in driving the ipsilateral retinal projection.</a> J Neurosci. 29, 3463-3474 (2009).</li></ol>

このビデオでは、我々は胚のマウスRGCsへの遺伝子送達のために、両方の子宮内および ex vivoで 、エレクトロポレーション技術を実証している。 子宮内網膜エレクトロ RGCsでの遺伝子発現を操作するためのメカニズムを提供し、 生体内でその軸索突起を可視化する。胚は出生後に生き残るために許可すると、これらのGFP +彼らのターゲットにRGC突起、外側膝状核（LGN）の検査を可能にする。 エクスビボ網膜エレクトロポレーションは、in vitroでのアッセイで使用するために特定の網膜の領域を標的とするより多くの制御機能を提供します。 生体内で 、これらの技術から派生したin vitroの解析で組み合わせることで、それ以外の場合は、通常バックグラウンドでRGCsのサブセットでRGC開発と軸索突起の徹底した特性評価が可能になります。私たちのデモでは、視交叉でのRGC軸索誘導に焦点を当てているが、 子宮および ex vivo網膜エレクトロポレーションの両方は、そのような終了のゾーンにターゲティング遺伝子の発現の効果RGC分化、樹枝状形態、電気生理学的特性、シナプス形成と適切でどのように摂動を研究するための有益かもしれないLGNおよび上丘など。

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BTX Electro Square Porator ECM 830 (with foot paddle)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>450052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Round tweezer electrodes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nepa Gene</td>
<td>CUY650-5 or CUY650-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk Sutures</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henry Schein</td>
<td>101-2636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass micropipettes with plungers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond</td>
<td>5-000-1001-X10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiototic-antimycotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM/F12 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11330057</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Albumin bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8806-5G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ITS supplement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I-1884</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methyl cellulose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M0512</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MatTek Corporation</td>
<td>P35G-1.5-14-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Poly-L-ornithine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells

網膜とその唯一の出力ニューロン、網膜神経節細胞（RGC）は、このような細胞分化、軸索ガイダンス、網膜部位の組織とシナプス形成[1]のような生物学的疑問を調査するための優れたモデルを構成する。一つの欠点は、特にそうでない場合はアクセス可能なマウスの視覚的な経路で、効率的かつ確実にin vivoで RGCsにおける遺伝子発現を操作することができないことである。トランスジェニックマウスは、遺伝子発現を操作するために使用されますが、このアプローチは、しばしば時間がかかり高価であり、そして望ましくない副作用を作り出すことができることができます。ひよこでは、OVOエレクトロポレーションで網膜とRGCの開発を検討するためRGCsにおける遺伝子発現を操作するために使用されます。同様のエレクトロポレーション技術は、新生児マウスの仔で開発されているが[2]、成体ラット[3]、およびin vitroでの胚のマウス網膜[4]、これらの戦略はいずれもin vivoで RGC開発と軸索突起の完全な特性評価を可能にしない。この目的のために、我々は、特に胚のマウスRGCs [5、6]ターゲットに、エレクトロポレーションの2つのアプリケーション、 子宮やその他のex vivoでの 1つを開発した。 子宮内網膜エレクトロポレーションに使用すると、我々のような、misexpressまたはダウンレギュレートするRGCsで特定の遺伝子をし、in vivoでの視覚経路を介して、その軸索突起に従って、このような視交叉などの中間目標、時、または対象地域での指導上の意思決定の検査を可能にすることができます外側膝状核。そうでなければ、野生型バックグラウンドでRGCsのサブセットの遺伝子発現を乱すことはレチナール経路全体の遺伝子機能の理解を容易にします。さらに、我々はin vitroで RGC軸索の成長を分析するためのコンパニオンの技術を開発しました。我々は、胚の頭部ex vivoでのエレクトロ全網膜を収集し、インキュベートして、後でこれらの網膜、数日間から外植片を準備する。網膜外植片は、指導の手がかりやその他の要因へのエレクトロポレーションRGC軸索の応答を調べるために、in vitro試験の用途に使用できます。合計では、技術のこのセットはmisexpressまたはダウンレギュレートする遺伝子をRGCsで、大幅RGC開発と軸索突起を調べる研究を支援する必要が我々の能力を高める。

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In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

ここではでマウス網膜神経節細胞（RGCs）で遺伝子発現を操作するための2つのテクニックを紹介<em&gt;子宮内で</em&gt;と<em&gt;生体外で</em&gt;エレクトロポレーション。これらの技術は1つが遺伝子発現の変化は、RGC開発、軸索ガイダンス、および機能特性にどのような影響を与えるか調べることができます。

マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

in-utero-ex-vivo-electroporation-for-gene-expression-mouse-retinal

Research

JoVE Journal

Biology

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

18.7K ビュー.  Columbia University College of Physicians and Surgeons. ここではでマウス網膜神経節細胞（RGCs）で遺伝子発現を操作するための2つのテクニックを紹介子宮内でと生体外でエレクトロポレーション。これらの技術は1つが遺伝子発現の変化は、RGC開発、軸索ガイダンス、および機能特性にどのような影響を与えるか調べることができます。