<ol style="list-style-type:upper-alpha;"><li> ファントム病変の準備（事前FNA能力の実際の練習セッション（図1）は38〜48時間程度ファントムを準備したり、FNAのソース、米国から&quot;AVファントム&quot;を使用する準備に活用。ファントム病変（凍結せずに冷蔵で保存されている）5月セッションを練習するにも3〜4日間前に準備保持する。 </li><li> FNA能力を実践：私たちはShidhamのTHFVを（機能バルブ付きティッシュハーベスター）（FNAのソース、米国）を使用して手順を実証しているが、他のFNAのシステムは（図2）練習のために使用されることがあります。 </li><li>ガラススライド（図3）に吸引を拡散して処理する。 </li></ol>必要な材料<ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li>透明なシリコーンゴムコーキング - 利用可能な多くの建設/ホーム改善の店で。多くのブランドがGETM、DAP、レッドデビル、ホワイトライトニング、およびローカルチェーンのブランドを含めて利用可能です。我々は、透明なシリコーンゴム、ホワイトライトニング製品、クリーブランド、オハイオ州、米国、使用<a href="http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html">http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.htmlを</a> ） </li><li>コー​​キングガン</li><li>ラップシートの部分（我々はサランがプラスラップ、SCジョンソン＆サン社、ラシーン、ウィスコンシン、米国しがみつく使用<a href="http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp">http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.aspを</a> </li><li>ゴム手袋</li><li>広い直径のバナナやソーセージ。 </li><li>厚いカードボード、アクリル板、または他の製のしっかりと平らなベースプレート（約6インチx 6インチ）。 </li><li> FNAは設備を行って<ul><li> 25ゲージの注射針</li><li> ShidhamのTHFV（またはFNAを実施するための他のコンポーネント） </li><li>スライドガラス</li><li>染色キット</li></ul></li></ol>ステップバイステップの詳細ファントムの病変のA.準備 （FNA能力を（図2）練習前に1〜2日ファントムを準備したり、FNAのソース、米国から&quot;AVファントム&quot;を使用する準備ができて活用。 <ol><li>ボードをサポートしているの6 × 6インチサイズのカット。 </li><li> &quot;ファントム病変のコア&quot;（バナナやソーセージ）の2.5インチ長いセグメントをカット。 </li><li>ベースプレート上にコーキングの0.5インチ厚さの層を排出する。 </li><li>コーキングのこの層に軽く&quot;ファントム病変コア&quot;を押してください 。 </li><li>それは完全にコーキングのマウンドに埋め込 ​​まれているように、気泡をトラップすることなく、&quot;ファントム病変のコア&quot;を介してより多くのコーキングを追加。 </li><li>手袋をはめた手で&quot;ファントム病変のコア&quot;以上のコーキングを調整し、形作る。 </li><li>ラップの6 × 6インチサイズのピースを取るとコーキングのマウンドをカバーし、きれいな、手袋をはめた手で滑らかな凸形状に古墳の表面を調整する。 </li><li>暖かい場所で、製品の指示の下で述べたように硬化時間よりも長い6-8時間、（通常は24時間）のためのコーキングのマウンドの治療を、してみましょう。 </li><li>硬化後は、コーキングがしっかりしてください、そしてラップが容易に剥離することができる。 </li><li> FNAファントムの病変は、コーキングの全体のマウンドは、完全に&quot;幻の病変のコア&quot;（バナナやソーセージ）を含む中央に硬化した約8時間後にFNAの手順を実施するために使用できるようになります。 </li></ol> B.は、AVファントムの病変でFNA能力を練習する。 高い品質を得るためのいかなるアプローチ、良い品質、直接細胞診塗抹標本で十分なFNAの吸引は、次の重要なポイントを、対処する必要があります<ol style="list-style-type:upper-roman;"><li>針のゲージのような手順のタイトルに暗示、細かい針が（より高いゲージの番号）最小限の血液希釈とのより良い吸引をもたらす。利点と制限事項の重要なバランスのために、22〜25ゲージの針は、FNAの吸引の品質に影響を与えることなく、針の最適な機械的安定性のために好ましい。 </li><li> FNAの間に真空のアプリケーションとリリースの適切なシーケンスを制御する手順 - これは、針ハブに向かって、針の各ストロークでサンプリングされた細胞を進めるために重要です。しかし、吸引材料をシリンジと針吸引アセンブリの領域に到達できないようにする必要があります。これが防止されていない場合、材料は、 塗抹標本を （この材料が、しかし、セルブロックの準備のためにまたはそのようなサイトスピン、フィルタメソッド、または最近の液体ベースの細胞診の製剤として濃縮メソッドに対して使用される）を作るために取得することが困難な場合があります 。 </li><li> 直接塗抹標本を含めて、吸引検体の処理に適切なスキルを開発し、そのようなリンパ球増殖性病変の免疫表現型検査のための選択科目免疫細胞化学、選択科目フローサイトメトリー用セルブロックの準備などの補助的なテストのための適切なトリアージとオンサイトの妥当性評価 、微生物学のための滅菌パスを提出研究、およびメイト分子試験（細胞遺伝学、等）のためのリアル。 </li></ol> 巴 FNAの手順（ShidhamのTHFVで示すように、[1]（FNAのソース、米国が）、しかし、他のFNAのシステムが練習のために使用されることがあります）実行します （図3,4,5）。 <ol><li>バルブを閉じた状態でFNAのアセンブリを準備します。 </li><li>病変の位置を確認し、病変に針の先端を挿入する。 </li><li>各へと病変への往復ストロークで病変の代表的な細胞成分を吸引するために、その先端に針を介して、真空を接続するためのバルブを開きます。 </li><li>異なる方向の病変に針を挿入して病変の真空とサンプルさまざまな領域を維持する。 </li><li>針の内腔に真空を切断するためにバルブを閉じます。 </li><li>周囲条件（一瞬針からシリンジバルブを切断することによって、例えばこのような&quot;THFV&quot;として作り付けのステップ、との特別な装置が使用されている場合と再接続。、これとBA1からBA6を介して他のステップは、協調的なもので圧力を均等化自動的にバルブのシステムで別の手順に従って）[1]。 </li><li>バルブを閉じた状態でのハブ端にわずかに負圧がない限り、病変に毛管現象によって試料の損失を防ぐために、病変から針を​​外します。 </li><li>直接塗抹（下記参照）（図6）を準備するためにスライドガラス上に吸気コンテンツを押しのける。 </li></ol>適切なトリアージと吸引標本のBB。処理 スライドガラス上に吸引を拡散し、適切な染色とトリアージ（図7,8）に続いて、良質の直接塗抹標本（図6）を準備。 <ol><li>スライドガラス上に外れる吸引の低下は図に示すように、様々なアプローチ（図6）[2]によって広がっている。通常のアプローチは&#39;&#39;です。しかし、標本がいくつかmicrofragmentsで希釈した血液であれば、過剰な血液を傾けることによって離れてスライドを排出される、とmicrofragmentsは、このスライドと&#39;に似た第2のガラススライドの間に広がっている。吸引は、主にリンパ球増殖性病変からのようなmicrofragments、なしの懸濁液である場合、それは&#39;b&#39;または&#39;c&#39;に似て広がっている。 </li><li>塗抹標本は、オンサイトの妥当性の評価中に別の染色法のためのさまざまな方法で処理し、固定することができる。しかし、最善のアプローチは、空気乾燥全スメアすることです。空気乾燥塗抹標本を5で生理食塩水、水和と後固定（95％エタノールでまたは好ましくは95％エタノールで後染色メタノール固定後またはPAPでロマノフスキの汚れ（例えばDifff - Quikの汚れのような、ライト染色）で染色することができます％酢酸）[3]。不明瞭血に起因する干渉の排除は大きな利点[3]です。 </li><li>オンサイトの妥当性の評価中に初期cytomorphologic調査結果に応じて、追加のトリアージは、（そのような選択科目のセルブロック、電子顕微鏡、微生物培養、フローサイトメトリー、分子テスト - 細胞遺伝学など）として示されることをお勧めします。 </li></ol>代表的な結果： <img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig1tmb.jpg" alt="図1" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig1.jpg">図1の拡大版をご覧いただくにはこちらをクリックしてください</a> 。 FNA能力を実践するためのAVファントムを準備するために必要な図1。材（コーキングの完全な硬化後に除去しつつ*我々は、終わりにコーキングに付着していないサランプラスチックのラップを使用する。） <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig2tmb.jpg" alt="図2" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig2.jpg">図2の拡大バージョンをご覧いただくにはこちらをクリックしてください。</a> 図2。準備AVファントムの病変<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig3tmb.jpg" alt="図3" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig3.jpg">図3の拡大バージョンをご覧いただくにはこちらをクリックしてください。</a> 図3。FNAの手順で重要なステップ。 <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig4tmb.jpg" alt="図4" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig4.jpg">図4の拡大バージョンをご覧いただくにはこちらをクリックしてください。</a> 図4重要なステップのEUS - FNA -サマリ*（図3参照） <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig5tmb.jpg" alt="図5" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig5.jpg">図5の拡大バージョンをご覧いただくにはこちらをクリックしてください。</a> 図5。FNA proc内の重要なステップに関連する落とし穴edure。 <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig6tmb.jpg" alt="図6" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig6.jpg">図6の拡大バージョンをご覧いただくにはこちらをクリックしてください。</a> 図6二つのスライド間でFNA検体の直接塗抹標本の調製。 <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig7tmb.jpg" alt="図7" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig7.jpg">図7の拡大バージョンをご覧いただくにはこちらをクリックしてください。</a> 図7。空気乾燥塗抹標本と固定ウェット。 <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig8tmb.jpg" alt="図8" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig8.jpg">図8の拡大バージョンをご覧いただくにはこちらをクリックしてください。</a> 図8。空気乾燥塗抹標本と固定ウェット。

<ol>
	<li>Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Harvester+with+Functional+Valve+(THFV):+Shidham's+device+for+reproducibly+higher+specimen+yield+by+fine+needle+aspiration+biopsy+with+easy+to+perform+steps.">Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps.</a> BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).</li><li>Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AppendiX+I:+Collection+and+processing+of+effusion+fluids+for+cytopathologic+evaluation.">AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation.</a> , 207-235 (2007).</li><li>Shidham, V., Kampalath, B., England, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routine+air+drying+of+all+the+smears+prepared+during+fine+needle+aspiration+and+intraoperative+cytology+studies:+An+opportunity+to+practice+a+unified+protocol,+offering+the+flexibility+of+choosing+variety+of+staining+methods.">Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods.</a> Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).</li></ol>

細針吸引生検（FNAB）が広く、経済的で安全、そして様々な腫瘍や病変の組織診断のための急速な低侵襲法として実行されます。この手順は18〜27ゲージの針を病変に挿入される、唯一の毛細管現象の形で、最小限から約10 mLの範囲変数の強度の制御さ​​れた真空（吸引）の下に病変のさまざまな分野で前後に複数回移動さ診断組織材料を取得するために注射器で真空。大きい番号の細かいゲージの針を直接塗抹標本を準備をするためには、良い細胞診の材料を取得することが好ましい。 18G取得セルブロック、フローサイトメトリー、電子顕微鏡、細胞遺伝学、微生物学の文化等の手順はシンプルですが、協調して適切な手順で真空の適切なアプリケーションとリリースのさまざまなステップを制御することが極めて重要であるのに適した多くのサンプルの広いゲージの針最適な結果を得るために。 特別に設計された高収量の針、従来の皮下注射針またはそれらの変更の非可用性のためにこの手順を実行するために使用されます。従来の方法で使用されている場合は、注射針は、試料の低収率につながる多くの制限があります。特殊な注射器のグリップの要件は通常、手順の複雑さに追加されます。従って、市販の適切なFNABの針装置が不足しているため、この汎用性の高い手順は、不十分な標本の検索では頻繁に問題に苦しんでいる。最近では、再現性と収量を増加させる装置は、[1]を報告されている。 さらに、現在は住民や仲間を含む訓練で医療従事者によってFNABを行うの習熟度を実施するのに適したモデルが不足している。我々は、新鮮な牛の肝臓の一部で標準化されたモデルは、FNABの能力を実践するためのラテックス手袋でぬいぐるみだった。しかし、このモデルは、短期間で整理することは困難です。新鮮な牛の肝臓の調達は、通常、制限苦境です。さらに、肝臓の処理はバックかなりのドローなどの汚染に関連する要因を導入することがあります。いくつかの針の呵責後にリークしているようにラテックスの手袋のための傾向は、練習セッションの間に潜在的な混乱につながる。 我々は小説ですが、市販のシリコーンゴムのコーキングや他の容易に利用できる材料でバナナの小片（またはソーセージ）を埋め込む簡単な方法を報告し、説明します。 FNABファントムは、このように臨床の現場での病変の実際のFNABの手順に相当する組み込み試料から物質の吸引を可能にする真空シールを保持します。このビデオでは、我々はFNABファントムの病変を作り、FNABの手順を練習の手順を示しています。また、塗抹標本と染色を含む取得した検体についての簡単な処理では[2,3]を示しています。 コー​​キングが硬化に時間がかかるので、ファントムの病変は、前の練習セッションに24〜48時間程度を事前に準備する必要があります。ファントム病変を使用する準備匹敵するが、商業のソース（FNAのソース、米国）から入手することができる。 FNAB技能を練習するためのファントム病変は、前臨床の現場で患者のFNAB性能の先頭に住民や仲間を訓練するために使用されることがあります。

preparation and using phantom lesions to practice fine needle aspiration biopsies

現在、住民や仲間を含む医療従事者は、細針吸引生検（FNAB）の手順を練習するのに適したファントムのモデルを持っていない。 FNABを実施するための新鮮な牛の肝臓を含むラテックス手袋で構成されるモデルは過去に、我々は標準化された。しかし、このモデルでは、新鮮な牛の肝臓の調達が最も困難な側面であると、整理し、短期間で準備することは困難である。汚染関連の問題で肝臓の処理は、バックもかなりのドローです。さらに、いくつかの針の後の手袋材料漏れが混乱を生じると、渡します。 我々は、市販のシリコーンゴムのコーキングでソーセージやバナナの小片を埋め込む新たな単純な手法を確立した。このモデルは、臨床腫瘤病変の実際のFNABの手順に似て、埋め込まれた試料からの物質の真空シールと誤嚥の保持が可能になります。 針ハブに吸引された物質は、塗抹標本と染色で追加の能力を促進する、実際のFNABの手順の実行中に調達標本に似て処理することができます。

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Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

研修生による細針吸引生検（FNAB）の練習は、簡単に利用できる、適切な病変の不足のため、比較的困難です。 FNABの手順を実施するためのAVファントムの病変とマスタリングの能力の調製は比較的容易である。

調製と細針吸引生検を実施するためにファントム病変を使用して

Currently, health workers including residents and fellows do not have a suitable phantom model to practice the fine- needle aspiration biopsy (FNAB) ...

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Research

JoVE Journal

Biology

17.7K ビュー.  University of Wisconsin - Milwaukee. 研修生による細針吸引生検（FNAB）の練習は、簡単に利用できる、適切な病変の不足のため、比較的困難です。 FNABの手順を実施するためのAVファントムの病変とマスタリングの能力の調製は比較的容易である。

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Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

アダルトゼブラフィッシュの内耳感覚上皮のグロスとファイン解剖（ゼブラフィッシュ）

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

生物学

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel electrophoresis to separate native or denatured proteins by the length of the polypeptide (denaturing conditions) or by the 3-D structure of the protein (native/ non-denaturing conditions). The proteins are then transferred to a membrane (typically nitrocellulose or PVDF), where they are probed (detected) using antibodies specific to the target protein.

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract.

ウェスタンブロッティング：サンプル調製を検出する

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological approach to analyzing protein kinetics at DNA lesions over time or protein-protein interactions on locally microirradiated chromatin. We also show how to recognize individual phases of the cell cycle using the Fucci cellular system to study cell-cycle-dependent protein kinetics at DNA lesions. A methodological description of the use of two UV lasers (355 nm and 405 nm) to induce different types of DNA damage is also presented. Only the cells microirradiated by the 405-nm diode laser proceeded through mitosis normally and were devoid of cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs). We also show how microirradiated cells can be fixed at a given time point to perform immunodetection of the endogenous proteins of interest. For the DNA repair studies, we additionally describe the use of biophysical methods including FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) and FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) in cells with spontaneously occurring DNA damage foci. We also show an application of FLIM-FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) in experimental studies of protein-protein interactions.

Laser microirradiation is a useful tool for studies of DNA repair in living cells. A methodological approach for the use of UVA lasers to induce various DNA lesions is shown. We have optimized a method for local microirradiation that maintains the normal cell cycle; thus, irradiated cells proceed through mitosis.

タンパク質-タンパク質相互作用や DNA 損傷速度論を研究する共焦点の顕微鏡検査の技術を高度な

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological ...

Immunolabelling Myofiber Degeneration in Muscle Biopsies

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. Therapeutic options addressing the causes of muscular dystrophy pathogenesis are expected to alleviate muscle degeneration. Therefore, a method to assay and quantify the extent of cell death in muscle biopsies is needed. Conventional methods to observe myofiber degeneration in situ are either poorly quantitative or rely on the injection of vital dyes. In this article, an immunofluorescence protocol is described that stains necrotic myofibers by targeting immunoglobulin G (IgG) uptake by myofibers. The IgG uptake method is based on cell features characterizing the necrotic demise, including 1) the loss of plasma membrane integrity with the release of damage-associated molecular patterns and 2) the uptake of plasmatic proteins. In murine cross-sections, the co-immunolabelling of myofibers, extracellular matrix proteins, and mouse IgG allows clean and straightforward identification of myofibers with necrotic fate. This simple method is suitable for quantitative analysis and applicable to all species, including human samples, and does not require the injection of vital dye. The staining of necrotic myofibers by IgG uptake can also be paired with other co-immunolabelling.

Described here is a protocol for direct immunolabelling of necrotic myofibers in muscle cryosections. Necrotic cells are permeable to serum proteins, including immunoglobulin G (IgG). Revealing the uptake of IgG by myofibers allows the identification and quantification of myofibers that undergo necrosis regardless of muscle condition.

筋生検における免疫標識筋線維変性

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. ...

Single Cell Micro-aspiration as an Alternative Strategy to Fluorescence-activated Cell Sorting for Giant Virus Mixture Separation

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or fluorescence activated cell sorting (FACS) applied to the viral population. However, when the viruses in the mixture have similar morphologic properties and one of the viruses multiplies slowly, the presence of two viruses is discovered at the stage of genome assembly and the viruses cannot be separated for further characterization. To solve this problem, we developed a single cell micro-aspiration procedure that allows for separation and cloning of highly similar viruses. In the present work, we present how this alternative strategy allowed us to separate the small viral subpopulations of Clandestinovirus ST1 and Usurpativirus LCD7, giant viruses that grow slowly and do not lead to amoebal lysis compared to the lytic and fast-growing Faustovirus. Purity control was assessed by specific gene amplification and viruses were produced for further characterization.

Here, we describe a single cell micro-aspiration method for the separation of infected amoebae. In order to separate viral subpopulations in Vermamoeba vermiformis infected by Faustoviruses and unknown giant viruses, we developed the protocol detailed below and demonstrated its ability to separate two low-abundance novel giant viruses.

巨大ウイルス混合物分離のための蛍光活性化細胞選別の代替戦略としての単一細胞マイクロ吸引

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

交配ミツバチクイーンズへの農薬リスクの評価

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Profiling of H3K4me3 Modification in Plants using Cleavage under Targets and Tagmentation

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their recruited proteins, lead to temporal and spatial control of gene expression. Cleavage under targets and tagmentation (CUT&#38;Tag) is an enzyme-tethering method in which the specific chromatin protein is firstly recognized by its specific antibody, and then the antibody tethers a protein A-transposase (pA-Tn5) fusion protein, which cleaves the targeted chromatin in situ by the activation of magnesium ions. Here, we provide our previously published CUT&#38;Tag protocol using intact nuclei isolated from allortetraploid cotton leaves with modification. This step-by-step protocol can be used for epigenomic research in plants. In addition, substantial modifications for plant nuclei isolation are provided with critical comments.

Cleavage under targets and tagmentation (CUT&amp;Tag) is an efficient chromatin epigenomic profiling strategy. This protocol presents a refined CUT&amp;Tag strategy for the profiling of histone modifications in plants.

標的下およびタグ付け下での切断を用いた植物におけるH3K4me3修飾のプロファイリング

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their ...

An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward method to quickly identify the chemoattractants that could induce the chemotactic movement of rhizosphere growth-promoting bacteria on sterile glass slides via simple steps. Bacteria solution (OD600 = 0.5) and sterile chemoattractant aqueous solution were added dropwise on the glass slide at an interval of 1 cm. An inoculating loop was used to connect the chemoattractant aqueous solution to the bacterial solution. The slide was kept at room temperature for 20 min on the clean bench. Finally, the chemoattractant aqueous solution was collected for bacterial counting and microscopic observation. In this study, through multiple comparisons of experimental results, the method overcame multiple shortcomings of traditional bacterial chemotaxis methods. The method reduced the error of plate counting and shortened the experimental cycle. For the identification of chemoattractant substances, this new method can save 2-3 days compared to the traditional method. Additionally, this method allows any researcher to systematically complete a bacterial chemotaxis experiment within 1-2 days. The protocol can be considered a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Here, we present an improved chemotaxis assay protocol. The goal of this protocol is to reduce the steps and costs of traditional bacterial chemotaxis methods and to serve as a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

根の滲出液中の根茎細菌の化学誘引物質の迅速な同定のための改良された気化症アッセイ

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward ...

Comprehensive Echocardiographic Assessment of Right Ventricle Function in a Rat Model of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This remodeling leads to increased pulmonary vascular resistance, worsened right ventricular function, and premature death. Currently approved therapies for PAH largely target pulmonary vasodilator pathways; however, recent emerging therapeutic modalities are focused on other novel pathways involved in the pathogenesis of the disease, including right ventricle (RV) remodeling. Imaging techniques that allow longitudinal assessment of novel therapeutics are very useful for determining the efficacy of new drugs in preclinical studies. Noninvasive trans-thoracic echocardiography remains the standard approach to evaluating heart function and is widely used in rodent models. However, echocardiographic evaluation of the RV can be challenging due to its anatomical position and structure. In addition, standardized guidelines are lacking for echocardiography&#160;in preclinical rodent models, making it difficult to carry out a uniform assessment of RV&#160;function across studies in different laboratories. In preclinical studies, the monocrotaline (MCT) injury model in rats is widely used to evaluate drug efficacy for treating PAH. This protocol describes the echocardiographic evaluation of the RV in na&#239;ve and MCT-induced PAH rats.

The present protocol describes the echocardiographic characterization of right ventricular morphology and function in a rat model of pulmonary arterial hypertension.

肺動脈性肺高血圧症ラットモデルにおける右心室機能の網羅的心エコー評価

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This ...

皮膚生検を使用して患者由来の足細胞を生成する

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the glomerulus. Mutations in podocyte-specific genes can cause focal segmental glomerulosclerosis (FSGS), and podocytes are also affected in many other primary and secondary nephropathies. Due to their differentiated nature, primary cell culture models are limited for podocytes.&#160;Therefore, commonly conditionally immortalized cells are used. However, these conditionally immortalized podocytes (ciPodocytes) have several limitations: the cells can dedifferentiate in culture, especially when they reach confluency, and several podocyte-specific markers are either only slightly or not expressed at all. This brings the use of ciPodocytes and their applicability for physiological, pathophysiological, and clinical reach into question. Here, we describe a protocol for the generation of human podocytes-including patient-specific podocytes-from a skin punch biopsy by episomal reprogramming of dermal fibroblasts into hiPSCs and subsequent differentiation into podocytes. These podocytes resemble in vivo podocytes much better in terms of morphological characteristics, like the development of foot processes and the expression of the podocyte-specific marker. Finally, yet importantly, these cells maintain patients&#39; mutations, resulting in an improved ex vivo model to study podocyte diseases and potential therapeutic substances in an individualized approach.

著者スポットライト:皮膚生検からの患者由来足細胞の生成  

This manuscript describes a two-step protocol to generate patient-specific podocytes from dermal fibroblasts via episomal reprogramming into human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) and subsequent differentiation into podocytes.

皮膚生検からの患者由来足細胞の生成

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the ...