Mounting the Mouse on the Live Imaging Insert for Intravital Imaging

倒立顕微鏡ステージに設置されたライブイメージングインサートに麻酔マウスを置く前に、付属のノーズコーン付きのイソフルランチューブをインサートのコーナーチューブブラケットに通します。肛門体温計プローブが取り付けられたコントローラーにヒートプレートを差し込んで電源を入れた後、麻酔マウスを誘導チャンバーからヒートプレートに移します。次に、ノーズコーンをマウスに固定します。

肛門プローブを動物に挿入し、コントローラーを調整して摂氏約36度の安定した体温を維持します。適切な位置に置かれたマウスをラップで覆い、体温を閉じ込めて体温を上昇させます。マウスの頭がカバーカバーディスクに揃うようにマウスを配置し、金属製のイヤークリップまたはテープを使用して、マウスの耳をガラスカバーカバーの中央に固定します。

イメージングが完了したら、電子気化器の低流量オプションを選択して、イソフルランの送達を停止します。マウスが歩行可能になるまで加熱パッドに移します。カバースリップディスクを取り外した後、レンズペーパーとレンズ液できれいに拭き取ってください。

再利用のために傷がつかないように適切に保管してください。次に、麻酔チューブをインサートブラケットから取り外し、顕微鏡ステージからインサートのネジを外します。蛍光標識されたマウスの生体耳組織のZスタックは、経時的にx、y、z軸のドリフトが最小限に抑えられ、カスタム3Dプリントされたライブイメージングインサートが検証されました。

成体雄マウスのmCherry陽性マウス耳表皮細胞の3時間のタイムラプス動画から、長時間にわたって焦点が合ったままの単一のz平面が明らかになりました。同様の観察は、成体雌マウスのGFP陽性耳皮膚線維芽細胞の別の3時間のタイムラプス動画からも行われました。