接着性皮膚細胞培養物からの細胞懸濁液の調製

まず、ケラチノサイト、線維芽細胞、およびメラノサイトを含む培養フラスコからそれぞれの培地を取り出します。細胞を5〜10ミリリットルのPBSでやさしく洗浄します。次に、フラスコのサイズに応じて、0.5〜2ミリリットルのトリプシンEDTA溶液をフラスコに加えます。

フラスコを摂氏37度でインキュベートします。顕微鏡を使用して、表面からの細胞の剥離を制御します。分離した細胞をトリプシン中和剤の2倍の容量で懸濁して、トリプシンを不活性化します。

次に、懸濁液を15ミリリットルのチューブに移します。次に、約20マイクロリットルの皮膚細胞懸濁液を1.5ミリリットルのチューブにピペットで入れます。血球計算盤の助けを借りて、細胞を数えます次に、チューブを室温で5分間300gで遠心分離します。

次に、上清の大部分をピペットで排出し、細胞ペレットを少量の残りの液体に再懸濁します。再懸濁したセルに等量の新鮮な培地を加えます。別の15ミリリットルのチューブに、細胞懸濁液を調製します。

ケラチノサイト、メラノサイト、線維芽細胞、および肥満細胞の初代細胞は、それぞれの培地で増殖すると、その典型的な形態を示しました。