CRISPR/Cas9システムを用いたセントロメア関連プロテイン-E ^CENP-E-/-ノックアウト細胞株の作製

キネシン-7とCENPの遺伝子欠失は、通常、細胞周期の停止と細胞死を引き起こします。安定したCENPノックアウト細胞株の構築は、CENP生物学における重要な未解決の問題です。本研究では、CRISPR/Cas9システムを用いてCENPノックアウトHeLa細胞を作製し、3つの最適化されたスクリーニング戦略を確立しました。

最近では、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、ヌクレアーゼの作製方法など、いくつかのゲノム編集技術が、特定のサイズでゲノムを切断するように設計されています。CRISPR/Cas9遺伝子ノックアウト技術は、基礎生物学、バイオテクノロジー、医学に革命をもたらしました。CENPは、動原体を微小管に付着させ、染色体を整列させるために不可欠です。

抗体マイクロインジェクション、sgRNA欠失、化学的阻害、または遺伝子欠失のいずれによってもCENPを破壊すると、染色体のミスアライメント、有糸分裂欠損、およびしばしば細胞死が生じ、CENPタンパク質メカニズムの研究が複雑になります。この研究では、細胞コロニースクリーニング、表現型の染色体アライメント、CENPタンパク質の蛍光強度など、3つの最適化された表現型ベースのスクリーニング戦略が確立され、スクリーニング効率と実験成功率が向上しました。重要なことに、CENPの欠失は染色体のミスアライメント、BubR1蛋白質の異常な位置、および有糸分裂の欠陥をもたらす。

CENPとその阻害剤の相互作用様式と分子機構は、細胞生物学および癌研究における重要な研究分野です。この研究では、CENPノックアウトHeLa細胞株が、CENP阻害剤の特異性と毒性を検証するための貴重なツールとして確立されました。