マウスを犠牲にした後、マウスを発泡スチロールの表面に置き、前肢をテープまたはピンで固定します。手術用ハサミを使用して、両後肢を膝の上で切断します。各後肢を別々の解剖室に移し、組織を覆うように冷たいTyrode溶液を追加します。
最初の後肢を解剖室に固定し、脚の後面が見えるようにします。拡大下で皮膚を取り除き、指屈筋またはFDB筋を露出させて切除します。FDB筋は、1ミリリットルのチロード溶液が入ったラベル付きのガラスバイアルに保管します。.
細いハサミを使用して、腓腹筋を分離し、ヒラメ筋を切除します。脚の前面から皮膚を取り除きます。次に、前脛骨筋の遠位腱と足首領域の長指伸筋またはEDL筋を特定します。
脛骨膜を取り除き、廃棄します。次に、EDLの遠位腱を切断し、解剖を続けてEDL筋を完全に除去します。長母趾伸筋またはEHL筋を特定した後、腱に続いて最初の指までの解剖を開始します。
次に、腓骨の最も外側の腱を特定してたどり、それを切断し、長腓骨筋またはPL筋を除去します。腱を特定し、4桁目までトレースします。次に、指腓骨筋またはPDQA筋を切断して除去します。
2番目の後肢を解剖した後、チロード溶液を含むラベル付きのガラスバイアルに同じタイプの筋肉を集めます。.Tyrodeの溶液を解剖室に交換して、破片やマウスの毛皮を取り除きます。PL筋を解剖室に流し込み、その完全性と収縮を確認します。
中心腱に続くヒラメ筋を縦方向または斜めに切断し、その長さの約80%を切断します。EDL筋の場合は、1つまたは2つの腱をたどり、ヒラメ筋とほぼ同じ長さに切ります。筋肉の各ペアを、解離溶液に3ミリグラムのコラゲナーゼ2型が入った新しいガラスバイアルに移し、摂氏37度のウォーターバスで65〜90分間、穏やかに振とうしながらインキュベートします。
65分間のインキュベーション後、5分ごとにステレオスコープでバイアルをチェックします。.筋肉が波打って緩んでいるように見え、繊維が剥がれ始めたら、室温でチロードで筋肉をすすぎ、コラゲナーゼを不活性化して除去します。ファイヤーポリッシュしたパスツールピペットのセットを使用して、5mmチップのピペットで筋肉の周りの溶液を攪拌します。
次に、先端から筋肉を3〜4回ゆっくりと出し入れします。筋肉が繊維を放出し始め、細くなったら、4ミリメートルの先端を使用して、手順を繰り返してより多くの繊維を分離します。
