マウスにおけるブロモフェノール色素の脳領域マイクロインジェクション

まず、滅菌済みの手術器具を作業台に置きます。麻酔をかけたマウスを脳定位固定装置フレームに固定するには、鼻クランプで上顎切歯を混合し、2本のイヤーバーで頭部を安定させます。アイハサミを使用して、頭皮に0.5センチの切開を行い、頭蓋骨を露出させます。

3%の過酸化水素に浸した綿棒で、露出した頭蓋骨をこすり、骨膜を取り除きます。頭蓋骨を乾かします。ドリルを脳定位固定装置に取り付け、脳定位固定装置アームのつまみを調整します。

拡大鏡を使用して、ドリルチップをブレグマに正確に配置します。ブレグマでのZ軸の値をLCDデジタルディスプレイで記録します。次に、ドリルチップをラムダに配置し、Z軸の値を記録します。

ノーズクランプを調整して、2つのZ値の差を最小限に抑えます。ドリルをXの座標からマイナス5.2、Yの座標に0.8をプラスして、背側の腹側のZ軸値を測定します。X の座標から 5.2 を Y の 0.8 を引いた座標でドリルを再配置し、Z 軸の値を再度測定します。

イヤーバーを指定したスケールに調整します。ドリルをブレグマに合わせ、LCDデジタルディスプレイの3つの座標をゼロに設定します。参照座標を使用して、ドリルを関心領域の上に配置します。

ドリルを開始し、ドリルが頭蓋骨を貫通するまで垂直アームを使用して徐々に下げます。綿棒を使用して破片や血液を取り除きます。ブロモフェノールブルーを含む25マイクロリットルのSDS-PAGEローディングバッファーと50マイクロリットルの二重蒸留水を200マイクロリットルのチューブに加えます。

頭蓋窓を生理食塩水で湿らせた綿パッドで覆います。0.3マイクロリットルの染料をマイクロシリンジにロードします。シリンジと電動脳定位マイクロインジェクターを脳定位固定装置アームに取り付けます。

シリンジの先端をブレグマに置き、LCDデジタルディスプレイで座標をゼロに設定します。参照座標に従って、針を関心領域に調整します。インジェクターの速度を毎分0.1マイクロリットルに設定し、電動マイクロインジェクターを始動して、0.3マイクロリットルの染料をターゲット領域に供給します。

10分後、インジェクターをゆっくりと引き出します。