maintaining and seeding hek293t cells for split-rluc plasmid transfection
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01:45 min
October 11th, 2024
DOI :
10.3791/202185-v
* これらの著者は同等に貢献しました
文字起こし
まず、加湿インキュベーター内の10%FBSを含むDMEMを含む培養培地でHEK293T細胞を維持します。顕微鏡でプレートの合流点を確認します。細胞が約80〜90%の密度に達したら、培地を取り出し、10ミリリットルのDPBSで洗浄します。
次に、培養皿からDPBSを取り出します。細胞を0.05%トリプシン-EDTAフェノールレッド1ミリリットルで処理し、細胞を摂氏37度で3分間インキュベートします。インキュベーターからプレートを取り出した後、9ミリリットルの培養培地を加えてトリプシン反応を停止し、ピペッティングで混合して残りの細胞を取り除きます。
次に、細胞懸濁液を50ミリリットルのチューブに移します。300gで室温で5分間遠心分離します。培地を取り除いたら、細胞ペレットを1ミリリットルの新鮮な培地に再懸濁します。
6ウェルプレートで細胞をプレートするには、必要な量の細胞と13ミリリットルの培地を50ミリリットルのチューブに組み合わせます。次に、希釈した細胞懸濁液を2ミリリットルずつ6つのウェルのそれぞれに分注し、プレートの四方を軽くたたいて細胞を均等に広げます。その後、プレートを摂氏37度の加湿インキュベーターに5%の二酸化炭素を入れて一晩置きます。
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