まず、NMRパルスプログラムをNMR分光器を操作しているコンピュータのディレクトリにダウンロードし、TopSpinバージョンを調整します。NMR形状パルスをディレクトリにダウンロードし、それに応じてTopSpinバージョンが更新されていることを確認します。スペクトル幅と適切な取得時間を決定したら、TopSpinソフトウェアで新しいディレクトリにedcと入力して、HSQC実験をコピーします。
パルスシーケンスパラメータタイプasedを開くには、PULPROGパラメータの横にある3つのドットをクリックして、パルスプログラムをnitrogen-15 R1 rho experimentに変更します。パルスプログラムをダブルクリックし、データセットにPULPROGを設定をクリックして、OKで確定します。asedと入力して、パルスシーケンスパラメータを開きます。パルスシーケンスで指定されたすべての欠落しているグラジエント強度とグラジエントの長さを入力します。
次に、ループカウンターL3に、取得パラメータウィンドウの窒素-15 TDエントリの半分を入力します。ループカウンターL6に、緩和曲線をフィッティングするために記録された緩和データ点の数を入力します。断熱TanhTan_halfを設定します。
NLパルスは、窒素-15 SP8パルスの形状として使用されています。次に、断熱TanhTan_half2ndを設定します。nlパルスは、窒素-15 SP9パルスの形状として使用されています。
パルス長が断熱性に十分な長さであることを確認し、P8 を 3 、 000 マイクロ秒に設定します。次に、スキャン間の回復遅延 D1 を少なくとも 2 秒以上に設定します。ダミー スキャンを少なくとも 64 に設定します。
開始点として、スキャンの数を4に設定し、S/N比が低すぎる場合は4の倍数を使用します。O1 を較正されたキャリア周波数に、O2P を 176 ppm に設定し、プロトン窒素 15 HSQC 実験の O3P をコピーします。次に、パルス長P7を、前に校正した90度のパルス長に設定します。
次に、90 度パルスのパルス電力レベルを PLW3 と PLW7 にコピーします。その後、パルス長P1とP19を90度の陽子パルス長に設定します。間接寸法の増分数を設定します。TD は L3 と L6 で 2 ずつ等しくなります。次に、成形パルスSP5をI-BURP2形状に、パルス長P15を2, 000マイクロ秒に設定します。
次に、TopSpin パルス シーケンス パラメーター ウィンドウで I-BURP2 成形パルスの横にある E をクリックして、シェイプ ツール表示を開きます。整形パルスをシミュレートするには、「NMRシミュレーションの開始」ボタンをクリックします。シミュレーションウィンドウでSshapedパルス長と回転角度を確認し、Start NMR SIMをクリックして続行します。
シミュレーションで励起範囲を確認し、水の励起を避けながら陽子スペクトル分散をカバーする適切なI-BURP2パルス長を選択します。P15を、シミュレーションウィンドウから最適なI-BURP2パルスを持つ形状のパルス長に設定します。次に、SPOFFS5を設定してI-BURP2パルスのキャリア周波数を調整し、励起範囲を左右にシフトして水の磁化障害を回避します。
次に、Bruker Shape Toolを開き、「Start NMR Simulation」をクリックして、整形されたパルスの適切なパワーレベルを決定します。I-BURP2のパルス長を成形パルス長に設定し、シミュレーションウィンドウに表示されたソフトな長方形の90°の陽子パルス長に注意してください。calcpowlev と入力して、ハード 90 度のプロトン パルスとソフトな長方形の 90 度のプロトン パルスの間のパワー レベル差をデシベル単位で計算します。
90度のハードプロトンパルスのパワーレベルをSPW5にコピーし、記憶した差をデシベル単位で加算して調整します。スピンロックのパワーレベルを決定するには、対応する90度の窒素-15パルス長を計算します。calcpowlev を使用して、スピン ロック出力と硬質 90 度の窒素 15 パルスとの間の出力差をデシベル単位で計算します。
硬質90°窒素-15パルスのパワーレベルをPLW7にコピーし、計算されたパワー差を加算してスピンロックパワーレベルPLW8を調整します。スピンロック PLW8 の電力レベルを電力レベル SPW8 と SPW9 にコピーします。Nitrogen-15 デカップリングの電力レベルを決定するには、calcpowlev を使用して、90 度の Nitrogen-15 デカップリング パルスと 90 度の Nitrogen-15 ハード パルスの電力の電力差を計算します。
90°Nitrogen-15ハードパルスPLW7の電力レベルをデカップリング電力レベルPLW31にコピーし、計算された電力差をデシベルで追加して調整します。温度補償には、パルスプログラムにライン定義のTEMP_を含めます。P18を、Nitrogen-15 R1 rho実験で使用したスピンロックの最大持続時間に設定します。
窒素-15の場合、炭素-13標識サンプルには、パルスプログラムにライン定義LABEL_CNが含まれています。P4 を計算されたパルス長に設定します。calcpowlev を使用して、P4 と carbon-13 ハード パルスの間の電力差をデシベル単位で計算します。
carbon-13 ハード パルスの電力レベルを PLW4 にコピーし、計算された電力差をデシベル単位で追加します。PLW4 を PLW2 にコピーします。サンプリングの適切な緩和遅延を決定するには、最初の 8 つの自由誘導減衰 (FID) を実行し、それらを処理します。
最も長い遅延実験のピーク強度が e に対して少なくとも 1 つ減少するが、最も短い遅延実験と比較して 25% 以上でない vplist エントリを選択します。コマンドラインにrgaと入力して、レシーバーゲインを決定します。コマンドラインに「zg」と入力して、nitrogen-15 R1 rho実験のテスト実行を開始します。
すべての遅延で水信号が抑制されていることを確認します。また、直交検出方式の 2 番目の増分であるインクリメント 9 を確認します。