説明されているプロジェクトは、アワード番号R01 HL064761、R25 HL059868、1SC1 HL099139と健康のP20 MD000175形国立研究所によってサポートされていました。内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしも国立衛生研究所の公式見解を表すものではありません。

1。ラット腸間膜小動脈の分離<ol><li>密閉チャンバーでイソフルランで動物を麻酔し、アルコールと腹部を拭いてください。 </li><li>腸間膜床を公開するミッドライン開腹術を行います。 </li><li>はさみを使用して、上腸間膜動脈に血管系に供給すると腸の約85センチメートルを削除します。近い幽門に腸のセクションと回腸coecal接合部付近の遠位端の近位端をカット。腸のセグメントは、開胸心臓穿刺によるイソフルランと安楽死で深く麻酔したラットから分離されています。 </li><li> PSSを含むコーティングされたペトリ皿で​​摘出したセクションを配置し、室温で腸間膜動脈の解剖を行います。 </li><li>右側の腸の近位端を突き止めるとintestineina反時計回りの方向（腸の遠い側の左送り血管系でieproximalエンド）の残りの部分をピン。 </li><li>近位部の一部と一緒にブランチIIとIIIのセグメントをばらばらにする。 </li><li>静脈を摘出し、動脈を分離（V字型の分岐点を持つ）と脂肪と結合組織を除去することによってそれをきれいに。鉗子で穏やかに引っ張ると結合組織の膜を介してカットすることで動脈との直接接触を避ける。 </li></ol> 2。容器の取付け<ol><li>細かい鉗子で、40μmのタングステン - フリーステンレス鋼線の二つの短いセグメント（≈4cm）をカットし、内皮を損傷しないように注意しながらそれぞれの動脈の内腔に1つを挿入。必要に応じて内腔を開くためにワイヤーの先端を使用してください。容器からのストリーミング血は良い兆候内腔が開いたときです。 </li><li> 115のNaCl、4.7 KClを、1.4のMgSO 4 · 7H 2 O、5のNaHCO 3、1.2 K 2 HPO 4、1.1のNa 2 HPO 4、1.0のCaCl 2、20 HEPESと：mMの、生理学的塩溶液（PSSでミオグラフ室を埋める37アスコルビン酸で5グルコース、pH7.4）中（100μM）° Cおよび鉗子を使用しては、慎重に、室温でチャンバにペトリ皿からスレッド血管のセグメントを転送し、ミオグラフ室に切除された近位血管のセグメントを転送し、プル容器にそれを供給する線に沿って終わり。容器をストレッチすることは避けてください。 </li><li>マイクロメーターに接続されている右側の顎に近い固定ネジの下に反時計回り線の近端を固定します。鉗子でワイヤの自由端をキャッチし、それが右の顎の遠固定ネジの下に時計回りに固定します。ワイヤーに沿って血管のセグメントは顎そのものとの接触を加えることなく、顎の間のギャップに位置していることを確認してください。 </li><li>離れて顎をねじ込み、および容器2番目の線に平行に整列し、内腔の遠端に挿入します。優しくガイドとしてすでにマウントされているワイヤーを使用して1つのモーションで血管のセグメントの内腔を介してワイヤを養う。操作中にそれをストレッチ避けるために容器から約1cmワイヤーを保持しており、内皮細胞には触れないでください。 </li><li>一緒に顎をねじ込み、最初の下に2つめの固定ワイヤの動きが右顎に固定していることを確認してください。 </li><li>トランスデューサーに接続されている左側の顎の近くに固定ネジ下時計回り方向の第2ワイヤの近端を固定します。 </li><li>左側の顎に固定するネジの下に線の遠端を固定し、ワイヤーを伸ばして締めます。 </li><li>取り付けが完了したら、&quot;取り付けメニュー&quot;のモーターをリセットし、血管の正常化を開始します。 </li></ol> 3。正規化オートデュアルワイヤーミオグラフシステム- 510Aは、&quot;正規化&quot;メニューから評価される自動化された正規化機能を備えていますし、容器が少なくとも30分間平衡後、製造元のプロトコールに従って標準化された手順によって正規化された内周に拡大することができます37℃指数曲線は、内周の圧力データに適合されます。手順は、動脈が100 mmHgの1の経壁圧の下でリラックスするときに生体内で持っていたとしているという血管径（D 100）を定義してラットの腸間膜動脈の正規化パラメータは次のとおりです。 <ol><li>ターゲット経壁圧は= 13.3 kPa（100ミリメートルHg）。 </li><li>時間= 60秒、正規化の各ステップの所要時間。 </li><li> IC 1 / IC 100 = 0.9（IC 1 =正規化された内周、IC100は目標圧力に対応する=内部円周。 </li><li>接眼レンズのキャリブレーション2 *Δ（MM /眼部門）、2デルタは、プログラミング上の理由からです。 </li></ol>ヘアラインがマウントされている容器のSEGMの相手側とこちら側の端を超えている顕微鏡アイピ​​ースの測定値を使用してマウントされている腸間膜動脈の長さを測定ENT。簡単に言えば、マウントされている血管のセグメントの長さは、解剖顕微鏡でキャリブレーション眼アイピースと最大倍率で測定されます。セグメントの遠端（1）上の毛ラインとアイピースの読書と眼の部門のセグメントの近端は、（2）測定し、記録されています。これらの値は、マイクロメータの測定値と、前と容器を延伸後は記録され、近似曲線、100 mm Hgの目標経壁圧に対応する内径を計算するプログラムのためのメニューを締結我々の研究では、動脈はアクティブ力の開発が最大となるD 1 = 0.9 XD 100の内腔直径に設定されていました。ラット腸間膜動脈における≥10分のアクティブな力の開発は続行する実験に最適と考えられている。下のアクティブな力を持つ組織は廃棄した。 4。応答の測定正規化した後、容器の機械的および機能的特性は再現性の収縮を得るために5μMのフェニレフリン（PE）の反復塗布（通常は2または3）で挑戦的な船舶を含む&quot;標準的なスタートを&quot;、実行することによって再活性化される。次のように我々の研究室における典型的な&quot;標準的なスタートは、&quot;刺激とウォッシュアウト期間のシリーズで構成されています。 <ol><li>ミオグラフ室カバーを交換し、95％空気および5％CO 2で通気を開始します。 </li><li>新鮮なPSS（100μMのアスコルビン酸を含む）でチャンバーを埋める</li><li> 5分間5μMのPEとの契約の容器とPSS緩衝液で4回洗浄する。 </li><li>最後の洗浄後に、PSSとリフィルチャンバーとステップ（ii）及び（iii）を繰り返す前に3分を待ちます。 </li></ol>標準のスタート後、動脈は実験の準備ができています。契約船の緩和は、CaCl 2の濃度を増加させ（ - 4mMの0.5）の累積加算することによって評価されています。阻害薬が使用されている船舶はアッセイ中に20分と現在のためのミオグラフチャンバー内の化合物とプレインキュベートされています。 5。データ解析船と力のトレーシング、直接テキストデータに変換するための&quot;正規&quot;のデータは、SigmaPlotの11.0グラフプログラム（SYSTATソフトウェア、ポイントリッチモンド、カリフォルニア州）で分析し、図1に示すようにプロットした。トレーシングから計算された濃度-応答データは、プログラムの薬理メニューの4つのパラメーターロジスティック関数にフィット実験データから、EC 50値を決定することにより分析した。グループ間およびグループ内の比較は、片道の分散分析（ANOVA）および p &lt;0.05有意と考えているとの相違により実施した。 6。代表的な結果： <table border="1"><tbody><tr><th>パラメータ</th><th>ウィスター</th><th>ダール食塩感受性</th><th> Dahl食塩抵抗性</th></tr><tr><td> L 100（ミクロン） </td><td> 83.26 ± 2.33 </td><td> 91.52 ± 4.67 </td><td> 117.45 ± 8.43 * </td></tr><tr><td> X 1 </td><td> 604.21 ± 41.97 </td><td> 752.24 ± 85.25 </td><td> 745.84 ± 110.09 </td></tr><tr><td> R 2 </td><td> 0.99 ± 0.003 </td><td> 0.97 ± 0.008 </td><td> 0.97 ± 0.007 </td></tr></tbody></table> *ウィスターとDRのためのL 100の値の差は統計的に有意である。シャピロ-ウィルクの正規性検定は、（P = 0.588）に渡さ、等分散のテストは、（P = 0.237）に合格。 L 100ターゲット経壁圧に対応するマウントされているセグメントの=内径。 X 1 =その正規化された内周（実験が行われたときのマイクロメータの読み値のすなわち値）にマウントされている容器を伸ばすために必要なマイクロポジショナーの設定。 R 2指数曲線への適合のための=回帰係数（X I、Y i）の。 注意：手順の詳細は510Aミオグラフシステム6のマニュアルに記載されています。 表1サンプルリードアウト&quot;正規のメニュー&quot;に示すように基本的なプログラムからウィスター、DSとDRから腸間膜動脈セグメントのための正規化パラメータの。値は5匹の動物（± SEM）を意味しています。ウィスターとDS用L 100個の値の間に*の違いは（p &lt;0.05）に統計的に有意である。 <table border="1"><tbody><tr><th>ウィスター</th><th> DS </th><th> DR </th></tr><tr><td> 14.2 ± 0.6 </td><td><strong&gt; 25.8 ± 2.7 * </td><td> 20.9 ± 1.3 * </td></tr></tbody></table>それぞれの容器に5μMのPEのアプリケーションは、次のウィスター、DSとDRラットから分離された腸間膜動脈、 表2。開発緊張（MN）。報告された値は6-8匹の動物から（± SEM）を意味しています。 *ウィスターのコントロール（P &lt;0.05）と有意に異なる。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig1.jpg" /> 1mMのCa 2 +を含む生理食塩水でワイヤーミオグラフにマウントされているのWistarラットからPE -契約腸間膜動脈の図1のCa 2 + の電子弛緩。動脈は、37℃で30分間平衡化したのCa 2に一定の通気と応答を持つ° C + Eに決定。 PEは、Ca 2の累積加算に続いて5μM+のほかにトレース代表的な力が示されています。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig2.jpg" /> 1mMのCa 2 +を含む生理食塩水でワイヤーミオグラフにマウントされているDSのラットからPE -契約腸間膜動脈の図2。Ca 2 +の 電子弛緩。動脈は、37℃で30分間平衡化したのCa 2に一定の通気と応答を持つ° C + Eに決定。 PEは、Ca 2の累積加算に続いて5μM+のほかにトレース代表的な力が示されています。 のCa 2 +緩和を厳しくウィスターとDRラットからのものと比べて、この組織に侵入された。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig3.jpg" /> 1mMのCa 2 +を含む生理食塩水でワイヤーミオグラフにマウントされているDRのラットからPE -契約腸間膜動脈の図3のCa 2 + の電子弛緩。動脈は、37℃で30分間平衡化した° C一定の通気とCa 2への応答と+ PEは、Ca 2の累積加算に続いて5μMを添加してトレースの電子 determined.A代表の力+が表示されます。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig4.jpg" /> 図4。 A. [Ca 2 +]の電子応答曲線。DRとDSラットから分離された腸間膜アーケードの4つのパラメータロジスティックcurve.C.CaR式にデータをフィッティングすることにより決定したリラクゼーションのためのEC 50値を示すB.バーチャート。

<ol>
	<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents Actions. 2, 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedures+for+investigating+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph.">Procedures for investigating of small vessels using small vessel myograph.</a> DMT Danish Myo Technology. , (2004).</li><li>Angus, J. A., Wright, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+to+study+the+pharmacodynamics+of+isolated+large+and+small+blood+vessels.">Techniques to study the pharmacodynamics of isolated large and small blood vessels.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 44, 395-407 (2000).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels.">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> J. Physiol. 275, 85-101 (1978).</li><li>Lindhorst, J., Alexander, N., Blignaut, J., Rayner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+hypertension+between+blacks+and+whites:+an+overview.">Differences in hypertension between blacks and whites: an overview.</a> Cardiovasc. J. Afr. 18, 241-247 (2007).</li><li>Eley, S. L., Allen, C. M., Williams, C. L., Bukosi, R. D., Pointer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+thiazide+on+renal+interstitial+calcium.">Action of thiazide on renal interstitial calcium.</a> Am. J. Hypertens. 21, 814-819 (2008).</li><li>Palmer, C. E., Rudd, M. A., Bujoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+interstitial+Ca2++during+sodium+loading+of+normotensive+and+Dal-salt+hypertensive+rats.">Renal interstitial Ca2+ during sodium loading of normotensive and Dal-salt hypertensive rats.</a> Am. J. Hypertens. 16, 771-776 (2003).</li><li>Hurwitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+control+of+plasma+calcium+concentration.">Homeostatic control of plasma calcium concentration.</a> Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 31, 41-100 (1996).</li><li>Brown, E. M., MacLeod, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+sensing+and+extracellular+calcium+signaling.">Extracellular sensing and extracellular calcium signaling.</a> Physiol. Rev. 81, 239-297 (2001).</li><li>Breitwieser, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+calcium+as+an+integrator+of+tissue+function.">Extracellular calcium as an integrator of tissue function.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 40, 1467-1480 (2008).</li><li>Mupanomunda, M. M., Wang, Y., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+chronic+sensory+denervation+on+Ca2+-induced+relaxation+of+isolated+mesenteric+resistance+arteries.">Effect of chronic sensory denervation on Ca2+-induced relaxation of isolated mesenteric resistance arteries.</a> Am. J. Physiol. 274, 1655-1661 (1998).</li><li>Mupanomunda, M. M., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstitial+Ca2++undergoes+dynamic+changes+sufficient+to+stimulate+nerve-dependent+Ca2+-induced+relaxation.">Interstitial Ca2+ undergoes dynamic changes sufficient to stimulate nerve-dependent Ca2+-induced relaxation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1035-1042 (1999).</li><li>Mupanomunda, M. M., Tian, B., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+interstitial+Ca2+.">Renal interstitial Ca2+.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F644-F649 (2000).</li><li>Awumey, E. M., Hill, S. K., Diz, D. I., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+P-450+metabolites+of+2-arachidonoylglycerol+play+a+role+in+Ca2+-induced+relaxation+of+rat+mesenteric+arteries.">Cytochrome P-450 metabolites of 2-arachidonoylglycerol play a role in Ca2+-induced relaxation of rat mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2363-2370 (2008).</li><li>Chen, W., Bergsman, J. B., Wang, X., Gilkey, G., Pierpoint, C. R., Daniel, E. A., Awumey, E. M., Dauban, P., Dodd, R. H., Ruat, M., Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+external+calcium+signaling+involves+the+calcium-sensing+receptor+in+neocortical+nerve+terminals.">Presynaptic external calcium signaling involves the calcium-sensing receptor in neocortical nerve terminals.</a> PloS One. 5, e8563-e8563 (2010).</li><li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perivascular+sensory+nerve+Ca2++receptor+and+blood+pressure+regulation:+a+hypothesis.">The perivascular sensory nerve Ca2+ receptor and blood pressure regulation: a hypothesis.</a> Am. J. Hypertens. 11, 1117-1123 (1998).</li><li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+Ca2++and+blood+pressure:+evidence+that+Ca2+-sensing+receptor+activated+sensory+nerve+dilator+activity+couples+changes+in+interstitial+Ca2++with+vascular.">Dietary Ca2+ and blood pressure: evidence that Ca2+-sensing receptor activated sensory nerve dilator activity couples changes in interstitial Ca2+ with vascular.</a> 16, 218-221 (2001).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

高血圧は、心血管脳、腎罹病率/死亡率の主要な原因です。高血圧症の発生は、人口が高く、食塩感受性高血圧は、人口の高齢化で特に高く、そして白人よりも黒人でより一般的です。これは、彼らの腎臓9にナトリウムを保持する黒人の傾向によると考えられる。塩感受性は腎臓病の主な要因であると内皮機能障害に関連付けられていますが、メカニズムは完全には理解されていない...

<table border="1"><tbody><tr><th>機器/試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td>オートデュアルワイヤーミオグラフシステム- 510A DMT -米国、（株） </td><td>アトランタ、ジョージア州。 </td><td> 100151 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab/4SPデータ収集システム</td><td> ADInstruments、コロラドスプリングス、CO。 </td><td> ML750 </td><td> 4月16日の入力チャンネルを持つ新しいモデルが用意されています。 </td></tr><tr><td>デルのディメンションXPSのGen 4コンピュータ</td><td>デル</td><td></td><td></td></tr><tr><td> STEMI SV II（アポ）眼と解剖顕微鏡</td><td>カールツァイスインターナショナル。 </td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウィスター、ダール食塩感受性、Dahl食塩抵抗性ラット</td><td>におけるハーランスプレーグドーリー、インディアナポリス、。 </td><td></td><td></td></tr><tr><td>齧歯類チョウ</td><td>ハーランドTekland、マディソン、ウィスコンシン州。 </td><td></td><td></td></tr><tr><td>フェニレフリン</td><td>シグマアルドリッチ、セントルイス、MO。 </td><td></td><td></td></tr><tr><td>他の化学物質</td><td></td><td></td><td>使用されるすべての化学物質は、市販の純粋なグレードのものであった。 </td></tr></tbody></table>

mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography

このような腸間膜動脈などの近位抵抗血管は、末梢血管抵抗に大きく貢献する。主に身体の全体的な要件に応じて様々な臓器への血流を導くの直径の関数で100から400μmの間のこれらの小さな船。ラット腸間膜動脈は、100μmよりも大きい直径を有している。第一Mulvayとハルパーン1で説明した筋運動記録法の技術は、、ベヴァンとOsher 2で提案した方法に基づいていた。テクニックは、筋肉の準備の大幅な短縮が防止される等尺性条件下では小型船舶、に関する情報を提供します。別のアゴニストに対する血管の力の生産と感度はストレッチの程度に依存しているため、アクティブなテンションの長さの関係によれば、取付ワイヤーのコンプライアンスを防ぐために、等尺性条件下での収縮の研究を実施することが不可欠である。ステンレス鋼線があるため3。手法は血管平滑筋細胞の受容体の正常な機能のための証拠を得るためにマウントされている船のアゴニスト誘発性収縮の比較を可能にする記録された応答に影響を与える後者、の酸化タングステンワイヤに好まれます。 我々はphenylyephrineと契約している孤立した腸間膜動脈は外カルシウム（Ca 2 + E）の累積濃度を添加すると緩和するいくつかの研究で示されている。調査結果は、私たちは、Gタンパク質共役型のCa 2 +感知受容体（CAR）を発現しその血管周囲の感覚神経を、結論を導いた、この血管弛緩反応を媒介する。自動ワイヤマイオグラフィー法を用いて、我々は、ウィスター、ダール食塩感受性（DS）とDahl食塩抵抗性（DR）から腸間膜動脈は、ラットは、Ca 2 + eに異なる反応をすることここに示す。 Wistarラットから採取した組織は、DRとDSからのものに比べて高いのCa 2 + -感受性を示した。 DSラットから腸間膜動脈における減少CARの発現が減少するのCa 2隔離された、事前に契約動脈の+ 電子誘起緩和と相関する。データは、CARが増加アドレナリントーン下腸間膜動脈の弛緩のために必要とされることを示唆しているように高血圧に発生し、はるかに深刻なDSのであるダール動物におけるCARシグナル伝達経路に内在する欠陥を、示している。 方法は、腸間膜抵抗動脈の血管反応性のex vivoでの決定に有用であり、異なるアゴニストおよび/ ​​またはアンタゴニストの間に同様の小血管との比較が容易にかつ一貫して横に並べて6,7,8を評価することができます。

Watch this Scientific Journal Video about Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography at JoVE.com

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

分離された腸間膜動脈における力測定のための自動化された筋運動記録法の方法が記載されている。それは、フェニレフリンと細胞外カルシウムに対する応答を決定するために510A Mulvany -ハルパーンオートデュアルワイヤーミオグラフを採用しています。 300μmの、独立して - 法は、60の直径の小さな血管のアゴニストに対する等尺性応答の一貫性のある決定を可能にする。

自動ワイヤの筋運動記録法を用いた腸間膜動脈の収縮と弛緩の研究

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

mesenteric-artery-contraction-relaxation-studies-using-automated-wire

Research

JoVE Journal

Medicine

28.4K ビュー.  North Carolina Central University, Durham. 分離された腸間膜動脈における力測定のための自動化された筋運動記録法の方法が記載されている。それは、フェニレフリンと細胞外カルシウムに対する応答を決定するために510A Mulvany -ハルパーンオートデュアルワイヤーミオグラフを採用しています。 300μmの、独立して - 法は、60の直径の小さな血管のアゴニストに対する等尺性応答の一貫性のある決...

ビデオ: Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

圧力筋運動記録法を用いた抵抗腸間膜動脈における筋原性応答および血管作用を評価します

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

医学

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

バイオアッセイとしてウシ腸間膜動脈と静脈の切片を分離して使用すると、小腸で血管作用をテストするために

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

血管周囲ドラッグデリバリーパッチの移植に大腿動脈ワイヤ傷害のマウスモデル

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to atherosclerotic plaque development or the rupturing of established plaques, interrupts normal blood flow leading to various morbidities such as myocardial infarction and stroke. In the clinic endovascular procedures such as angioplasty are commonly performed to reopen the lumen. However, these treatments inevitably damage the vessel wall as well as the vascular endothelium, triggering an excessive healing response and the development of a neointimal plaque that extends into the lumen causing vessel restenosis (re-narrowing). Restenosis remains a major cause of failure of endovascular treatments for atherosclerosis. Thus, preclinical animal models of restenosis are vitally important for investigating the pathophysiological mechanisms as well as translational approaches to vascular interventions. Among several murine experimental models, femoral artery wire injury is widely accepted as the most suitable for studies of post-angioplasty restenosis because it closely resembles the angioplasty procedure that injures both endothelium and vessel wall. However, many researchers have difficulty utilizing this model due to its high degree of technical difficulty. This is primarily because a metal wire needs to be inserted into the femoral artery, which is approximately three times thinner than the wire, to generate sufficient injury to induce prominent neointima. Here, we describe the essential surgical details to effectively overcome the major technical difficulties of this model. By following the presented procedures, performing the mouse femoral artery wire injury becomes easier. Once familiarized, the whole procedure can be completed within 20 min.

The mouse femoral artery wire injury model of restenosis is technically challenging. In this protocol we show the key technical details essential for successfully performing wire injury to induce consistent&#160;neointima for studies of restenosis.

動脈再狭窄のマウスモデル：大腿ワイヤー傷害の技術的な側面

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

マウスにおける加速アテローム性動脈硬化症の誘導:ワイヤー傷害モデル

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with small-animal models such as rodents. However, the physiology of the human heart differs significantly from that of the rodent heart, underscoring the need for clinically relevant models to study heart disease. Here, we present a protocol to model ischemic heart disease using cardiomyocytes differentiated from human induced pluripotent stem cells (hiPS-CMs) and to quantify the damage and functional impairment of the ischemic cardiomyocytes. Exposure to 2% oxygen without glucose and serum increases the percentage of injured cells, which is indicated by staining of the nucleus with propidium iodide, and decreases cellular viability. These conditions also decrease the contractility of hiPS-CMs as confirmed by displacement vector field analysis of microscopic video images. This protocol may furthermore provide a convenient method for personalized drug screening by facilitating the use of hiPS cells from individual patients. Therefore, this model of ischemic heart disease, based on iPS-CMs of human origin, can provide a useful platform for drug screening and further research on ischemic heart disease.

We present a model of ischemic heart disease using cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells, together with a method for quantitative evaluation of tissue damage caused by ischemia. This model can provide a useful platform for drug screening and further research on ischemic heart disease.

hiPSC由来心筋細胞を用いた虚血性心疾患のモデルと心筋細胞収縮の映像的比較

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Mechanical Control of Relaxation Using Intact Cardiac Trabeculae

Diastolic dysfunction is a common phenotype across cardiovascular disease presentations. In addition to elevated cardiac stiffness (elevated left ventricular end-diastolic pressure), impaired cardiac relaxation is a key diagnostic indicator of diastolic dysfunction. While relaxation requires the removal of cytosolic calcium and deactivation of sarcomeric thin filaments, targeting such mechanisms has yet to provide effective treatments. Mechanical mechanisms, such as blood pressure (i.e., afterload), have been theorized to modify relaxation. Recently, we showed that modifying the strain rate of a stretch, not afterload, was both necessary and sufficient to modify the subsequent relaxation rate of myocardial tissue. The strain rate dependence of relaxation, called the mechanical control of relaxation (MCR), can be assessed using intact cardiac trabeculae. This protocol describes the preparation of a small animal model, experimental system and chamber, isolation of the heart and subsequent isolation of a trabecula, preparation of the experimental chamber, and experimental and analysis protocols. Evidence for lengthening strains in the intact heart suggests that MCR might provide new arenas for better characterization of pharmacological treatments, along with a method to assess myofilament kinetics in intact muscles. Therefore, studying the MCR may elucidate a path to novel approaches and new frontiers in the treatment of heart failure.

Rapid myocardial and cardiac relaxation is essential for normal physiology. Mechanical relaxation mechanisms are now known to be dependent on strain rate. This protocol provides an overview of the acquisition and analysis of experiments to further study the mechanical control of relaxation.

無傷の心臓小柱を用いたリラクゼーションの機械的制御

Diastolic dysfunction is a common phenotype across cardiovascular disease presentations. In addition to elevated cardiac stiffness (elevated left ...

Multimodality Diagnosis of Mesenteric Ischemia

Early diagnosis of mesenteric ischemia remains challenging because mesenteric ischemia presents with no key symptoms or physical findings, and no laboratory data specifically indicates intestinal tissue ischemic status before necrosis develops. While computed tomography is the standard for diagnostic imaging, there are several limitations: (1) repeated assessments are associated with increased radiation exposure and risk of renal damage; (2) the computed tomography findings can be misleading because necrosis occasionally occurs despite opacified mesenteric arteries; and (3) computed tomography is not necessarily available within the golden time of salvaging the intestines for those patients in the operating room or at a place far from the hospital. This article describes a challenge to overcome such limitations using ultrasonography and near-infrared light, including clinical studies. The former is capable of providing not only morphologic and kinetic information of the intestines but also perfusion of the mesenteric vessels in real-time without transferring the patient or exposing them to radiation. Transesophageal echocardiography enables precise assessment of mesenteric perfusion in the OR, ER, or ICU. Representative findings of mesenteric ischemia in seven aortic dissection cases are presented. Near-infrared imaging with indocyanine green helps visualize the perfusion of vessels and intestinal tissues although this application requires laparotomy. Findings in two cases (aortic aneurysm) are shown. Near-infrared spectroscopy demonstrates oxygen debt in the intestinal tissue as digital data and can be a candidate for early detection of mesenteric ischemia without laparotomy. The accuracy of these assessments has been confirmed by intraoperative inspections and postoperative course (prognosis).

This article presents a multimodal approach that aims to overcome the limitations of traditional methods in detecting mesenteric ischemia and preventing bowel necrosis. The presented technique offers a promising solution by combining state-of-the-art ultrasonography with cutting-edge near-infrared light technologies.

腸間膜虚血の集学的診断

Early diagnosis of mesenteric ischemia remains challenging because mesenteric ischemia presents with no key symptoms or physical findings, and no ...

Rodent Model of Intestinal Ischemia-Reperfusion Injury via Occlusion of the Superior Mesenteric Artery

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, such as gastric dilatation volvulus (GDV), mesenteric torsion, and colic, are observed in animals such as dogs and horses. An initial interruption of blood flow causes tissues to become ischemic. Although necessary to salvage viable tissue, subsequent reperfusion can induce further injury. The main mechanism responsible for IRI is free radical formation upon reperfusion and reintroduction of oxygen into damaged tissue, but there are many other components involved. The resulting local and systemic effects often impart a poor prognosis. 
Intestinal IRI has been the subject of extensive research over the past 50 years. An in vivo rodent model in which the base of the superior mesenteric artery (SMA) is temporarily ligated is currently the most common method used to study intestinal IRI. Here, we describe a model of intestinal IRI utilizing isoflurane anesthesia in 21% O2 medical air that yields reproducible injury, as demonstrated by consistent histopathology of the small intestines. Tissue injury was also assessed in the colon, liver, and kidneys.

We describe how to generate a widely used surgical model of intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) in rodents. The procedure involves occlusion of the superior mesenteric artery followed by the restoration of blood flow. This model is useful for studies investigating occlusive causes of intestinal IRI in both veterinary and human medicine.

上腸間膜動脈閉塞による腸虚血再灌流傷害のげっ歯類モデル

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, ...