サンディープクラナは、NIH（K08DKO81479）でサポートされています。 Vikrant Rachakondaは（T32DK067872）でサポートされています。

ここに示した例は、ジョージアリージェンツ大学IACUCによって承認された実験からのものである - プロトコル番号：＃2011から0408 試薬の調製<ol><li>ストック解剖液（5×）の500ミリリットルのために、21.18グラムのNaCl、0.875グラムのKCl、0.739グラムのMgSO 4、1.049グラムのMOPS、Milli-Q水450ミリリットル中0.019グラムのEDTAを溶解：解剖液ストックを準備します。 1 N NaOHを用いて7.3〜7.4にpHを調整します。ミリQ水で500ミリリットルにボリュームを構成しています。ストック溶液は、7〜10日まで保存することができます。化学物質とそのベンダーのリストについては、表1を参照してください。 mMの中の濃度については、表2を参照してください。 </li><li>作業解剖溶液を調製する：毎日新鮮なワーキング解剖溶液を調製します。ワーキング溶液を100ミリリットルのために、0.091グラムのグルコース、ミリQ水の79.8ミリリットル中0.016グラムのNaH 2 PO 4および0.022グラムのピルビン酸ナトリウムを溶解します。 voluをもたらすために0.2ミリリットル1MのCaCl 2と20ミリリットル解剖ソリューションの株式を追加100ミリリットルの私。 </li><li>生理食塩水（PSS）を準備：千ミリリットルPSSを製造するために、0.365グラムのKCl、6.545グラムのNaCl、0.296グラムのMgSO 4、0.163グラムのKH 2 PO 4、2.072グラムのグルコース、950ミリリットル中2.184グラムのNaHCO 3および2.383グラムのHEPESを溶解ミリQ水。 1 N NaOHを用いて7.3〜7.4にpHを調整します。ミリQ水で千ミリリットルにボリュームを構成しています。溶液2mlを削除し、1 M CaCl 2を2ミリリットルと交換してください。 （新鮮なPSSは毎日調製する必要があります） </li><li>のCa 2+なしで100ミリリットルPSSのために、0.036グラムのKCl、0.654グラムのNaCl、0.029グラムのMgSO 4、0.016グラムのKH 2 PO 4、0.207グラムのグルコース、0.218グラムのNaHCO 3、0.238を溶解：カルシウム（Ca 2+）を無料でPSSを準備G HEPES、ミリQ水95ミリリットル中0.015グラムのEGTAおよび0.0026グラムのニトロプルシドナトリウム（SNP）。 1 N NaOHを用いて7.3〜7.4にpHを調整します。ミリQ水で100mlにボリュームを構成しています。 </li></ol>ガラスカニューレの調製<ol><li>ガラスピペットを引っ張りますメーカーのガイドライン通りにピペットプラーを使用して、100〜150μmの先端がカニューレを生成します。 </li><li>ベベル微小電極bevellerを用いてガラスカニューレのヒントは、火はそれらを磨くとヒータプローブを使用して、〜45°のガラスカニューレ先端を曲げます。 </li><li>マイクロピペットホルダーにカニューレをロードし、灌流チャンバーへのマイクロピペットホルダーを取り付けます。 </li></ol>灌流チャンバーの調製<ol><li> 5分ごとに解剖溶液を添加したミリQ水で洗い流し灌流チャンバー。解剖溶液2mlでチャンバーをロードします。 </li><li> 10ミリリットル注射器を用いてカニューレを介して吸入解剖液と気泡なしで慎重に全体のカニューレおよび接続されているチューブを埋めます。気泡の発生を防止するため穏やかに吸引を適用します。 </li><li>それぞれが鈍鉗子を用いたハーフノットを持つ2つの縫合糸を準備します。眼科モノフィラメントナイロン縫合糸（10-0、0.2メートル法）があるだけで結び目を調製するために使用されているので直径1〜2ミリメートル、解剖顕微鏡を必要とすることができます。 </li><li>解剖顕微鏡下で可視化し、わずかに先端から部分的に閉じられた縫合糸の結び目の両方カニューレをロードするために解剖鉗子を使用しています。後、これらのノットはカニューレを挿入動脈末端に慎重にスライドされ、完全に閉じました。 </li></ol> SDラットから腸間膜動脈アーケードの4コレクション<ol><li>これらの実験を実施する前に、ローカル施設内動物管理使用委員会（IACUC）の承認を求めます。制御された温度と照明と水に自由にアクセスを許可し、商業齧歯動物食と動物施設におけるハウス動物。 </li><li>ケタミンの腹腔内注射（80mg / kg）およびキシラジン（10mg / kg）により、ラットを麻酔。つま先ピンチにより、必要に応じた管理者の追加の麻酔薬場合深麻酔を確認してください。 </li><li>手術用麻酔を確認した後、断頭により動物を安楽死させます。 UTIのためのAAALACガイドラインに従ってください殺処分のための適切な方法をlizing。 </li><li>胸骨に骨盤から中線開腹術を実行するために解剖はさみとピンセットを使用してください。これは、2つのステップで行われます。最初、皮膚を切開し、第二、下層の筋層を切開します。ケアは、腹腔内の臓器を傷つけないように注意しなければなりません。 </li><li>幽門に腸近く、回盲接合部に近い遠位端の近位端をカットします。両方が糜粥、従って、細胞外入浴液の汚染を回避便の漏れを防止するために、個別に終了接続します。給電血管系、すなわち 、上腸間膜動脈の近くに、そのベースで腸間膜を切開し、氷冷解剖溶液を含む50ミリリットルビーカーに全小腸腸間膜ベッドを転送します。 </li><li>採取した組織は、5分間氷冷解剖溶液中に滞在し、血液を取り除くために、新鮮な解剖溶液でリンスすることを可能にします。 </li></ol> 5.単離と4 番目のカニューレ挿入</SUP&gt;注文腸間膜動脈<ol><li>シルガードコートディッシュで右側の腸の近位端を突き止めます。 （ 図1）が腸間膜を広げダウンセグメントを固定し、血管を露出させ、反時計回りの経路の残りの腸の拡張。注：我々は、室温での動脈セグメントを分離します。それ以外の場合は、氷の上の皿を含む腸間膜アーケードを配置します。当院でのものを含むいくつかの研究室では、4℃で動脈を切開するためにチラーユニットを使用しています。 </li><li>ステレオズーム顕微鏡下で小さなハサミを使用して小腸にオーダー小さな腸間膜動脈番目 3 番目と4（〜260ミクロン）の平行を解剖。最初にすべてのカバーの脂肪を離れて解剖。その後静脈を解剖し、V字型の分岐点と動脈を分離します。選択したセグメントを穿刺しないように注意してください。 2 番目の注文支店近く脂肪を解剖起動して、3 番目または4 番目の ORDへの道を見つけますER船。 <ol><li>注：動脈と静脈は、それらの壁の厚さに基づいて区別することができる - 動脈壁は、静脈のより厚いです。隣接する結合組織を穏やかに血管に対して垂直に引かれたときに動脈がいない間また、静脈が容易に崩壊します。管腔直径&lt;400μmでは、全身血管抵抗の主要な部位であると動脈ので、このプロトコルのために、我々は（直径&lt;300μmのルーメン）注文ラット腸間膜動脈番目の 4を使用していました。 </li></ol></li><li>小腸に動脈平行4-5ミリのセクションを分離します。小腸への埋め込 ​​み、すべての5 番目の順序の枝を可視化し、少し離れた枝の原点から、それらをカットした部分を保持します。枝のこれらの保存された部分は、その後、それらのカニューレ挿入をガイドする、灌流チャンバーに動脈セグメントを転送する（解剖鉗子で）部位を保持し、として機能します。 </li><li>その後に遠位の2切開を行うことで、動脈セグメントをカット動脈の両側のため枝番 5と灌流チャンバーに転送し（ 図1Cおよび凡例を参照してください）。 </li><li> （：100〜150μmの直径）解剖鉗子で動脈セグメントの先端を保持することによって解剖鉗子を用いてガラスマイクロピペットのいずれかの容器の一方の端部にカニューレを挿入。カニューレを挿入端に前にロードされた部分的に閉じた縫合糸をスライドさせて固定します。注：動脈の近位端は、 その場の環境で模倣するサーボ制御圧力調整装置に接続されているガラスカニューレにカニューレを挿入することができます。 </li><li>解剖ソリューションを取り付けカニューレとコックを接続するチューブ内の解剖液が注射器のそれと合流するように、このカニューレに接続されたコックに10ミリリットルの注射器をロードしました。ゆっくりシリンジを上げます。ソリューションの重力は、容器の開口端部から血管内の血液を除去します。動脈内の血液を除去した後、コックを閉じます。 、また、圧力コントローラに活栓を取り付け、電源を入れ、ゆっくりと同じ結果を得る5〜10 mmHgまで圧力を高める：注意してください。 </li><li>慎重に動脈セグメントのアンタイド端にできるだけ近い他のカニューレをもたらすことによって、第二のガラスカニューレ上に容器の先端を接続します。カニューレを挿入端に前にロードされた部分的に閉じた縫合糸をスライドさせて固定します。ケアは、引っ張るまたは動脈セグメントを引っ張らないように注意する必要があります。両方のカニューレに取り付けられたコックが閉じていることを確認します。 </li><li>ライブビデオ録画を備えた倒立顕微鏡のステージ上に灌流チャンバーを転送します。 </li><li>サーボ制御圧力調整装置への動脈セグメントの近位端に接続されたカニューレのコックを接続し、安定した管腔内の圧力を維持するために閉じたままコックが他のカニューレに取り付けられていることを確認してください。 </li><li>次に、吸引ポートAに真空管を取り付けチャンバーの灌流ポートに灌流チューブをND。 注：ベベル針ポートを吸引および灌流のためのブラント針ポートに使用されます。 </li><li>使用して2ml /分で（5％CO 2、5％O 2及び90％Nは、中性pHおよび適切な酸素17を維持するためのガス混合物で平衡化し、37°C、）1つのインライン液加熱器を介して暖かいPSSと血管の灌流を開始します蠕動ポンプ。同様に上の真空をオンにします。継続的に温度を監視するために、チャンバー内にサーミスタを配置します。 </li><li>チャンバー内のP​​SSの温度は〜37℃（通常は5分以内）に近づくと、ゆっくりと漏れを20〜100 mmHgで、チェック血管から管腔内の圧力を増加させます。これは、圧力調整器の自動圧力設定を使用して行われます。リークして血管を捨て、別のセグメントと交換します。漏れのある容器は圧力を保持することができません。 </li><li> 100 mmHgの圧力を維持しながら曲がるための動脈セグメントを評価します。スクリューレバーを使用して、動脈セグメントをまっすぐにカニューレを移動します。以上の動脈セグメントをストレッチしないでください。目的は、 生体内 、動脈セグメント長に模倣することです。 </li><li> 70 mmHgでの圧力を低下させる（腸間膜アーケード18 in vivoでの圧力に模倣する）および動脈セグメントが安定化し、筋原性緊張を開発することができます。動脈は、（40〜70 mmHgの）実験戦略と血管床に応じて可変に加圧することができます。以前に公開されたレビューは、異なる血管床8から動脈セグメントにおけるMTの変動の優れたレビューを提供しています。 </li></ol>動脈直径の6測定<ol><li>モノクロビデオ電荷結合素子カメラを備えた顕微鏡で10×対物レンズで表示動脈。ビデオフレームグラバーとリアルタイムのエッジ検出システムを使用して管腔直径を測定します。使用される機器のリストを表3に提供されます。 </li><li>モニタとレコード容器D連続iameter。 </li><li> MTの開発のために確認します。注：我々は、ラット腸間膜抵抗動脈で、70 mmHgので、MTの開発は、直径〜20％減少することを特徴とすることを観察しました。 MTは血管床と動物種に応じて変化します。 </li><li> 1μMのフェニレフリン（Pheで）および1μMのアセチルコリン（AChの）に血管収縮剤および血管拡張性応答を評価することにより血管の生存率を確認してください。 </li><li>各実験の最後に、20分間のCa 2+を含まないPSSで動脈をインキュベートすることによって受動的直径（PD）を決定します。 </li></ol> 7.筋原レスポンス<ol><li> 20ミリメートルHgのに圧力を低下させ、直径が安定します。増分ステップ（20、40、60、80および100）内の管腔内の圧力を増加させ、各圧力段階で動脈が（通常は5分以内）安定した直径を達成することを可能にします。 </li><li> 20 mmHgでの管腔内の圧力を軽減し、2+を含まないPSS 0.39ミリモルを含むカリフォルニア州の動脈セグメントをインキュベートEGTAおよび0.1mM SNP。動脈直径（通常15分）を安定化することができます。 </li><li> 0.39 mMのEGTAおよび0.1mMのSNPを含むのCa 2+を含まないPSSの圧力-ステップ応答を繰り返します。 </li></ol>データの結果と計算の8解釈<ol><li> CAの観察直径のパーセント差としてMTを計算2+以下の計算に従って各圧力でのCa 2+を含まないPSS対含有： <img alt="式（1）" fo:src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1.jpg" /></li><li>直径血管運動経動脈について1分間プラトー相を平均することによって計算することができます。関係に従って最大弛緩率（％PD）の割合として収集されたデータを表現します。％PD = 100×[ΔD/ PD]; ΔDは任意の治験化合物（ 例えば Pheで）を添加する前と後の直径との差です。 PDはまた、受動的直径（あります最大直径）。 </li></ol>

<ol>
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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenaline-induced+depolarization+is+smaller+in+isobaric+compared+to+isometric+preparations+of+rat+mesenteric+small+arteries.">Noradrenaline-induced depolarization is smaller in isobaric compared to isometric preparations of rat mesenteric small arteries.</a> Pflugers Archiv-European Journal of Physiology. 431, 794-796 (1996).</li><li>Khurana, S., Raina, H., Pappas, V., Raufman, J. P., Pallone, T. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+myogenic+properties+of+the+spontaneously+hypertensive+rat.">Arterial myogenic properties of the spontaneously hypertensive rat.</a> Exp Physiol. 87, 527-534 (2002).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Raina, H., Zacharia, J., Li, M., Wier, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+by+Ca2+/calmodulin+of+an+exogenous+myosin+light+chain+kinase+in+mouse+arteries.">Activation by Ca2+/calmodulin of an exogenous myosin light chain kinase in mouse arteries.</a> J Physiol. 587, 2599-2612 (2009).</li><li>Fenger-Gron, J., Mulvany, M. J., Christensen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+blood+pressure+profile+of+conscious,+freely+moving+rats.">Mesenteric blood pressure profile of conscious, freely moving rats.</a> J Physiol. 488 (Pt 3), 753-760 (1995).</li><li>Davis, M. J., Hill, M. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+ischemia+impairs+middle+cerebral+artery+myogenic+responses+in+the+pregnant+rat.">Placental ischemia impairs middle cerebral artery myogenic responses in the pregnant rat.</a> Hypertension. 58, 1126-1131 (2011).</li><li>Bagi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+2+diabetic+mice+have+increased+arteriolar+tone+and+blood+pressure:+enhanced+release+of+COX-2-derived+constrictor+prostaglandins.">Type 2 diabetic mice have increased arteriolar tone and blood pressure: enhanced release of COX-2-derived constrictor prostaglandins.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25, 1610-1616 (2005).</li></ol>

著者らは、金銭の競合を持っていません。

重要なステップ、トラブルシューティングおよび修正典型的な等圧容器の準備では、動脈が温かい（37℃）、PSSで灌流二枚のガラスの間にカニューレ70 mmHgで加圧されています。 30〜45分後、動脈は20〜30分で安定する直径の自然減少によって特徴づけられる、MTを開発します。様々な血管床からの抵抗動脈は変数MTを開発します。 cremastric動脈がPDのMT〜40％を達成し得るが、例...

小さ ​​な抵抗動脈はSVRの主要な決定であり、多くの疾患1,2の病態生理に重要な役割を果たしています。例えば糖尿病3、妊娠4、虚血再灌流5、肥満や高血圧の6,7等の条件は頻繁に変更された微小血管機能に関連しています。血管筋運動記録法は、種々の疾患における微小血管機能の変化に重要な洞察を提供するだけでなく、治療標的を同定し、血管作用性化合物の有効性を評価するのに役立つことができるだけでなく。血管機能は、等角または同重体血管条件8の下で分離された小動脈を用いて研究されています。等尺性筋運動記録法の詳細な説明は、他の箇所9が設けられています。しかし同重体準備10-12対アイソメトリックから得られたデータに違いがあります。加圧された動脈の製剤は、近生理学的条件下で微小血管機能の研究を可能にするので、得られた知見は、血管床8,13 の in vivoでの挙動とのより良い相関させることができます。 1902年にベイリスは、最初の血管の直径14に経壁圧の効果を説明しました。彼は圧力の減少は血管拡張が続いたウサギ、犬や猫の様々な血管床からの小さな抵抗動脈で観察され、圧力の増加は、血管収縮が続きました。この現象は、筋原性反応として知られています。ベイリスとその後の研究者は、等圧条件で小さな抵抗動脈がMT 15,16として知られている持続的な収縮を開発することを観察しました。筋原性応答及びMTの両方が、圧力筋運動記録法（PM）技術を用いて評価することができます。 PMは小動脈、静脈および他の血管の血管作用を決定するために主に使用されています。名前が示すように - - 血管径、PMに血管作用化合物の効果を評価することに加えて、血管内の圧力媒介CHを評価するために使用され血管径にザンジュ。過去数十年にわたりビデオ顕微鏡やガラスピペット引いを強化コンピュータソフトウェア、に進み、PM実行しやすくなりました。しかし、小血管の生存可能な、完全なセグメントの解剖は、退屈な、時には困難なままです。ここでは、ラットから単離された小腸間膜抵抗動脈における筋原性応答を研究するための詳細なプロトコルの概要を説明します。

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Chemical</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3784</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5162</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5881</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>13451</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 1.</td>
		 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>
 <table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Physiological salt solution (1000 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.365 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>6.545 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.296 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.163 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>2.072 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>2.184 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>2.383 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>998 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ca2+ free physiological salt solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.036 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>0.645 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.029 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>0.207 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>0.218 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>0.238 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EGTA </td>
			<td>0.39</td>
			<td>0.015 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside </td>
			<td>0.1</td>
			<td>0.0026 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>100 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution, stock (500 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>145</td>
			<td>21.18 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.875 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.739 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>2</td>
			<td>1.049 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0.02</td>
			<td>0.019 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>500 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Working dissection solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution stock</td>
			<td>20 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.091 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>5</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>2</td>
			<td>0.022 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>0.2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>79.8 ml</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>
 </td>
	 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>Table 2. Composition of Experimetnal solutions</td>
	 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CCD Monochrome Camera</td>
			<td>The imaging Source</td>
			<td>DMK 21AU04</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Single inline solution heater</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0102</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thermistor</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0108</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dual automatic temperature controller</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>TC-344B</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments </td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fluorescence System Interface</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>model FSI-700</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Forceps and scissors </td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ion Wizard-Core and Analysis</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>Ion Wizard 6.0</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Laboratory tubing</td>
			<td>Silastic </td>
			<td>508-005</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Male Sprague Dawley rat</td>
			<td>Harlan Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Master flex console drive</td>
			<td>Cole-parmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Milli-Q Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ZD5211584</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ophthalmic monofilament nylon suture </td>
			<td>Ethicon </td>
			<td>9007G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Photometry and Dimensioning Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE31</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>PS-200</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Instruments Inc</td>
			<td>SMZ660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vessel Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>CH-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection dish</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-90-S</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW120-6</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51550</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3.</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>

assessing myogenic response and vasoactivity in resistance mesenteric arteries using pressure myography

小さな抵抗動脈が収縮し、増減腔内圧力に応じてそれぞれ拡張します。筋原性応答として知られるこの現象は、局所の血流の重要な調節因子です。等圧の条件では、小さな抵抗動脈は全身血管抵抗（SVR）の主要な決定要因である筋原トーン（MT）として知られている持続的な収縮を、開発しています。そのため、小さな抵抗動脈のex vivoで加圧された製剤は、近生理学的状態で微小血管の機能を研究するための主要なツールです。これを達成するために、小さな抵抗動脈（直径〜260ミクロン）の新たに単離された無傷のセグメントは、二つの小さなガラスカニューレに取り付けられ、加圧されます。これらの動脈の製剤は、 生体内の特性とリアルタイムで血管緊張の許可評価にほとんどを保持しています。ここでは、ラットからの加小さな抵抗腸間膜動脈における血管作用を評価するための詳細なプロトコルを提供します。これらの動脈を開発します持続的な血管収縮 - 最大直径の約25％ - 70 mmHgで加圧さ。これらの調製物は、動脈内、動脈圧および血管作用との関係について治験化合物の効果を研究し、種々の疾患の動物モデルにおける微小血管機能の変化を決定することができます。

典型的な圧力ミオグラフセットアップの概略図を図1に示されている。容器の両端をガラスマイクロピペットを用いてカニューレを挿入し、両側の縫合糸で固定されています。チューブとオープン活栓を介して、1カニューレはサーボ制御された圧力調整器に接続されています。他のカニューレは閉鎖コックに接続されています。チャンバーは、PSSで灌流し、血管径の変化はCCDカメ...

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Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

圧力筋運動記録法は、加圧されたときに、持続収縮を開発する小動脈の血管作用を評価するために使用されます。この原稿は、ラット、血管作用と血管径の管腔内圧力の影響から小腸間膜動脈の単離されたセグメントに評価するための詳細なプロトコルを提供します。

圧力筋運動記録法を用いた抵抗腸間膜動脈における筋原性応答および血管作用を評価します

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

assessing-myogenic-response-vasoactivity-resistance-mesenteric

Research

JoVE Journal

Medicine

16.6K ビュー.  Georgia Regents University. 圧力筋運動記録法は、加圧されたときに、持続収縮を開発する小動脈の血管作用を評価するために使用されます。この原稿は、ラット、血管作用と血管径の管腔内圧力の影響から小腸間膜動脈の単離されたセグメントに評価するための詳細なプロトコルを提供します。 

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Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

自動ワイヤの筋運動記録法を用いた腸間膜動脈の収縮と弛緩の研究

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

医学

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

光ファイバ圧力トランスデューサを使用したラットの硬膜外頭蓋内圧測定

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

バイオアッセイとしてウシ腸間膜動脈と静脈の切片を分離して使用すると、小腸で血管作用をテストするために

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

マウス収縮圧力を測定するために子宮内テレメトリ<em&gt;インビボ</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale behind this technique is the direct observation of the mechanical response of the TM to acute IOP elevation. Prior to scanning, IOP is measured at baseline and during IOP elevation. The limbus is scanned by spectral-domain optical coherence tomography at baseline and during IOP elevation (ophthalmodynamometer (ODM) applied at 30 g force). Scans are processed to enhance visualization of the aqueous humor outflow pathway using ImageJ. Vascular landmarks are used to identify corresponding locations in baseline and IOP elevation scan volumes. Schlemm canal (SC) cross-sectional area (SC-CSA) and SC length from anterior to posterior along its long axis are measured manually at 10 locations within a 1 mm segment of SC. Mean inner to outer wall distance (short axis length) is calculated as the area of SC divided by its long axis length. To examine the contribution of adjacent tissues to the effect IOP elevations, measurements are repeated without and with smooth muscle relaxation with instillation of tropicamide. TM migration into SC is resisted by TM stiffness, but is enhanced by the support of its attachment to adjacent smooth muscle within the ciliary body. This technique is the first to measure the living human TM response to pressure elevation in situ under physiological conditions within the human eye.

Trabecular meshwork (TM) migration into Schlemm&#8217;s canal space can be induced by acute pressure elevation by ophthalmodynamometer, and observed by spectral domain optical coherence tomography. The goal of this method is to quantify the morphometric response of the living outflow tract to acute pressure elevation in living tissues in situ.

生きている人間の目で圧力上昇を小柱網の対応

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant CFTR channel in subjects with cystic fibrosis (CF). Identification of subjects that may benefit from these drugs is challenging because of the extensive heterogeneity of CFTR mutations, as well as other unknown factors that contribute to individual drug efficacy. Here, we describe a simple and relatively rapid assay for measuring individual CFTR function and response to CFTR modulators in vitro. Three dimensional (3D) epithelial organoids are grown from rectal biopsies in standard organoid medium. Once established, the organoids can be bio-banked for future analysis. For the assay, 30-80 organoids are seeded in 96-well plates in basement membrane matrix and are then exposed to drugs. One day later, the organoids are stained with calcein green, and forskolin-induced swelling is monitored by confocal live cell microscopy at 37 &#176;C. Forskolin-induced swelling is fully CFTR-dependent and is sufficiently sensitive and precise to allow for discrimination between the drug responses of individuals with different and even identical CFTR mutations. In vitro swell responses correlate with the clinical response to therapy. This assay provides a cost-effective approach for the identification of drug-responsive individuals, independent of their CFTR mutations. It may also be instrumental in the development of future CFTR modulators.

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

This protocol describes an assay for measuring CFTR function and CFTR modulator responses in cultured tissue from subjects with cystic fibrosis (CF). Biopsy-derived intestinal organoids swell in a cAMP-driven fashion, a response that is defective (or strongly reduced) in CF organoids and can be restored by exposure to CFTR modulators.

フォルスコリン誘発性腸オルガノイドに腫れ：<em&gt;インビトロ</em&gt;アッセイ嚢胞性線維症患者における薬物反応を評価するための

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

抵抗血管の細胞培養モデル

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other vessels), and describes techniques for evaluating tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry (LDF) and microvessel density utilizing fluorescently labeled Griffonia simplicifolia (GS1) lectin. Current methods for studying isolated resistance arteries at transmural pressures encountered in vivo and in the absence of parenchymal cell influences provide a critical link between in vivo studies and information gained from molecular reductionist approaches that provide limited insight into integrative responses at the whole animal level. LDF and techniques to selectively identify arterioles and capillaries with fluorescently-labeled GS1 lectin provide practical solutions to enable investigators to extend the knowledge gained from studies of isolated resistance arteries. This paper describes the application of these techniques to gain fundamental knowledge of vascular physiology and pathology in the rat as a general experimental model, and in a variety of specialized genetically engineered &#34;designer&#34; rat strains that can provide important insight into the influence of specific genes on important vascular phenotypes. Utilizing these valuable experimental approaches in rat strains developed by selective breeding strategies and new technologies for producing gene knockout models in the rat, will expand the rigor of scientific premises developed in knockout mouse models and extend that knowledge to a more relevant animal model, with a well understood physiological background and suitability for physiological studies because of its larger size.

This manuscript describes in vitro video microscopy protocols for evaluating vascular function in rat cerebral resistance arteries. The manuscript also describes techniques for evaluating microvessel density with fluorescently labeled lectin and tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry.

分離抵抗性ラットの動脈のビデオ顕微鏡を用いた血管制御機構の評価

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Cardiac Response to &#946;-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of specific treatments on the heart. Due to the feasibility of genetic manipulations the mouse has become the most common mammalian animal model to study cardiac function and to search for new potential therapeutic targets. Here we describe a protocol to determine cardiac function&#160;in vivo using pressure-volume loop measurements and analysis during basal conditions and under &#946;-adrenergic stimulation by intravenous infusion of increasing concentrations of isoproterenol. We provide a refined protocol including ventilation support taking into account the positive end-expiratory pressure to ameliorate negative effects during open-chest measurements, and potent analgesia (Buprenorphine) to avoid uncontrollable myocardial stress evoked by pain during the procedure. All together the detailed description of the procedure and discussion about possible pitfalls enables highly standardized and reproducible pressure-volume loop analysis, reducing the exclusion of animals from the experimental cohort by preventing possible methodological bias.

Cardiac Response to &amp;#946;-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis

Here we describe a cardiac pressure-volume loop analysis under increasing doses of intravenously infused isoproterenol to determine the intrinsic cardiac function and the &#946;-adrenergic reserve in mice. We use a modified open-chest approach for the pressure-volume loop measurements, in which we include ventilation with positive end-expiratory pressure.

圧力量ループ解析によるβ-アドレナリン刺激に対する心臓応答

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of ...