この作品は、NIHの助成金AI071815（CEH）とロードマップナノメディシン開発センター賞PN2EY016586（MLD）によってサポートされていました。

<ol>
	<li>Bastiani, L., Laal, S., Kim, M., Zolla-Pazner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+cell-dependent+alterations+in+envelope+components+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+virions.">Host cell-dependent alterations in envelope components of human immunodeficiency virus type 1 virions.</a> J. Virol. 71, 3444-3450 (1997).</li><li>Dimitrov, D. S., Willey, R. L., Sato, H., Chang, L. J., Blumenthal, R., Martin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection+kinetics.">Quantitation of human immunodeficiency virus type 1 infection kinetics.</a> J. Virol. 67, 2182-2190 (1993).</li><li>Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesive+Bond+Dynamics+in+Contacts+between+T+Lymphocytes+and+Glass-supported+Planar+Bilayers+Reconstituted+with+the+Immunoglobulin-related+Adhesion+Molecule+CD58.">Adhesive Bond Dynamics in Contacts between T Lymphocytes and Glass-supported Planar Bilayers Reconstituted with the Immunoglobulin-related Adhesion Molecule CD58.</a> J. Biol. Chem. 272, 15782-15788 (1997).</li><li>Fortin, J. F., Cantin, R., Lamontagne, G., Tremblay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+ICAM-1+glycoproteins+incorporated+on+human+immunodeficiency+virus+type+1+are+biologically+active+and+enhance+viral+infectivity.">Host-derived ICAM-1 glycoproteins incorporated on human immunodeficiency virus type 1 are biologically active and enhance viral infectivity.</a> J. Virol. 71, 3588-3596 (1997).</li><li>Frank, I., Stoiber, H., Godar, S., Stockinger, H., Steindl, F., Katinger, H. W., Dierich, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+host+cell-surface-derived+molecules+by+HIV-1.">Acquisition of host cell-surface-derived molecules by HIV-1.</a> Aids. 10, 1611-1620 (1996).</li><li>Hioe, C. E., Bastiani, L., Hildreth, J. E., Zolla-Pazner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cellular+adhesion+molecules+in+HIV+type+1+infection+and+their+impact+on+virus+neutralization.">Role of cellular adhesion molecules in HIV type 1 infection and their impact on virus neutralization.</a> AIDS Res. Hum. Retroviruses. 14, S247-S254 (1998).</li><li>Hioe, C. E., Chien, P. C., Lu, C., Springer, T. A., Wang, X. H., Bandres, J., Tuen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LFA-1+expression+on+target+cells+promotes+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection+and+transmission.">LFA-1 expression on target cells promotes human immunodeficiency virus type 1 infection and transmission.</a> J. Virol. 75, 1077-1082 (2001).</li><li>Jolly, C., Kashefi, K., Hollinshead, M., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+cell+to+cell+transfer+across+an+Env-induced,+actin-dependent+synapse.">HIV-1 cell to cell transfer across an Env-induced, actin-dependent synapse.</a> J. Exp. Med. 199, 283-293 (2004).</li><li>Jolly, C., Mitar, I., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+an+intact+T-cell+actin+and+tubulin+cytoskeleton+for+efficient+assembly+and+spread+of+human+immunodeficiency+virus+type+1.">Requirement for an intact T-cell actin and tubulin cytoskeleton for efficient assembly and spread of human immunodeficiency virus type 1.</a> J. Virol. 81, 5547-5560 (2007).</li><li>McDonald, D., Wu, L., Bohks, S. M., KewalRamani, V. N., Unutmaz, D., Hope, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+HIV+and+its+receptors+to+dendritic+cell-T+cell+junctions.">Recruitment of HIV and its receptors to dendritic cell-T cell junctions.</a> Science. 300, 1295-1297 (2003).</li><li>Pearce-Pratt, R., Malamud, D., Phillips, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+cytoskeleton+in+cell-to-cell+transmission+of+human+immunodeficiency+virus.">Role of the cytoskeleton in cell-to-cell transmission of human immunodeficiency virus.</a> J. Virol. , 682898-682905 (1994).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Rizzuto, C. D., Sodroski, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+virion+ICAM-1+to+human+immunodeficiency+virus+infectivity+and+sensitivity+to+neutralization.">Contribution of virion ICAM-1 to human immunodeficiency virus infectivity and sensitivity to neutralization.</a> J. Virol. 71, 4847-4851 (1997).</li><li>Vardhana, S., Dustin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supported+Planar+Bilayers+for+the+Formation+of+Study+of+Immunological+Synapses+and+Kinapse.">Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse.</a> J. Vis. Exp. (19), e947-e947 (2008).</li><li>Vasiliver-Shamis, G., Cho, M. W., Hioe, C. E., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+gp120-induced+partial+T-cell+receptor+signaling+creates+an+F-actin-depleted+zone+in+the+virological+synapse.">Human immunodeficiency virus type 1 envelope gp120-induced partial T-cell receptor signaling creates an F-actin-depleted zone in the virological synapse.</a> J. Virol. 83, 11341-11355 (2009).</li><li>Vasiliver-Shamis, G., Tuen, M., Wu, T., Starr, T., Cameron, T., Thomson, R., Kaur, G., Liu, J., Visciano, M., Li, H., Kumar, R., Ansari, R., Han, D., Cho, M., Dustin, M. L., Hioe, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+gp120+induces+a+stop+signal+and+virological+synapse+formation+in+noninfected+CD4++T+cells.">Human immunodeficiency virus type 1 envelope gp120 induces a stop signal and virological synapse formation in noninfected CD4+ T cells.</a> J. Virol. 82, 9445-9457 (2008).</li><li>Zhu, P., Liu, J., Bess, J., Chertova, E., Lifson, J., Grise, H., Ofek, G., Taylor, K., Roux, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+three-dimensional+structure+of+AIDS+virus+envelope+spikes.">Distribution and three-dimensional structure of AIDS virus envelope spikes.</a> Nature. 441, 847-852 (2006).</li></ol>

著者らは、利害の競合を宣言しません。

以前の研究では、細胞 - 細胞複合体システムの可視化VSを持っています。ただし、これらの研究は、シナプスでの超分子構造を可視化するために十分な高解像度の画像を提供していませんでした。私たちの研究室では、ウイルスエンベロープgp120と細胞接着分子ICAM-1を発現する感染細胞の表面を表現するためにガラスでサポートされている平面二重層システムを利用した。高い信号対雑音比を有する二重層の表面100から200 nm以内に蛍光シグナルを検出した全反射顕微鏡と組み合わせて、我々は、VSでのICAM-1からgp120の分子の分離を検出することができました。また、標準的な免疫染色法は、二重層システムに適用することができ、VS 15でgp120の非接触領域に、Lckがアクティブではなく、フュン島の具体的な採用を検出し、定量化するためにここで使用されていました。したがって、平面二重層は、TIRFミクロ2次元平面内のシナプスインタフェースの高分解能イメージングのための実験システムを提供していますSCOPYと同様に、ワイドフィールドまたは共焦点照明方法。ただし、システムはまた、面外曲げ、リガンドの移動を調整するように制限があり、生体膜の変動が平面二重層によって再現されていません。さらに、これは試験管内システムであり、したがって、そのような分子運動性や細胞運動を調節する感染細胞と細胞骨格の機械上に存在するであろう他の膜分子の不足など他の制限があります。また、このようなgp120の三量体対モノマーとして分子のダイナミクスおよびディストリビューションは、二重層で生理学的に表現することはできません。それにもかかわらず、さらに、これらの制限で、このシステムは、ウイルス、細胞または細胞間相互作用を研究するために依然として非常に貴重であり、これらのメソッドが認識できるではない超分子組織を検出するために高解像度の画像を探している研究者に有用なガイドとして役立つことができる従来の細胞間共役系がある。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>自分のタグ付きのHIVのgp120 </td><td>チョー先生からの贈り物</td><td></td><td> DH12 </td></tr><tr><td>自分のタグ付きのHIVのgp120 </td><td>免疫技術</td><td></td><td>様々なX4またはR5熱帯</td></tr><tr><td> HSA </td><td>ウィリアムズ医療カンパニー</td><td> 521302 </td><td>ヒト血清アルブミン25パーセント</td></tr><tr><td>アミコンウルトラ遠心フィルター</td><td>ミリポア</td><td> UFC803024 </td><td>ウルトラ-30K </td></tr><tr><td>内在LCK </td><td>細胞シグナリング</td><td> 2787 </td><td></td></tr><tr><td>ウサギpAbのP-Lckは</td><td>サンタクルーズバイオテクノロジー株式会社</td><td> SC-101728 </td><td>チロシン394 </td></tr><tr><td>フュ内在</td><td>ミリポア</td><td> 04から353 </td><td></td></tr><tr><td>のAlexa Fluor 568 2°、アブ</td><td>分子プローブ</td><td> A11034 </td><td>ヤギ抗ウサギIgG（H + L） </td></tr><tr><td>のAlexa Fluor®488 </td><td>分子プローブ</td><td> -20000 </td><td>カルボン酸スクシンイミジルエステル</td></tr><tr><td> FCS2商工会議所</td><td> Bioptechs </td><td> 060319-2-03 </td><td></td></tr><tr><td>スライドをMicroaqueduct </td><td> Bioptechs </td><td> 130119から5 </td><td></td></tr><tr><td> 30ミリメートルラウンドw /穴</td><td> Bioptechs </td><td> 1907-08-750 </td><td>厚さ0.75ミリメートル</td></tr><tr><td>長方形ガスケット</td><td> Bioptechs </td><td> 1907-1422-250 </td><td> 14x24 0.25ミリメートルの厚さ</td></tr><tr><td>タイゴンチューブ</td><td> Bioptechs </td><td> 20202275 </td><td> 1月16日 &quot;（25フィート） </td></tr><tr><td>三方活栓</td><td> BioRad社</td><td> 7328103 </td><td></td></tr><tr><td>双方向のコック</td><td> BioRad社</td><td> 7328102 </td><td></td></tr><tr><td>付箋スライドI 0.2ルアー</td><td> Ibidi </td><td> 80168 </td><td></td></tr><tr><td>メガネをカバー</td><td> Ibidi </td><td> 10812 </td><td></td></tr><tr><td> 1ミリリットル注射器</td><td> BD </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> DOGS-NTA </td><td>アヴァンティ極性脂質</td><td> 790404C </td><td></td></tr><tr><td> DOPC </td><td>アヴァンティ極性脂質</td><td> 850375C </td><td></td></tr><tr><td>ガラスカバースリップ</td><td> Bioptechs </td><td> 40-1313-0319 </td><td> 40ミリメートル</td></tr><tr><td>全反射顕微鏡</td><td>ニコン</td><td></td><td></td></tr><tr><td> ImageJは</td><td>国立衛生研究所</td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/">http://rsbweb.nih.gov/ij/~~V</a> </td></tr></tbody></table>

imaging of hiv-1 envelope-induced virological synapse and signaling on synthetic lipid bilayers

ヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）感染症は、セルの伝送2,10,11のセルを介して最も効率的に発生します。 CD4との間のセル転送には、この細胞+ T細胞は、CD4と感染細胞のHIV-1エンベロープgp120の婚約により形成されるF-アクチン依存性の細胞間接合でウイルス学的シナプス（VS）の形成を伴い、標的細胞8のケモカイン受容体（CKR）、CCR5またはCXCR4。彼らはウイルスに感染したドナー細胞の表面上に存在するとしてgp120およびその受容体に加えて、特に他の膜タンパク質、接着分​​子LFA-1とそのリガンド、ICAMファミリーは、VSの形成とウイルス感染で大きな役割を果たすと標的細胞と同様に、HIV-1ビリオン1,4,5,6,7,13の封筒に。 VSの形成はまた、その受容体のgp120係の結果として導入される細胞内シグナル伝達事象が付属しています。実際、我々は最近、CD4を示しています&lt;gp120を持つ&gt; + T細胞の相互作用がLckが、CD3ζ、ZAP70、LAT、SLP-76、ITKやPLCγ15を含むシグナロソームTCRに関連付けられているシグナリング分子の募集及びリン酸化を誘導する渉。 本稿では、VSの形成時に行われている超分子配列と膜近位シグナル伝達事象を可視化する手法を提案する。我々は、ウイルスエンベロープgp120と細胞接着分子ICAM-1が付いたHIV感染細胞の表面を表現するための還元のモデルとしてのガラスでサポートされている平面二層システムを利用しています。プロトコルは、相互作用する細胞に細胞内シグナル伝達分子を検出するために、HIV-1 gp120の誘起VSアセンブリとフローセルのi）二層の準備と、アセンブリを含む信号の活性化イベント、ⅱ）細胞と免疫蛍光染色の注入を監視するための一般的な手順について説明します。双方向層、IIIのHIV-1 gp120およびICAM-1）全反射顕微鏡による画像取得、NDⅳ）データ分析。このシステムは、これらのサブドメインへの採用、特定のシグナル伝達分子と一緒にVSの個々の分子成分の異なるクラスターの検出を可能にするような従来の細胞と細胞のシステムで達成、それ以上VSインターフェイスの高解像度画像を生成します。

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Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

この資料では、全内部反射蛍光（全反射）顕微鏡による平面脂質二重層をサポートしてガラス基板上にHIV-1エンベロープによって誘導されるウイルス学的シナプスの形成を可視化する方法について説明します。方法はまた、HIV-1エンベロープ誘発性ウイルス学的シナプス形成時に発生するシグナル伝達分子の活性化および再配布を検出する免疫​​蛍光染色と組み合わせることができます。

合成脂質二重膜上でHIV-1エンベロープ誘発性ウイルス学的シナプスとシグナリングのイメージング

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

imaging-hiv-1-envelope-induced-virological-synapse-signaling-on

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JoVE Journal

Immunology and Infection

12.1K ビュー.  New York University Langone School of Medicine. この資料では、全内部反射蛍光（全反射）顕微鏡による平面脂質二重層をサポートしてガラス基板上にHIV-1エンベロープによって誘導されるウイルス学的シナプスの形成を可視化する方法について説明します。方法はまた、HIV-1エンベロープ誘発性ウイルス学的シナプス形成時に発生するシグナル伝達分子の活性化および再配布を検出する免疫​​蛍光染?...