이 작품은 NIH 교부금 AI071815 (CEH) 및 로드맵의 Nanomedicine 개발 센터 수상 PN2EY016586 (MLD)에 의해 지원되었다.

<ol>
	<li>Bastiani, L., Laal, S., Kim, M., Zolla-Pazner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+cell-dependent+alterations+in+envelope+components+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+virions.">Host cell-dependent alterations in envelope components of human immunodeficiency virus type 1 virions.</a> J. Virol. 71, 3444-3450 (1997).</li><li>Dimitrov, D. S., Willey, R. L., Sato, H., Chang, L. J., Blumenthal, R., Martin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection+kinetics.">Quantitation of human immunodeficiency virus type 1 infection kinetics.</a> J. Virol. 67, 2182-2190 (1993).</li><li>Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesive+Bond+Dynamics+in+Contacts+between+T+Lymphocytes+and+Glass-supported+Planar+Bilayers+Reconstituted+with+the+Immunoglobulin-related+Adhesion+Molecule+CD58.">Adhesive Bond Dynamics in Contacts between T Lymphocytes and Glass-supported Planar Bilayers Reconstituted with the Immunoglobulin-related Adhesion Molecule CD58.</a> J. Biol. Chem. 272, 15782-15788 (1997).</li><li>Fortin, J. F., Cantin, R., Lamontagne, G., Tremblay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+ICAM-1+glycoproteins+incorporated+on+human+immunodeficiency+virus+type+1+are+biologically+active+and+enhance+viral+infectivity.">Host-derived ICAM-1 glycoproteins incorporated on human immunodeficiency virus type 1 are biologically active and enhance viral infectivity.</a> J. Virol. 71, 3588-3596 (1997).</li><li>Frank, I., Stoiber, H., Godar, S., Stockinger, H., Steindl, F., Katinger, H. W., Dierich, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+host+cell-surface-derived+molecules+by+HIV-1.">Acquisition of host cell-surface-derived molecules by HIV-1.</a> Aids. 10, 1611-1620 (1996).</li><li>Hioe, C. E., Bastiani, L., Hildreth, J. E., Zolla-Pazner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cellular+adhesion+molecules+in+HIV+type+1+infection+and+their+impact+on+virus+neutralization.">Role of cellular adhesion molecules in HIV type 1 infection and their impact on virus neutralization.</a> AIDS Res. Hum. Retroviruses. 14, S247-S254 (1998).</li><li>Hioe, C. E., Chien, P. C., Lu, C., Springer, T. A., Wang, X. H., Bandres, J., Tuen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LFA-1+expression+on+target+cells+promotes+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection+and+transmission.">LFA-1 expression on target cells promotes human immunodeficiency virus type 1 infection and transmission.</a> J. Virol. 75, 1077-1082 (2001).</li><li>Jolly, C., Kashefi, K., Hollinshead, M., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+cell+to+cell+transfer+across+an+Env-induced,+actin-dependent+synapse.">HIV-1 cell to cell transfer across an Env-induced, actin-dependent synapse.</a> J. Exp. Med. 199, 283-293 (2004).</li><li>Jolly, C., Mitar, I., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+an+intact+T-cell+actin+and+tubulin+cytoskeleton+for+efficient+assembly+and+spread+of+human+immunodeficiency+virus+type+1.">Requirement for an intact T-cell actin and tubulin cytoskeleton for efficient assembly and spread of human immunodeficiency virus type 1.</a> J. Virol. 81, 5547-5560 (2007).</li><li>McDonald, D., Wu, L., Bohks, S. M., KewalRamani, V. N., Unutmaz, D., Hope, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+HIV+and+its+receptors+to+dendritic+cell-T+cell+junctions.">Recruitment of HIV and its receptors to dendritic cell-T cell junctions.</a> Science. 300, 1295-1297 (2003).</li><li>Pearce-Pratt, R., Malamud, D., Phillips, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+cytoskeleton+in+cell-to-cell+transmission+of+human+immunodeficiency+virus.">Role of the cytoskeleton in cell-to-cell transmission of human immunodeficiency virus.</a> J. Virol. , 682898-682905 (1994).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Rizzuto, C. D., Sodroski, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+virion+ICAM-1+to+human+immunodeficiency+virus+infectivity+and+sensitivity+to+neutralization.">Contribution of virion ICAM-1 to human immunodeficiency virus infectivity and sensitivity to neutralization.</a> J. Virol. 71, 4847-4851 (1997).</li><li>Vardhana, S., Dustin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supported+Planar+Bilayers+for+the+Formation+of+Study+of+Immunological+Synapses+and+Kinapse.">Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse.</a> J. Vis. Exp. (19), e947-e947 (2008).</li><li>Vasiliver-Shamis, G., Cho, M. W., Hioe, C. E., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+gp120-induced+partial+T-cell+receptor+signaling+creates+an+F-actin-depleted+zone+in+the+virological+synapse.">Human immunodeficiency virus type 1 envelope gp120-induced partial T-cell receptor signaling creates an F-actin-depleted zone in the virological synapse.</a> J. Virol. 83, 11341-11355 (2009).</li><li>Vasiliver-Shamis, G., Tuen, M., Wu, T., Starr, T., Cameron, T., Thomson, R., Kaur, G., Liu, J., Visciano, M., Li, H., Kumar, R., Ansari, R., Han, D., Cho, M., Dustin, M. L., Hioe, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+gp120+induces+a+stop+signal+and+virological+synapse+formation+in+noninfected+CD4++T+cells.">Human immunodeficiency virus type 1 envelope gp120 induces a stop signal and virological synapse formation in noninfected CD4+ T cells.</a> J. Virol. 82, 9445-9457 (2008).</li><li>Zhu, P., Liu, J., Bess, J., Chertova, E., Lifson, J., Grise, H., Ofek, G., Taylor, K., Roux, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+three-dimensional+structure+of+AIDS+virus+envelope+spikes.">Distribution and three-dimensional structure of AIDS virus envelope spikes.</a> Nature. 441, 847-852 (2006).</li></ol>

저자는 이익의 갈등을 선언 없습니다.

이전 연구는 세포 - 세포 켤레축 시스템의 시각 VS을 가지고 있지만 이러한 연구는 시냅스에서 supramolecular 구조를 시각화하는만큼 충분히 높은 해상도의 이미지를 제공하지 않았다. 우리 실험실에서는 바이러스 봉투 gp120과 세포 접착 분자 ICAM-1을 표현 감염된 세포의 표면을 표현하기 위해 유리를 지원 평면 이중층 시스템을 활용. 높은 신호 대 노이즈 비율과 이중층 표면 100-200 nm의 안에 형광 신호를 감지 TIRF 현미경,와 함께, 우리는 VS에서 ICAM-1에서 gp120의 supramolecular 분리를 감지할 수 있었다. VS 15 gp120 - 연락처 영역으로, 퓐 또한, 표준 immunostaining 방법은 이중층 시스템에 적용할 수 있으며 Lck 활성의 구체적인 채용을 감지하고 계량 여기에 사용되었지만, 아닙니다. 따라서 평면 이중층은 TIRF 마이크로에 의한 2 차원 평면에서의 시냅스 인터페이스의 고해상도 이미징을위한 실험 시스템을 제공합니다scopy 물론 넓은 필드 또는 공촛점 조명 방법 등. 그러나 시스템은 또한 밖에서 비행기 벤딩, 리간드 이동성을 조정으로 한계를 가지고 있으며, 생물 학적 세포막의 변동은 평면 bilayers으로 복제되지 않습니다. 또한 이것은 인 - 체외 시스템이므로 이러한 분자 이동성과 휴대 운동성을 조절 감염된 세포와 cytoskeleton 기계에 존재 것입 다른 멤브레인 분자의 부족 등 다른 제한 사항을 가지고 있습니다. 또, trimers 대 gp120의 단량체로서 분자의 역학 및 배포는 이중층에 생리학적으로 표시되지 않을 수 있습니다. 그럼에도 불구하고보고 알 수있는 아니다 그것은 심지어 이러한 제한 사항으로,이 시스템은 바이러스 셀 또는 셀 - 세포 상호 작용을 공부에 대해 여전히 매우 유용하며, 이러한 방법 supramolecular 조직을 감지하는 고해상도 이미지를 추구하고 연구자에게 유용한 가이드가 될 수있다 종래의 셀 - 셀 켤레축 시스템 인치

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 그의 태그가 HIV gp120 </td><td> 닥터 조의 선물 </td><td></td><td> DH12 </td></tr><tr><td> 그의 태그가 HIV gp120 </td><td> 면역 기술 </td><td></td><td> 각종 X4 또는 R5 열대 </td></tr><tr><td> HSA </td><td> 윌리엄스 의료 회사 </td><td> 521,302 </td><td> 인간 혈청 알부민 25% </td></tr><tr><td> Amicon 울트라 원심 필터 </td><td> Millipore </td><td> UFC803024 </td><td> Ultracel-30K </td></tr><tr><td> 토끼 mAb Lck </td><td> 세포 시그널링 </td><td> 2787 </td><td></td></tr><tr><td> 래빗 PAB P-Lck </td><td> 산타 크루즈 생명 공학 주식 회사 </td><td> SC-101728 </td><td> 티르 394 </td></tr><tr><td> 퓐 래빗 mAb </td><td> Millipore </td><td> 04-353 </td><td></td></tr><tr><td> 알렉사 형석 568 2 °; AB </td><td> 분자 프로브 </td><td> A11034 </td><td> 염소 안티 - 토끼 IgG (H + L) </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 488 </td><td> 분자 프로브 </td><td> -20000 </td><td> 카르복실산 에스테르 succinimidyl </td></tr><tr><td> FCS2 상공 회의소 </td><td> Bioptechs </td><td> 060319-2-03 </td><td></td></tr><tr><td> 슬라이드 Microaqueduct </td><td> Bioptechs </td><td> 130119-5 </td><td></td></tr><tr><td> 30mm 라운드 W / 구멍 </td><td> Bioptechs </td><td> 1907-08-750 </td><td> 0.75mm 두께 </td></tr><tr><td> 직사각형 데려간 </td><td> Bioptechs </td><td> 1907-1422-250 </td><td> 14x24 0.25mm 두께 </td></tr><tr><td> Tygon 튜빙 </td><td> Bioptechs </td><td> 20202275 </td><td> 16분의 1 &quot;(25피트) </td></tr><tr><td> 세 방향 꼭지 </td><td> BioRad </td><td> 7,328,103 </td><td></td></tr><tr><td> 양방향 꼭지 </td><td> BioRad </td><td> 7,328,102 </td><td></td></tr><tr><td> 끈적 슬라이드 나 0.2 Luer </td><td> Ibidi </td><td> 80168 </td><td></td></tr><tr><td> 안경을 커버 </td><td> Ibidi </td><td> 10,812 </td><td></td></tr><tr><td> 1ml 주사기 </td><td> BD </td><td> 309,659 </td><td></td></tr><tr><td> 개들은-NTA </td><td> 아벤티 폴라 Lipids </td><td> 790404C </td><td></td></tr><tr><td> DOPC </td><td> 아벤티 폴라 Lipids </td><td> 850375C </td><td></td></tr><tr><td> 유리 coverslip </td><td> Bioptechs </td><td> 40-1313-0319 </td><td> 40mm </td></tr><tr><td> TIRF 현미경 </td><td> 니콘 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ImageJ </td><td> 건강의 국립 연구소 </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/">http://rsbweb.nih.gov/ij/~~V</a> </td></tr></tbody></table>

imaging of hiv-1 envelope-induced virological synapse and signaling on synthetic lipid bilayers

인간 면역 결핍 바이러스 1 형 (HIV-1) 감염 셀 전송 2,10,11으로 세포를 통해 가장 효율적으로 발생합니다. CD4 사이의 셀 전송 + T 세포이 세포는 CD4와 함께 감염된 세포에서 HIV-1 봉투 gp120의 참여에 따라 형성된 F-actin에 의존 세포 - 세포 접합니다 virological 시냅스 (VS)의 형성과 관련된 대상 세포 8 케모카인 수용체 (CKR) CCR5 또는 CXCR4. 그들이 바이러스에 감염된 기증자의 세포 표면에 존재로서 gp120에 추가 및 그 수용체, 특히 다른 멤브레인 단백질, 유착 분자 LFA-1과 그 리간드에서 ICAM 제품군은, VS 형성 및 바이러스 전달에 중요한 역할을 및 대상 세포뿐만 아니라 HIV-1 virions 1,4,5,6,7,13의 봉투에. VS 형성은 또한 수용체의 gp120-포용의 결과로 transduced되는 세포내 신호 전달 이벤트를 동반한다. 실제로, 우리는 최근 그 CD4를 보여주했습니다 &lt;&gt; gp120과 + T 세포의 상호 작용은 TCR의 Lck 포함한 signalosome, CD3ζ, ZAP70, LAT, SLP-76, Itk 및 PLCγ 15과 관련된 신호 전달 분자의 모집 및 인산화을 유도 저녁을 먹다. 이 문서에서는 supramolecular 배치와 VS 형성 동안 이야기되었던 멤브레인 - 근위 신호 이벤트를 시각화하는 방법을 제시한다. 우리는 바이러스 봉투 gp120과 세포 접착 분자 ICAM-1을 간직한 HIV에 감염된 세포의 표면을 표현하기 위해 reductionist 모델과 같은 유리를 지원 평면 이중 레이어 시스템을 활용합니다. 프로토콜은 상호 작용하는 세포에서 세포 내 신호 전달 분자를 감​​지하는 HIV-1 gp120 유발 VS 조립 및 플로우 셀에 I) 이중 레이어 준비와 어셈블리를 포함한 신호 활성화 이벤트, II) 세포 immunofluorescence 염색법의 주입 모니터링을위한 일반 절차를 설명 TIRF 현미경에 의한 HIV-1 이중 레이어의 gp120과 ICAM-1, 3) 이미지 수집과차 IV) 데이터 분석. 그것이 하위 도메인에 모집 특정 신호 분자와 함께 VS의 개별 분자 구성 요소의 고​​유한 클러스터의 검출을 허용으로이 시스템은 종래의 셀 - 셀 시스템을 구현할 그 외의 VS 인터페이스의 고해상도 이미지를 생성합니다.

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Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

이 문서는 총 내부 반사 형광 (TIRF) 현미경에 의한 유리를 지원 평면 bilayers에서 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성을 시각화하는 방법을 설명합니다. 메소드는 또한 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성시 발생하는 신호 전달 분자의 활성화 및 재배포를 탐지하기 immunofluorescence 염색법과 결합 할 수 있습니다.

의 이미징 HIV-1 봉투 유발 Virological 시냅스와 합성 지질 Bilayers에 신호

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

imaging-hiv-1-envelope-induced-virological-synapse-signaling-on

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Immunology and Infection

12.1K 조회수.  New York University Langone School of Medicine. 이 문서는 총 내부 반사 형광 (TIRF) 현미경에 의한 유리를 지원 평면 bilayers에서 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성을 시각화하는 방법을 설명합니다. 메소드는 또한 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성시 발생하는 신호 전달 분자의 활성화 및 재배포를 탐지하기 immunofluorescence 염색법과 결합 할 수 있습니다.