TKMcGは、カナダ胸部学会から学生の身分によってサポートされています。 レビューアの貢献すべての著者は原稿の構想に参加しました。また、TKMcGは、プロジェクトを開始した実験結果を収集、原稿の執筆とその批判的検討に貢献した。 ARは、収集、分析実験結果を、原稿を起草し、その批判的検討に貢献した。 LFは、実験結果を収集し、原稿の重要な見直しに貢献した。 TFSとJGMは、原稿の批判的検討に貢献した。

以下に説明する手順は、アニマルケア（CCAC）カナダ評議会のガイドラインに沿ってマギル大学動物実験委員会によって承認された。 1。準備手順<ol><li>ソリューション： <ol><li>メサコリン：50 mg / mlので原液を準備し、5をテストする濃度に基づいて段階希釈（1:1）を行う。溶液は5噴霧前に室温に到達させる。 </li><li>麻酔薬：さまざまなレジメンはマウスの種々の株（ 表1）の文献に報告されている注 ：レジメン1は、本プロトコルの下で使用されていました。 </li></ol></li><li>機器：現在のプロトコルはflexiWare 7ソフトウェアでサポートされている2つflexiVent世代のどちらにも適用されます。 研究の定義＆プランニング 、 実験Sessio：ソフトウェアの機能は、3つのモジュールの下にグループ化されnおよびレビュー＆レポーティング 。 <ol><li>システムの電源をオン（flexiVent FXのみ）および/ ​​またはソフトウェアを起動します。 </li><li>最初の実験セッションまたはそれ以前に、いつでも勉強構造を事前に定義するために研究の定義＆プランニングモジュールを開きます。 </li><li> 新しい研究でボタンを作成して、スタディを作成プロトコルの概要を説明し、検討するための実験グループと対象者を定義するには、ウィザードの指示に従ってクリックしてください。 </li><li> 実験セッションモジュールを開いて勉強し、テンプレートを選択するための起動シーケンスに従って実験·セッションを開始します。 </li><li>測定部位の対象を割り当て、その重量を確認。 </li><li>オペレーティングソフトウェアに記載されている手順に従うことにより、システムのキャリブレーションを続行します。あなたは、キャリブレーションのためにY-チューブに使用するカニューレ（ステップ1.3.3）を取り付けるために、1つの時点でプロンプトが表示されます。 </li><li> 重要なステップ。Repea取得した校正値が許容範囲外にある場合tは1.2.6のステップ。 （flexiVent FXや校正値のモジュール固有の許容範囲についてflexiWare 7のユーザマニュアルを参照してください）。 </li><li>キャンセルは、実験を開始する準備ができていない限り換気およびデータの記録を開始するように要求されます。これらは、後の時点で開始することができる。 </li></ol></li><li>被験者： <ol><li>麻酔薬の適切な用量（ 表1）を用いて被写体を麻酔。 </li><li>被写体が麻酔の手術レベルに達していることを確認します。被験者は、つま先のピンチに全く反応を示すべきではありませんし、その呼吸が規則的こじつけではないでなければなりません。 </li><li>気管切開を行い、気管カニューレを挿入。 <ol><li>その背中に動物を配置し、熱の源（ 例えば 、温度制御された加熱毛布やマウスから約45センチ過度の加熱を避けるために、位置60ワット電球とランプ）を提供します。 </li><li>クリーン番目アルコールを含む電子スロート面積を、皮膚切開を作り、そっと顎下腺、それをカバーする筋層を分離することにより気管を公開します。 </li><li>優しくマイクロ鉗子のペアを使用して気管を持ち上げ、その下に縫合糸を渡す。 </li><li>それを区画することなく、気管に小さな切開をする喉頭最寄りの軟骨の二つのリング間で切断。 </li><li>切開に以前に較正されたカニューレを挿入し、気管の内側に軽く約5リングの長さを、それを進める注 ：本実験は、1.2センチメートル長い金属18ゲージカニューレを用いて行った。 </li><li> 重要なステップは縫合糸を使用して所定の位置にカニューレを固定します。添付ファイルは、カニューレの周りに気密シールを形成すべきである。 </li></ol></li></ol></li></ol> 2。人工呼吸器<ol><li>人工呼吸器に近い動物を持参してください。 </li><li>事前定義されたを選択することにより、機械的な換気を開始換気ドッキングウィンドウ内またはカスタマイズされた換気プロファイル。 </li><li> Y-チューブを経由して人工呼吸器に動物を接続します。 </li><li> 重要なステップは人工呼吸器に動物の位置を合わせ、気管カニューレが可能カニューレ閉塞または気管ねじれを避けるために、人工呼吸器と同じレベルであることを確認します。 </li><li> 重要なステップは 、カニューレを挿入し、添付ファイルを確認するために摂動名をダブルクリックすることで、 ディープインフレ摂動を実行します。漏れの不在下では、システムは、過度の体積変位（ 図1）を使用せずに3秒かけて30 CMH 2 Oの圧力を保持することができるべきである。これらはカニューレ閉塞または紛失している可能性がありますとして記録容積と圧力トレースはまた、オフセットなしの兆候や変形をスムーズにする必要があります。 </li><li>必要に応じて、心拍数、体温監視用バイタルサイン変換器を接続します。データ記録はeithe開始することができスクリプトを経由して、手動または自動でR。 </li></ol> 3。肺機能測定測定またはコマンド（ 例えばネブライザー活性化、イベントマーカー）高度に制御し、再現実験のプロセス（ 図2）のために事前定義されたか、またはカスタマイズされたスクリプトを使用して自動化することができます。パラメータの数を生じさせる摂動の六ファミリーはベースラインで被検体の呼吸器系の仕組みを説明するために使用され、指定されたチャレンジ（ 表2）に続くことができる。 <ol><li> 重要なステップ 。計測を開始する準備ができたら、閉じた肺領域を募集し、肺容量の履歴を標準化するディープインフレを実行します。 </li><li> 重要なステップ 。試験測定（ 例えばのPV-PまたはPVを-V）を実行して、自発吸気努力の不在を確認してください。 選択されたデータセットビュー内の圧力信号トレースを観察します。段階的なPV曲線と、圧力プラトーはよくない下向きのたわみを使用して定義されるべきである。圧力の下向きのスイングは、動物（ 図3）からの吸気努力を示すことになる。 </li><li>そのタイトルをダブルクリックすることで選択したスクリプトを開始します。本研究で使用されるスクリプトは、一般的な測定のために含まれて： <ul><li>三重のベースライン測定値のシーケンス。 </li><li>吸入メサコリンに対する気道反応性の評価のための噴霧器の活性化注 ：システムによってメッセージが表示されたら、食塩水またはネブライザーにメサコリンの溶液を約100μlのをロードします。噴霧が開始し、自動的に停止します。 </li><li>ネブライザーの活性化後、約3分の期間に密接に間隔測定（毎10〜15秒）のシーケンス。 </li><li>プロンプトは別の課題を実行し、測定のシーケンスを繰り返す注：Bで綿棒でネブライザーマウント内部乾燥etweenの課題は、吸気ラインの建物アップから水滴や結露を防ぐことができます。 </li></ul></li><li>実験の最後に、換気を停止し、件名を切り離す。 </li><li>オペレーティングソフトウェアの次の対象者に切り替え、その重量を確認。 </li><li> 重要なステップは、洗い流して乾燥した噴霧器、アダプタ、Y-チューブ、および被験者間カニューレ。 </li><li> 3.6手順1.2.6を繰り返します。 </li><li>一日の終わりには、実験的なセッションを閉じます。すすぎ、乾燥噴霧器、アダプタ、Y-チューブ、及びカニューレを、製造業者の指示に従って実験室を離れる前に、システム呼気バルブをきれいにすることを忘れないでください。 </li></ol> 4。データ解析ソフトウェアは自動的に計算し、摂動に関連付けられているパラメータが表示されます。また、データに数学的モデルの適合を反映し決定係数（COD）を提供します。 INSUと各データセットソフトウェアによって除外としてfficient CODはラベルが付いています。実験的なセッションの見直し、データの再解析およびエクスポートのシナリオの作成 ​​は、ソフトウェアのレビュー＆レポーティングモジュールで行われます。 <ol><li> レビュー＆レポートのモジュールを開き、輸出シナリオを作成し、唯一の十分なCODを持つデータセットを含むように世話をして。 </li><li>必要なパラメータ、圧力またはフローボリューム曲線、生のデータセット信号またはスプレッドシート·アプリケーションの対象情報（ 表3参照）としてエクスポートします。 </li><li>時間の関数としてプロットし、各パラメータの平均ベースライン測定は、すべての測定（ 図4参照）。その後、曲線下面積を計算曲線の一般的なプロファイルを分析したり、統計分析を実行することもできます。 </li><li> 、メサコリン濃度の関数としての気道反応の結果を表現し、各被験者には、パラメータおよび実験条件を決定し、特定するには点（ 例えばピーク時）または各メタコリンチャレンジ後の特定の時間。各実験条件（ 表4、図5）のグループの平均およびレポートやプロットの結果を計算します。 </li><li>正規化を適用する（ 例：％ベースライン）や統計分析を行う;また指定されたパラメータのベースライン値（ 図5C PC 200）の倍増を生産濃度を算出考えるかもしれません。 </li></ol>

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それは喘息や他の肺疾患に関連する気道機能障害の継続的な研究は、疾患および治療の選択肢の発達の根底にあるメカニズムの理解に優先ままである。モデル気道疾患へのマウスの使用は、これらの病気のメカニズムへの理解を得るに不可欠となっています。マウスのような小さな対象における気道機能障害を評価検討する際に、肺機能を測定するためにそれによって信頼性の高い正確なツールを持つことは重要である。また、気道機能障害又は治療効果の位置に洞察を提供することができるツールを有する非常に貴重である。 FOT技法は、すべてのこれらの属性を組み合わせて、生理的変化を評価するために、強力な統合及び翻訳アプローチを提供します。 マウスにおけるこのタイプの測定を成功させるために、特別な注意が気管内でCAの抵抗、システムの較正、すなわち、いくつかの手順に与えられるべきであるnnula、ネブライザーの種類（だけでなく、その動作設定）動物の位置と肺ボリューム·ヒストリーの標準化。また、被験者の呼吸器系は、測定中の受動有効なままであるデータセットを得るために不可欠である。これは、無呼吸（ 表1参照） を誘導するために被験体の深い麻酔平面で、または過呼吸による仕事、筋麻痺剤の投与によって達成することができる。必要に応じて、マウスでの測定のために必要なスキルを取得しながら、研究者は、テスト負荷で、マスタリングシステムとそのオペレーティングソフトウェアによって起動することができます。その後、疾患モデルや処置マウスに移動する前に、ナイーブ動物での再現性のある結果を生成するために論理的であろう。呼吸研究における疾患モデルの重要な割合は、そのようなアレルゲン、毒素、汚染物質、タバコの煙やガス、measuremenで得られた結果の変動としてエージェントに動物をさらす伴うのでこの資料に記載されているT技術が故に使用される露光手順によって影響を受けることができた。キー実験プロセスの標準化（ 例えば、コンピュータ制御露光及び測定システム6,13を用いて、14）は 、潜在的にばらつきを減らすのに重要な影響を及ぼす可能性がある。 強みと同様の手法の限界を強調しながら、この記事で紹介した例には、ナイーブと塩素曝露したマウスの実験からの典型的な結果の選択を表す。 図6の例から分かるように、この技術は、再現性の肺機能測定値を生成することができる。同様の基準抵抗値はマウス系統との間に報告されたが、エラスタンスの違いは、しかし、15を観察した。実質的な変化は、乳児および成体マウス16との間予想されることもある。このような目のような生体内の生理学的評価、高精度の結果、 内の他の場合とFOTによって生成された大証は、被験者の自然な状態へと譲歩が付属しています。表現型の不確定性原理1と呼ばれているこの原則は、測定値は、麻酔で行われた（または経口挿管）tracheotomisedと機械的に科目を換気する必要があるという意味で、現在のプロトコルに適用されます。技術のもう一つの制限は、データに一定の位相モデルのフィット気管支収縮の程度のレベルの上に貧弱であるため、データは塩素曝露群の最高濃度では使用できません図5D-5Fで観察されています。しかしながら、深刻なbronchoconstricted動物を直接ZRS 15を分析することによって、または例えば基準に機械的機能17の不均一性を取って、より複雑な数学的モデルに適合するように、サードパーティのポスト解析ソフトウェアを用いて評価することができる。動物の気道が十分に電話でない場合は除外されたデータセットも観察することができますassiveまたはカニューレの抵抗値が高すぎる場合。経験則として、カニューレの抵抗はベースライン時に動物の抵抗を超えてはならない。大きな内径および/またはより短い長さのカニューレの操作カニューレ抵抗を減らすのに役立ちます。最後に、マウスにおけるFOT測定の本デモンストレーションは時間がかかり、したがって、あまり効率的手法として知覚され得るか、または低侵襲性の技術と比較して長期的な研究にはあまり適用可能である。しかし後者は、その成果の基礎に関して不確実性が多大に関連付けられており、1欠陥があるとして多くの人に見られる。繰り返し侵襲的測定は技術的に難しく17が、経口挿管動物で可能です。 提供された例から、結果は呼吸力学の測定値を生産でflexiVentシステムの2つの世代の同等性を実証し、同様に気道hyperreacマウスで塩素暴露後吸入メタコリンへtivityと過敏。生理学的変化又は疾患モデルを特徴付けるまたは理解するために使用される場合、技法に関連した詳細な測定の態様は、現在の知見を拡張するために寄与することができる。

小動物における肺の機械的性質を十分に特性化は、呼吸器科学にマウスモデルで急成長するので、必要不可欠となっています。強制振動法（FOT）、また、ヒト被験者に使用される技術を使用して実行する場合は、これらの測定は、意味のある生理的な変化を研究するための強力な、統合および並進的なアプローチを提供します。 FOT測定は、典型的には事前に定義され、小振幅、被験者の気道開口部1で適用気流振動波形（また、摂動又は入力信号と称する）に反応して取得した圧力および容量信号を分析することによって得られる。最も単純な形式では、FOT摂動は、明確に定義された周波数で単一の正弦波形となる。より複雑な摂動は通常広いスペクトルをカバーする特定の（互いに素）周波数の波形の選択の重ね合わせで構成されています。マルチ周波数の分解フーリエ変換を使用して構成要素への入力信号と出力信号は、呼吸器系の入力インピーダンス（ZRS）の計算を可能にする、摂動2に含まれるすべての周波数で、入力信号と出力信号との間の伝達関数、即ち 。したがって、FOTは、単一のマニューバー2の周波数範囲にわたって呼吸力学の同時評価を可能にします。インピーダンスデータへのフィッティング高度な数学モデル（ 例えば一定の位相モデル3）その後、気道（中枢および末梢）と実質肺組織に依存するパラメータ1、3への応答のパーティショニングを許可します。生理学的反応（ 例えば、呼吸頻度、一回換気量、肺容量、上気道、自発呼吸努力、測定のタイミング）に影響を及ぼす多くの要因は、測定システムおよび実験手順によって制御され、標準化されているので、1の技術は、キャップですそれが正しく行われていることを条件に正確で再現性のある測定値を生成することができる。この記事の目的は、マウスにおいてこのような測定を実行するために必要な手順の詳細な時系列な説明を提供することである。準備段階（試薬、機器や科目）、機械換気、肺機能測定、データ解析：プロトコルは4つの部分から構成されています。コンピュータ制御ピストンベンチレーター（flexiVent、SCIREQ株式会社、モントリオール、QC、カナダ）を使用して生成された呼吸器系の力学の代表的な結果の例が提供されています。これらはナイーブマウスから同様に気道炎症、上皮細胞の損傷や吸入エアロゾルメタコリン4へ増加気道過敏性によって特徴付けられる気道損傷の酸化ストレスドリブンモデルから得られた。このプロトコルは、多くの場合、吸入メタコリンに対する気道応答性を評価するために使用されているが、それは他の成果とvariouのに延び喘息、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、肺気腫、肺線維症、肺損傷、並びにヒトの疾患に類似病状のトランスジェニックマウスモデルに含め秒病理。このツールを使用して研究成果は、生理学的な変化や疾患モデルのよりよい特性評価および理解するだけでなく、新たな研究分野への展開に貢献することができます。

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>REAGENTS</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Acetyl-&beta;-methylcholine chloride </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A-2251</td>
 <td>Methacholine</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Adson forceps, serrated 12 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11018-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Moria MC31 forceps, serrated-curved</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11370-31</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iris scissors-tough cut, straight 11.5 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14058-11</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spring scissors-2.5 mm blades, straight</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>15000-08</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-sterile blunt needle (18g x &frac12;")</td>
 <td>Brico Medical Supplies Inc.</td>
 <td>BN1805</td>
 <td>Endotracheal cannula</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-sterile 5-0 silk suture</td>
 <td>Seraflex</td>
 <td>IDI58000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phosphate buffered solution</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>14190-144</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>15 ml conical tubes</td>
 <td>Starstedt</td>
 <td>SS-4001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1 ml TB syringes</td>
 <td>Becton Dickinson</td>
 <td>309626</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>200 &mu;l filter tips</td>
 <td>Biosphere</td>
 <td>70.760.211</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>EQUIPMENT</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>flexiVent FX</td>
 <td>SCIREQ Inc. </td>
 <td>sales@scireq.com</td>
 <td><a href="http://www.scireq.com/" target="_blank">www.scireq.com</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Aerogen Aeroneb nebulizer</td>
 <td>SCIREQ Inc.</td>
 <td>sales@scireq.com</td>
 <td><a href="http://www.scireq.com/" target="_blank">www.scireq.com</a></td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>

evaluation of respiratory system mechanics in mice using the forced oscillation technique

強制振動法（FOT）は、包括的な、詳細、正確かつ再現性のある方法で、マウスでは肺機能の実験的評価を可能に強力な、統合及び翻訳ツールです。それは、事前定義された、小振幅、通常は、被験者の気道開口部に適用される振動気流波形への反応で得られた圧力と容積信号の解析を通じて呼吸器系の力学の測定値を提供します。現在のプロトコルの詳細を十分にコンピュータ制御ピストンベンチレーター（flexiVent; SCIREQ株式会社、モントリオール、QC、カナダ）を使用して、マウスでは強制振動の測定を実行するために必要な手順。準備工程、機械式換気、肺機能測定、データ分析：記述は、4つの部分に分かれている。また、麻酔したマウスに吸入メサコリンに対する気道反応性を評価する方法の詳細は、このtechniquの一般的なアプリケーションが含まれていますまた、他の成果や各種肺病態にも及ぶ電子。ナイーブマウスで同様に気道損傷の酸化的ストレスドリブンモデルから得られた測定値は、このツールは新しい研究分野のアプリケーションに同様に研究さ生理的変化や疾患モデルのよりよい特性評価および理解にどのように貢献できるかを説明するために提示される。

呼吸器系の力学測定 。 表4は、ベースラインとflexiWare 7ソフトウェアでサポートされる2つのflexiVent世代のどちらかを使用して、次のメサコリン誘発性気管支収縮（12.5 mg / mlの）で得られたナイーブ/ Jマウスからの典型的な結果を示しています。呼吸器系の力学、閉胸条件下ですなわち、（スナップショット150、プライム3クイック、それぞれ）密集した形で発振家族を強制シングルとブロードバンド周波数の摂動を交互にすることにより評価した。換気は、測定中に一時停止しているので、プライム-8と同様の周波数範囲をカバーする、より短い期間（3対8秒）を有するクイックプライム-3、の影響を最小限に抑える、無呼吸の期間を短縮するために、選択された血液ガス上の摂動とレスポンスの良好な分解能を提供します。各摂動に関連付けられたパラメータをAUTOMATICA算出したLLYオペレーティングソフトウェアによって。結果はflexiVentシステムの2つの世代が呼吸力学の同等の測定値を生成していることを示しています。 肺応答のサイト 。肺応答のサイトを区別することは薬理学的介入6の潜在的なポイントを識別するために、調査員はさらに同様に影響を受けた地域を特定することができます。測定が行われる、それに対して呼気終末圧力は3〜9 CMH 2 O（ 図6A、スナップ-150）に増加した場合、例えば、ナイーブ/ Jマウスは、基準抵抗の増加を示す。本実施例では、広帯域FOT測定（クイックプライム-3）の使用は、抵抗値の変化のための基礎を明確にするために詳細を設け：呼気終末圧力の変化と一致して（R N）気道抵抗における減少をもたらし高肺気量の気管支拡張効果と大きなインフレプレスURE（ 図6D）及び組織減衰（G; 図6E）の増加、密接に組織粘弾性、おそらく小気道7の抵抗を反映した組織抵抗に関するパラメータ。後者は増加する肺容量を増加することが知られている。 気道過敏性 。塩素ガス曝露後、吸入メサコリンに対する気道反応、気道損傷4（ 図2）の結果として、BALB / cマウスにおける大気暴露に比べて増加します。塩素は、特に上皮細胞に、気道における構造的な細胞の破壊につながる、および炎症性細胞の動員を誘導し、酸化ストレスを誘発することが知られている。 図5に示されるように、呼吸器系の仕組みを説明するすべてのパラメータの変化が増大メタコリンの課題に応じて見ることができる。空気にさらされたマウスと比較して、マウスは、塩素系に曝さneのガスは、全てFOTパラメータ（ 図5A、5B、5D〜5F）ならびに抵抗が2倍 ​​を引き起こすのに必要メタコリン濃度の減少によって例示濃度応答曲線の統計的に有意な左方向にシフトで大きな最大の応答を表示とエラスタンス（PC 200、 図5C）。これらの結果は、それぞれ、塩素ガスへの暴露後吸入メサコリンに対する気道過敏性と過敏性を示しています。 他の測定 。 FOTに加えて、flexiVentシステムは、肺機能8-10又は心血管系11の測定値の他のタイプを収集するために使用することができる。 図7は、ベースライン条件の下でナイーブ/ Jマウスにおける代表段階的に、圧力駆動圧力容積曲線を表示する。曲線のデフレ手足の上部はサラザール·ノウルズ方程式12にフィットさ</<html> &gt;（商標）とパラメータは、ソフトウェアによって自動的に計算されます。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table1.jpg" alt="表1" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table1highres.jpg" fo:content-width="6in" /> 表1。マウスで使用される麻酔薬レジメンの例としては、。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172table1large.jpg" target="_blank">大きなテーブルを表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table2.jpg" alt="表2" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table2highres.jpg" fo:content-width="5in" /> 表2。マウスでの肺機能測定に使用摂動。システムに必要*延長。主題はまた、測定中に閉じたプレチスモグラフチャンバ内にする必要がある。痩せ細った&quot;&gt;大きな表を表示するには、ここをクリックしてください。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table3.jpg" alt="表3" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table3highres.jpg" fo:content-width="6in" /> 表3。シングルとブロードバンド周波数強制振動摂動家族からエクスポートされたパラメータの例は <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172table3large.jpg" target="_blank">大きなテーブルを表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table4.jpg" alt="表4" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table4highres.jpg" fo:content-width="6in" /> 表4。システム比較。肺力学の比較パラメータはflexiWare 7ソフトウェアによって運営flexiVentシステムの2つの世代を使用して収集。結果は、ナイーブ/ Jのマウス（n = 5 /で生成された<html>ベースラインと次のメサコリン誘発性気管支収縮（MCH 12.5 mg / mlの）でのグループ）。 *グループが繰り返し測定し、分散の均一性（;グラフパッドソフトウェア、サンディエゴ、USAグラフパッドプリズム、バージョン5.03）のための個々の応答のログ10のための2つの配置ANOVAを用いて比較した。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig1.jpg" alt="図1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig1highres.jpg"/> 図1。深い肺インフレのスクリーンショット。上部パネルは、人工呼吸器のピストン（赤のトレース）と被写体（グレーのトレース）に配信ボリュームによって変位量を示しています。下部パネルは3秒かけて30 CMH 2 Oの設定圧力まで上昇シリンダ圧を表示し、同じ期間一定に保持した。 172/50172fig2.jpg &quot;ALT =&quot;図2 &quot;/&gt; 図2。ベースライン時の呼吸器系の力学を評価するために使用される典型的なスクリプトの一例を示す。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig3.jpg" alt="図3" /> 図3。段階的に圧力-容積曲線の実行中に自発吸気努力。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig4.jpg" alt="図4" fo:content-width="2.6in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig4highres.jpg"/> 図4。経時応答以下は、吸入メサコリンの課題を増やし 、 その結果を 5ナイーブ自発的に過敏/ Jマウスの群の平均（±標準偏差）として表されている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172fig4large.jpg" target="_blank">大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 &lt;Pクラス= &quot;jove_content&quot; FO：キープtogether.withinページ= &quot;常に&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig5.jpg" alt="図5" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig5highres.jpg"/> 図5。増加メサコリンにおける課題塩素と空気暴露BALB / cマウスに続く呼吸器系の力学の変化。ピーク値は、すべての教科や実験条件の各パラメータに同定された。グループの平均は、次いで（であり、n = 4-6、平均値±標準偏差）を算出した。群間の差は、分散の均一性のための個々の応答のログ10を用いて分散分析によって評価した。ベースラインの倍増（PC 200）を製造メタコリンの濃度は、個々の用量応答曲線と近似曲線の補間に二次多項式を当てはめることによって得た。データポイントは、塩素に暴露したマウスでD、EとFで欠落している。データへの数学的モデルの貧弱なフィット感を反映して決定不十分高い係数による2最高メサコリン濃度で。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172fig5large.jpg" target="_blank">大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig6.jpg" alt="図6" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig6highres.jpg"/> 図6。気道および肺組織の力学に呼吸応答の分割。実験トレースは、2つの異なる呼気終末圧力で三重の呼吸力学のシングル（2.5 Hz）で、ブロードバンド（1-20.5Hz）周波数強制振動の測定を示すナイーブ/ Jマウスから（3＆9 CMH 2 O）。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172fig6large.jpg" target="_blank">大きい数字を表示するにはここをクリック</a> </&gt;。 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig7.jpg" alt="図7" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig7highres.jpg"/> 図7。ベースライン条件の下でナイーブ/ Jマウスにおける圧力-容積曲線。圧力-容積曲線はそれぞれのマウスの肺を独立してその状態を、同一の圧力に膨張されたことを確認するために段階的に圧力駆動摂動（のPV-P）を使用して生成された。個々の圧力 - 容積曲線から抽出されたサラザール-Knowlesの式のパラメータもまた平均化され、テーブル形式で報告された。結果は平均±標準偏差（n = 6）のように表される。

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Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique

SCIREQ株式会社、モントリオール、QC、現在のプロトコルでは、呼吸器系の力学の測定と同様に強制振動技術を使用してマウスで吸入メサコリンに対する気道反応性の評価（flexiVentを実行するために必要な手順の詳細なステップバイステップの説明を提供しています、カナダ）。

強制振動法を用いたマウスにおける呼吸器系の力学の評価

The  forced oscillation technique (FOT) is a powerful, integrative and translational  tool permitting the experimental assessment of lung function in mice ...

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Research

JoVE Journal

Biology

56.4K ビュー.  McGill University. SCIREQ株式会社、モントリオール、QC、現在のプロトコルでは、呼吸器系の力学の測定と同様に強制振動技術を使用してマウスで吸入メサコリンに対する気道反応性の評価（flexiVentを実行するために必要な手順の詳細なステップバイステップの説明を提供しています、カナダ）。

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Evaluation of the Spatial Distribution of &gamma;H2AX following Ionizing Radiation

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone H2AX1,2. This phosphorylation of H2AX is mediated by the phosphatidyl-inosito 3-kinase (PI3K) family of proteins, ataxia telangiectasia mutated (ATM), DNA-protein kinase catalytic subunit and ATM and RAD3-related (ATR)3. The phosphorylated form of H2AX, referred to as &gamma;H2AX, spreads to adjacent regions of chromatin from the site of the DSB, forming discrete foci, which are easily visualized by immunofluorecence microscopy3. Analysis and quantitation of &gamma;H2AX foci has been widely used to evaluate DSB formation and repair, particularly in response to ionizing radiation and for evaluating the efficacy of various radiation modifying compounds and cytotoxic compounds4.
Given the exquisite specificity and sensitivity of this de novo marker of DSBs, it has provided new insights into the processes of DNA damage and repair in the context of chromatin. For example, in radiation biology the central paradigm is that the nuclear DNA is the critical target with respect to radiation sensitivity. Indeed, the general consensus in the field has largely been to view chromatin as a homogeneous template for DNA damage and repair. However, with the use of &gamma;H2AX as molecular marker of DSBs, a disparity in &gamma;-irradiation-induced &gamma;H2AX foci formation in euchromatin and heterochromatin has been observed5-7. Recently, we used a panel of antibodies to either mono-, di- or tri- methylated histone H3 at lysine 9 (H3K9me1, H3K9me2, H3K9me3) which are epigenetic imprints of constitutive heterochromatin and transcriptional silencing and lysine 4 (H3K4me1, H3K4me2, H3K4me3), which are tightly correlated actively transcribing euchromatic regions, to investigate the spatial distribution of &gamma;H2AX following ionizing radiation8. In accordance with the prevailing ideas regarding chromatin biology, our findings indicated a close correlation between &gamma;H2AX formation and active transcription9. Here we demonstrate our immunofluorescence method for detection and quantitation of &gamma;H2AX foci in non-adherent cells, with a particular focus on co-localization with other epigenetic markers, image analysis and 3D-modeling.

Evaluation of the Spatial Distribution of &#947;H2AX following Ionizing Radiation

Microscopic analysis of &gamma;H2AX foci, which form following the phosphorylation of H2AX at Ser-139 in response to DNA double-strand breaks, has become an invaluable tool in radiation biology. Here we used an antibody to mono-methylated histone H3 at lysine 4 as an epigenetic marker of actively transcribing euchromatin, to evaluate the spatial distribution of radiation-induced &gamma;H2AX formation within the nucleus.

電離放射線は、次のγH2AXの空間分布の評価

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone ...

生物学

Visualization of DNA Replication in the Vertebrate Model System DT40 using the DNA Fiber Technique

Maintenance of replication fork stability is of utmost importance for dividing cells to preserve viability and prevent disease. The processes involved not only ensure faithful genome duplication in the face of endogenous and exogenous DNA damage but also prevent genomic instability, a recognized causative factor in tumor development.
Here, we describe a simple and cost-effective fluorescence microscopy-based method to visualize DNA replication in the avian B-cell line DT40. This cell line provides a powerful tool to investigate protein function in vivo by reverse genetics in vertebrate cells1. DNA fiber fluorography in DT40 cells lacking a specific gene allows one to elucidate the function of this gene product in DNA replication and genome stability. Traditional methods to analyze replication fork dynamics in vertebrate cells rely on measuring the overall rate of DNA synthesis in a population of pulse-labeled cells. This is a quantitative approach and does not allow for qualitative analysis of parameters that influence DNA synthesis. In contrast, the rate of movement of active forks can be followed directly when using the DNA fiber technique2-4. In this approach, nascent DNA is labeled in vivo by incorporation of halogenated nucleotides (Fig 1A). Subsequently, individual fibers are stretched onto a microscope slide, and the labeled DNA replication tracts are stained with specific antibodies and visualized by fluorescence microscopy (Fig 1B). Initiation of replication as well as fork directionality is determined by the consecutive use of two differently modified analogues. Furthermore, the dual-labeling approach allows for quantitative analysis of parameters that influence DNA synthesis during the S-phase, i.e. replication structures such as ongoing and stalled forks, replication origin density as well as fork terminations. Finally, the experimental procedure can be accomplished within a day, and requires only general laboratory equipment and a fluorescence microscope.

DT40, a model vertebrate genetic system, provides a powerful tool to analyze protein function. Here we describe a simple method that allows qualitative analysis of parameters that influence DNA synthesis during the S-phase in DT40 cells at the single molecule level.

DNAの繊維技術を用いた脊椎動物のモデルシステムのDT40のDNA複製の可視化

Maintenance of replication fork stability is of utmost importance for dividing cells to preserve viability and prevent disease. The processes involved not ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term storage of biological materials such as blood, cells and tissues 1,2. The cryogenic nature of liquid nitrogen, while ideal for sample preservation, can cause rapid freezing of live tissues on contact - known as 'cryogenic burn'2, which may lead to severe frostbite in persons closely involved in storage and retrieval of samples from Dewars. Additionally, as liquid nitrogen evaporates it reduces the oxygen concentration in the air and might cause asphyxia, especially in confined spaces2.
In laboratories, biological samples are often stored in cryovials or cryoboxes stacked in stainless steel racks within the Dewar tanks1. These storage racks are provided with a long shaft to prevent boxes from slipping out from the racks and into the bottom of Dewars during routine handling. All too often, however, boxes or vials with precious samples slip out and sink to the bottom of liquid nitrogen filled tank. In such cases, samples could be tediously retrieved after transferring the liquid nitrogen into a spare container or discarding it. The boxes and vials can then be relatively safely recovered from emptied Dewar. However, the cryogenic nature of liquid nitrogen and its expansion rate makes sunken sample retrieval hazardous. It is commonly recommended by Safety Offices that sample retrieval be never carried out by a single person. Another alternative is to use commercially available cool grabbers or tongs to pull out the vials3. However, limited visibility within the dark liquid filled Dewars poses a major limitation in their use.
In this article, we describe the construction of a Cryotolerant DIY retrieval device, which makes sample retrieval from Dewar containing cryogenic fluids both safe and easy.

Here we present a low cost, durable cryotolerant device for sample retrieval from Dewar tanks filled with liquid nitrogen. The ease of construction and modular design of the device makes the process of sample retrieval from cryogenic tanks safe and easy.

凍結保存サンプルの回復のための日曜大工のデバイスが誤って低温貯蔵タンクに落とし

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

Body movements are mainly provided by mechanical function of skeletal muscle. Skeletal muscle is composed of numerous bundles of myofibers that are sheathed by intramuscular connective tissues. Each myofiber contains many myofibrils that run longitudinally along the length of the myofiber. Myofibrils are the contractile apparatus of muscle and they are composed of repeated contractile units known as sarcomeres. A sarcomere unit contains actin and myosin filaments that are spaced by the Z discs and titin protein. Mechanical function of skeletal muscle is defined by the contractile and passive properties of muscle. The contractile properties are used to characterize the amount of force generated during muscle contraction, time of force generation and time of muscle relaxation. Any factor that affects muscle contraction (such as interaction between actin and myosin filaments, homeostasis of calcium, ATP/ADP ratio, etc.) influences the contractile properties. The passive properties refer to the elastic and viscous properties (stiffness and viscosity) of the muscle in the absence of contraction. These properties are determined by the extracellular and the intracellular structural components (such as titin) and connective tissues (mainly collagen) 1-2. The contractile and passive properties are two inseparable aspects of muscle function. For example, elbow flexion is accomplished by contraction of muscles in the anterior compartment of the upper arm and passive stretch of muscles in the posterior compartment of the upper arm. To truly understand muscle function, both contractile and passive properties should be studied.
The contractile and/or passive mechanical properties of muscle are often compromised in muscle diseases. A good example is Duchenne muscular dystrophy (DMD), a severe muscle wasting disease caused by dystrophin deficiency 3. Dystrophin is a cytoskeletal protein that stabilizes the muscle cell membrane (sarcolemma) during muscle contraction 4. In the absence of dystrophin, the sarcolemma is damaged by the shearing force generated during force transmission. This membrane tearing initiates a chain reaction which leads to muscle cell death and loss of contractile machinery. As a consequence, muscle force is reduced and dead myofibers are replaced by fibrotic tissues 5. This later change increases muscle stiffness 6. Accurate measurement of these changes provides important guide to evaluate disease progression and to determine therapeutic efficacy of novel gene/cell/pharmacological interventions. Here, we present two methods to evaluate both contractile and passive mechanical properties of the extensor digitorum longus (EDL) muscle and the contractile properties of the tibialis anterior (TA) muscle.

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

Changes in limb muscle contractile and passive mechanical properties are important biomarkers for muscle diseases. This manuscript describes physiological assays to measure these properties in the murine extensor digitorum longus and tibialis anterior muscles.

長指伸筋の筋機能の評価<em&gt;エクスビボ</em&gt;と前脛骨筋<em&gt;その場</em&gt;マウスの

Body  movements are mainly provided by mechanical function of skeletal muscle. Skeletal  muscle is composed of numerous bundles of myofibers that are ...

A High-throughput Method for Measurement of Glomerular Filtration Rate in Conscious Mice

The measurement of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard in kidney function assessment. Currently, investigators determine GFR by measuring the level of the endogenous biomarker creatinine or exogenously applied radioactive labeled inulin (3H or 14C). Creatinine has the substantial drawback that proximal tubular secretion accounts for ~50% of total renal creatinine excretion and therefore creatinine is not a reliable GFR marker. Depending on the experiment performed, inulin clearance can be determined by an intravenous single bolus injection or continuous infusion (intravenous or osmotic minipump). Both approaches require the collection of plasma or plasma and urine, respectively. Other drawbacks of radioactive labeled inulin include usage of isotopes, time consuming surgical preparation of the animals, and the requirement of a terminal experiment. Here we describe a method which uses a single bolus injection of fluorescein isothiocyanate-(FITC) labeled inulin and the measurement of its fluorescence in 1-2 &mu;l of diluted plasma. By applying a two-compartment model, with 8 blood collections per mouse, it is possible to measure GFR in up to 24 mice per day using a special work-flow protocol. This method only requires brief isoflurane anesthesia with all the blood samples being collected in a non-restrained and awake mouse. Another advantage is that it is possible to follow mice over a period of several months and treatments (i.e. doing paired experiments with dietary changes or drug applications). We hope that this technique of measuring GFR is useful to other investigators studying mouse kidney function and will replace less accurate methods of estimating kidney function, such as plasma creatinine and blood urea nitrogen.

Measurement of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard for kidney function assessment. Here we describe a high-throughput method which allows the determination of GFR in conscious mice by using a single bolus injection, determination of fluorescein isothiocyanate (FITC)-inulin in plasma and calculation of GFR by a two-phase exponential decay model.

意識マウスにおける糸球体濾過率の測定のためのハイスループット法

The measurement of  glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard in kidney function  assessment. Currently, investigators determine GFR by ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Measuring Respiratory Function in Mice Using Unrestrained Whole-body Plethysmography

Respiratory dysfunction is one of the leading causes of morbidity and mortality in the world and the rates of mortality continue to rise. Quantitative assessment of lung function in rodent models is an important tool in the development of future therapies. Commonly used techniques for assessing respiratory function including invasive plethysmography and forced oscillation. While these techniques provide valuable information, data collection can be fraught with artefacts and experimental variability due to the need for anesthesia and/or invasive instrumentation of the animal. In contrast, unrestrained whole-body plethysmography (UWBP) offers a precise, non-invasive, quantitative way by which to analyze respiratory parameters. This technique avoids the use of anesthesia and restraints, which is common to traditional plethysmography techniques. This video will demonstrate the UWBP procedure including the equipment set up, calibration and lung function recording. It will explain how to analyze the collected data, as well as identify experimental outliers and artefacts that results from animal movement. The respiratory parameters obtained using this technique include tidal volume, minute volume, inspiratory duty cycle, inspiratory flow rate and the ratio of inspiration time to expiration time. UWBP does not rely on specialized skills and is inexpensive to perform. A key feature of UWBP, and most appealing to potential users, is the ability to perform repeated measures of lung function on the same animal.

The assessment of respiratory physiology has traditionally relied upon techniques, which require restraint or sedation of the animal. Unrestrained whole-body plethysmography, however, provides precise, non-invasive, quantitative analysis of respiratory physiology in animal models. In addition, the technique allows repeated respiratory assessment of mice allowing for longitudinal studies.

拘束されていない全身プレチスモグラフィを使用したマウスにおける呼吸機能の測定

Respiratory dysfunction is one of the leading causes of morbidity and mortality in the world and the rates of mortality continue to rise. Quantitative ...

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and alopecia areata. Alopecia can also occur as a side effect of chemotherapy in cancer patients. In this study, our goal was to develop a consistent and reliable method to quantify hair loss in mice, which will allow investigators to accurately assess and compare new therapeutic approaches for these various forms of alopecia. The method utilizes a standard gel imager to obtain and process images of mice, measuring the light absorption, which occurs in rough proportion to the amount of black (or gray) hair on the mouse. Data that has been quantified in this fashion can then be analyzed using standard statistical techniques (i.e., ANOVA, T-test). This methodology was tested in mouse models of chemotherapy-induced alopecia, alopecia areata and alopecia from waxing. In this report, the detailed protocol is presented for performing these measurements, including validation data from C57BL/6 and C3H/HeJ strains of mice. This new technique offers a number of advantages, including relative simplicity of application, reliance on equipment which is readily available in most research laboratories, and applying an objective, quantitative assessment which is more robust than subjective evaluations. Improvements in quantification of hair growth in mice will improve study of alopecia models and facilitate evaluation of promising new therapies in preclinical studies.

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including as a side-effect of chemotherapy. We have developed a method to quantify hair loss in mice, utilizing a standard gel imager to perform a grayscale analysis, to facilitate study of promising new alopecia therapies.

グレースケール解析を用いたマウスの抜け毛の定量分析のための新たな手法

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

マウス単離された灌流腎臓テクニック

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Induction of Right Ventricular Failure by Pulmonary Artery Constriction and Evaluation of Right Ventricular Function in Mice

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of RVF. Previous rat models imitating RVF progression have been described. Compared with rats, mice are more accessible, economical, and widely used in animal experiments. We developed a pulmonary artery constriction (PAC) approach which is comprised of banding the pulmonary trunk in mice to induce right ventricular (RV) hypertrophy. A special surgical latch needle was designed that allows for easier separation of the aorta and the pulmonary trunk. In our experiments, the use of this fabricated latch needle reduced the risk of arteriorrhexis and improved the surgical success rate to 90%. We used different padding needle diameters to precisely create quantitative constriction, which can induce different degrees of RV hypertrophy. We quantified the degree of constriction by evaluating the blood flow velocity of the PA, which was measured by noninvasive transthoracic echocardiography. RV function was precisely evaluated by right heart catheterization at 8 weeks after surgery. The surgical instruments made inhouse were composed of common materials using a simple process that is easy to master. Therefore, the PAC approach described here is easy to imitate using instruments made in the lab and can be widely used in other labs. This study presents a modified PAC approach that has a higher success rate than other models and an 8-week postsurgery survival rate of 97.8%. This PAC approach provides a useful technique for studying the mechanism of RVF and will enable an increased understanding of RVF.

Here, we provide a useful approach for studying the mechanism of right ventricular failure. A more convenient and efficient approach to pulmonary artery constriction is established using surgical instruments made inhouse. In addition, methods to evaluate the quality of this approach by echocardiography and catheterization are provided.

肺動脈収縮による右心室障害の誘導とマウスにおける右心室機能の評価

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of ...

強制振動法を用いたマウスにおける呼吸器系の力学の評価

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電離放射線は、次のγH2AXの空間分布の評価

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