この作品は、米国国立衛生研究所と疾病管理予防センターを通じて協力協定によって資金を供給され、仕事、家族と健康ネットワーク（www.WorkFamilyHealthNetwork.org）によってサポートされていました：母子保健のユーニス·ケネディ·シュライバー研究所と人間開発（グラント＃U01HD051217、U01HD051218、U01HD051256、U01HD051276）、独立行政法人高齢上（グラント＃U01AG027669）、行動科学科学研究局、国立心肺血液研究所（R01HL107240）、労働研究所安全衛生（グラント＃U01OH008788、U01HD059773）。ウィリアム·T·グラント財団、アルフレッド·P·スローン財団、子どもと家族のための行政からの補助金は、追加の資金を提供してきた。本書の内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしもこれらの機関や事業所の公式見解を示すものではありません。

<ol>
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松谷アメリカの科学諮問委員会に、コンサルタントやロッツLLCのための専門家証人として機能し、コンサルティングを受け、（; ESRC-0977、ClinicalTrials.gov識別子NCT00900159今サノビオン）Orfeuバクストンはセプラコール社からの研究者主導の助成金を受けているウェイクフォレスト大学医療センターからの手数料。

バイオマーカーは、医学、細胞生物学、遺伝学、心理学、社会学、人口統計学、社会疫学を含む複数の分野にまたがる非常に便利なツール、です。各専門分野の中では、初期段階の妥当性と信頼性バイオマーカー研究は、隠された病気のリスクの両方を明らかにし、健康の結果の前後の予測を提供するために使用された。これらの例では、正確であるバイオマーカーは、耐久性のある（ すなわち 、それらは、バイオマーカーを抽出するために、サンプル収集とラボアッセイの実装との間のずれを生き残ることができる）と、（様々なモデル、すなわち便利）汎用性が要求される。 DBSコレクションは比較的簡単な手順であるが、いくつかの技術は、収集されたスポットの音量を最大化することができます。コレクションが始まる前に、参加者の手を確保することは暖かく、指を穿刺したら、そのため血管が拡張していることを、血液の流れを助けます。カイロを使用するか、ある参加者は、暖かい水の下に手を実行して、このプロセスを支援することができます。コレクションの前に指を搾乳すると、指先に血液を引き出し、血液の流れを助けるために手を温めるます。搾乳は練習で改善しプロセスです。コレクターは、彼らが最も快適で効果的な見つけるどんな技術を使用する必要がありますが、最も一般的なアプローチは、コレクターの反対側の手で、参加者の手を搾乳が含まれます。この方法では、反対側の手が、参加者の手首を安定させることができますがコレクターの親指が深い参加者の手のひらに動作するようになります。 1は、参加者の左手指から血液を採取した場合の例として、コレクタは自分の右手で左手とミルクで参加者の手首を安定化させる。搾乳間に行われた一般的な間違いはなく、指先に向かって血液を引っ張る筋肉に働いて手の上の皮膚を引っ張って、しっかりしたグリップを使用していないなどがあります。これは、ピンを回避することも重要であるチンしっかりと血液の流れを妨げるどちらも、nonmilking手で参加者の手首を掴み搾乳手や指。 指を穿刺すると、しっかりと放電前の指にランセットを押して、可能な穿刺深させる。浅い穿刺少ない血流と迅速な凝固をもたらす。指を穿刺した後、すぐに作業が鍵である。薄い血が容易になり、コレクションより大きなスポットにつながる。穿刺後、血液が凝固するまで、ますます粘性になる。カードよりそのボリューム上の血液スポットを収集するのに必要な時間が短縮。 理想的には参加者の血が滴が自重で落下するが、一部の人々の血が速く、他よりも厚いまたは血栓であるように、これは、すべての参加者には当てはまらないよう十分に薄くなります。血液が指から落ち厚すぎると、フィルタカードは、コレクションのための血液にしなければならない。 WH血液にカードを持って来る途中、それはむしろちょうどカードに血液を軽くたたくよりも、できるだけ長くのために指からぶら下がっている間に、ドロップと接触し​​て、カードを保持することが重要です。これはスポットのサイズを最大化するために指から血を引くのに役立ちます。この技術は、血液とカードとの接触を維持する安定した手を必要とする。両手を使用して、1つはカードを保持する参加者の手と1を安定し、互いに接触両手を保つことは一緒にカードや血液を安定させるのに役立ちます。 このような心血管代謝リスク評価などの高度な研究分野は、長い間、このようなC反応性蛋白（CRP）、インスリン、およびグリコシル化ヘモグロビン（HbA1C値）は、初期リスクの検出と防止努力のためだけでなく、「ハードエンドポイント」のバイオマーカーとしてのバイオマーカーに依存してきた心血管疾患（CVD）リスクとCVD関連死亡率12。臨床疫学は頻繁prospectivelするバイオマーカーを評価Yは、心臓病およびII型糖尿病などの心血管代謝リスク結果を予測。おそらく、最も広く使用される全てのバイオマーカーのフレーミングハムリスクスコア、CVD 13の予測に有用性を実証した血圧、HDLコレステロールレベルおよび総コレステロールレベルを含む複合体である。しかし、フラミンガムスコアはいくつかの技術的な論争を経験し、心血管研究に関連、より正確で具体的なバイオマーカーの必要性が示唆され、健康への社会的、環境的要因をリンクに焦点を当てた研究には限界があるしている。 ELISAまたはDBS試料のアッセイのための利用可能な同様の技術を用いて市販のキットは多数存在する。 DBSサンプルの分析のために必要なソリューション2に乾燥されたサンプルを持って来るための具体的かつ最適化された溶出工程の使用である。それ以上の分析対象物についてのアッセイは、現在1開発されているので、これは研究の拡大領域です。目の中Eアッセイは、すでに検証され、広く使用されているコレステロール2、CRP 10,14,15、IgE16、EBV 9,15、レプチン17、およびcyotkines 18です。検査医学のワシントン大学の学科（UWラボメッド）バイオマーカー研究所（：マークWener監督）など、DBSのアッセイを専門の研究室がいくつかあります。 むしろ孤独なバイオマーカーよりもバイオマーカーのパネルは、心血管および糖尿病研究の分野で最も有用であることを念頭に置き、バイオマーカーは、それらの有用性を最大にするために文脈の様々な要因と一緒に検討する必要がある。バイオマーカー研究は、両方の財政、データ収集のための時間では、しかし、高価になることができます。 wiをそれは、正確で耐久性に優れ、かつ汎用性のあるバイオマーカーを選択することが重要ですしつつ、仕事と家庭のバイオマーカー研究は、安価で適切であるバイオマーカーを選択することで、実用性に根ざしている必要があり、かつ迅速に回収することができる目の使いやすさ。さらに、実用的な考察は、多くの場合、同時に1プロシージャ内で価格、品質、スピードを最大化することができないことになる。ここに、フィールドと人口の研究の中の健康バイオマーカー研究の次のステップをうそ。バイオマーカー研究の分野は、飛躍的な成長期に現在あるが、ほとんどの作業はこれからである。

バイオマーカーは、通常の臨床的に識別疾患1に寄与する可能性がある病原性に至るまでの生物学的プロセスに関する貴重な情報を提供することができます。研究の場では、乾燥血液スポット（DBS）は、全血でのバイオマーカーを収集するための方法として、静脈穿刺することがますます優先になってきている。 DBSコレクションは、次いで、静脈穿刺、単純な比較的痛みのない、低侵襲性であり、最小限のストレージ要件（ すなわち、試料は直ちに凍結されるべき、アッセイの前に、安定した冷凍環境下で長期間保存することができる必要はない）を必要とする。 DBS試料は、コレステロール、C-反応性タンパク質、グリコシル化ヘモグロビン、エプスタイン - バーウイルス抗体、およびいくつかのサイトカインを含む様々な分析物の様々な試験することができる。 静脈穿刺は、長い血中のバイオマーカーの収集のためのゴールドスタンダードとなっている。しかし、取得、格納、および血液サンプルを出荷することを必要とadheren特定の研究プロトコルにおいて可能でないかもしれないプロトコルおよび健康コードの数にCE。 DBSのサンプリング手順が単純であり、公式の証明を必要としないながらPhlebotomistsは正式に、静脈穿刺のために認定される必要があります。静脈採血はまた、DBSコレクション（ すなわち針、チューブ、止血帯）であり、より後の回収作業よりも多くの装置を必要とする。静脈穿刺サンプルは、分析物の分解を防止するために、直ちにC処理された（ すなわち、血清または血漿は遠心分離によって血液試料から抽出された、または一定時間室温で放置）およびC -20℃の間で凍結させ、-70されなければならない、DBS試料は単に空気乾燥させなければならず、次いで冷凍庫2に転送する前に、一週間以上の分析物に依存して、室温で保存されてもよい。 DBS試料は、上述の理由から、静脈穿刺サンプルを収集するよりも安価である。 DBSサンプルもアッセイ前に輸送および保管コストを削減し、より少ないスペースを取る。 バイオマーカーとしての唾液の使用は、生物行動の研究で重要となっています。唾液は、バイオマーカーを収集するために、単純な、非侵襲的な方法を提供し、コルチゾールやコチニン3-5の測定を目的としたフィールドワークのための標準となっている。尿を非侵襲的に収集することができ、メラトニンのアッセイのために又は毒物学のために集団レベルの研究に用いることができる別の試料である。尿と唾液の両方がまっすぐ進む参加者自身で完成されることが可能である収集手順を提供していますが、すべてではない検体は、これらのメディアで測定することができる。 DBSは、静脈穿刺に、シンプルでコスト効果の高い、選択肢を提供し、フィールドにますます実装研究ツールになりつつあり、人口は6を研究。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Asepti II Microbial Wipes</td>
			<td style="width:71px;">EcoLab</td>
			<td style="width:119px;">D12330345</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Bio-hazard waste bags</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">14220-092</td>
			<td style="width:167px;">High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bio-hazard waste barrel</td>
			<td style="width:71px;">Tyco</td>
			<td style="width:119px;">58578-092</td>
			<td style="width:167px;">8g. Slide lid</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:71px;">BD Medical</td>
			<td style="width:119px;">BD305487</td>
			<td style="width:167px;">1.4 qt.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Chux</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82020-845</td>
			<td style="width:167px;">Absorbent bench underpads&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gloves</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">XSmall: 89038-267</td>
			<td style="width:167px;">Powder-free, latex-free nitrile gloves</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Small: 89038-268</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Medium: 89038-270</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Large: 89038-272</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">XLarge: 89038-274</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Hand sanitizer (e.g., Purell)</td>
			<td style="width:71px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td style="width:119px;">89040-210</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Alcohol wipes</td>
			<td style="width:71px;">WEBCOL and CURITY</td>
			<td style="width:119px;">82003-856</td>
			<td style="width:167px;">Prep pads</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gauze</td>
			<td style="width:71px;">VERSALON</td>
			<td style="width:119px;">82004-826</td>
			<td style="width:167px;">Non-woven sponges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Band-Aids</td>
			<td style="width:71px;">Nutramax Stat Strips</td>
			<td style="width:119px;">15431-475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Lancets</td>
			<td style="width:71px;">Owen Mumford</td>
			<td style="width:119px;">82028-060</td>
			<td style="width:167px;">3.0 mm, 21 ga.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Protein paper collection cards</td>
			<td style="width:71px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">Custom-build</td>
			<td style="width:167px;">903 Protein Saver Collection paper</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Desiccant</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">61161-319</td>
			<td style="width:167px;">Humidity sponges</td>
		</tr>
		<tr height="168">
			<td height="168" style="height:168px;width:216px;">Specimen bags</td>
			<td style="width:71px;">Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip</td>
			<td style="width:119px;">56766-370</td>
			<td style="width:167px;">6&#8221; x 9&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Specimen storage cooler</td>
			<td style="width:71px;">Igloo</td>
			<td style="width:119px;">Playmate Mini</td>
			<td style="width:167px;">4 qt.; direct from manufacturer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dried blood spot collection of health biomarkers to maximize participation in population studies

バイオマーカーは、病気、健康、暴露、または他の生物学的情報を直接測定した生物学的指標である。人口や社会科学では、バイオマーカーは、交通機関を得ることが容易であり、分析する必要があります。乾燥した血液スポットは、この必要性を満たし、高い応答率を持つフィールドに収集することができる。これらの要素は、縦断的研究において特に重要である自然減は避けることが重要であり、高い応答率が結果の解釈を改善する介入を含む設計しています。乾燥した血液スポットサンプルの収集は、静脈穿刺後、簡単、迅速、比較的痛みのない、低侵襲性であり、最小限のフィールドストレージ要件を必要とする（ すなわち、試料をすぐに凍結されると、前に安定冷凍庫環境で長期間保存することができる必要はないアッセイ）。サンプルは、コレステロール、C-反応性タンパク質、グリコシル化ヘモグロビン、多数のサイトカイン、およびoを含む異なる様々な検体のために分析することができるTHERの検体だけでなく、遺伝物質を提供する。いくつかの最近の研究で使用されるようなDBS収集が示されている。

<img alt="図1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1.jpg" /> 図1。乾燥血液スポットサンプル。コレクションカードは、乾燥の過程で4、有効な収集されたスポットに表示されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" target="_blank">拡大画像を表示するにはここをクリックしてください。</a> <img alt="図2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2.jpg" /> 図2。良い例と悪い乾燥血液スポットサンプルで落札 （右）と失敗（左）、DBSコレクションの結果を示す。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" target="_blank">大きなIMを見るにはここをクリックしてください</a>時代。 <img alt="図3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3.jpg" /> 図3。経営者の態度·従業心血管代謝疾患リスク6に関連付けられている慣行。この図は、バランス·家族の仕事に関連した温度管理の慣行が、従業員の心血管系の予測、バークマン、LF、バクストン、OM、Ertel、K.＆Okechukwuから変更されている拡張されたケア環境におけるリスクと睡眠時間労働衛生心理学 115 のジャーナル 、316から329（2010）。従業員の仕事と家庭のニーズを支援するための開放性と創造性の中間または低仕事と家庭のスコアを管理者に暴露され、従業員、2つ以上の心血管リスク（現在の喫煙、肥満、高血圧や誇大広告を持っていることの統計的に有意な増加オッズを持っているrtension、高コレステロール、高グリコシル化ヘモグロビン（HbとHbA1c値）または糖尿病の診断）。上部と中央のパネルは、乾燥血液スポット（これも確実に乾燥血液スポットで測定することができる）ケアデバイスの点によって評価ヘモグロビンA1Cによって評価総コレステロールの標準偏差平均値±を示している。下のパネルは、マネージャスコアにより心血管疾患のリスクを示しています。直接ケアを提供する看護師や他の従業員に限定され、分析がする仕事と家庭の問題に関連し、低創造性とオープン性を持つ管理職への曝露は、これらの個人のために特に重要であることを示している（または低WFのスコア= 6.4、P = 0.01）。すべてのモデルは、年齢、性別、賃金、教育、人種/民族、そして現場のために制御します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" target="_blank">拡大画像を表示するにはここをクリックしてください。</a>

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Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

バイオマーカーは、病気や健康の直接測定された生体指標である。人口や社会科学では、バイオマーカーは、交通機関を得ることが容易であり、分析する必要があります。乾燥した血液スポット（DBS）コレクションは、この必要性を満たし、高い応答率を持つフィールドで収集し、バイオマーカーの様々な分析することができる。

集団研究への参加を最大化するために健康バイオマーカーの血液スポットコレクション乾燥させ

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

36.0K ビュー.  Harvard School of Public Health. バイオマーカーは、病気や健康の直接測定された生体指標である。人口や社会科学では、バイオマーカーは、交通機関を得ることが容易であり、分析する必要があります。乾燥した血液スポット（DBS）コレクションは、この必要性を満たし、高い応答率を持つフィールドで収集し、バイオマーカーの様々な分析することができる。 

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Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

PTSDの、ニューラル血液学的および行動的相関関係を明らかにするための動物モデルにおけるバイオマーカー

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

医学

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Unbiased discovery proteomics strategies have the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve diagnostic and prognostic testing in a clinical setting and may help guide therapeutic interventions. When large numbers of candidate proteins are identified, it may be difficult to validate candidate biomarkers in a timely and efficient fashion from patient plasma samples that are event-driven, of finite volume and irreplaceable, such as at the onset of acute graft-versus-host disease (GVHD), a potentially life-threatening complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT).
Here we describe the process of performing commercially available ELISAs for six validated GVHD proteins: IL-2R&alpha;5, TNFR16, HGF7, IL-88, elafin2, and REG3&alpha;3 (also known as PAP1) in a sequential fashion to minimize freeze-thaw cycles, thawed plasma time and plasma usage. For this procedure we perform the ELISAs in sequential order as determined by sample dilution factor as established in our laboratory using manufacturer ELISA kits and protocols with minor adjustments to facilitate optimal sequential ELISA performance. The resulting plasma biomarker concentrations can then be compiled and analyzed for significant findings within a patient cohort. While these biomarkers are currently for research purposes only, their incorporation into clinical care is currently being investigated in clinical trials.
This technique can be applied to perform ELISAs for multiple proteins/cytokines of interest on the same sample(s) provided the samples do not need to be mixed with other reagents. If ELISA kits do not come with pre-coated plates, 96-well half-well plates or 384-well plates can be used to further minimize use of samples/reagents.

High throughput validation of multiple candidate biomarkers can be performed by sequential ELISA in order to minimize freeze/thaw cycles and use of precious plasma samples. Here, we demonstrate how to sequentially perform ELISAs for six different validated plasma biomarkers1-3 of graft-versus-host disease (GVHD)4 on the same plasma sample.

急性移植片対宿主病のバイオマーカーの検証のためのハイスループットシーケンシャルELISA

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

An Affordable HIV-1 Drug Resistance Monitoring Method for Resource Limited Settings

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in sub-Saharan Africa continue to expand, individuals on ART should be closely monitored for the emergence of drug resistance. Surveillance of transmitted drug resistance to track transmission of viral strains already resistant to ART is also critical. Unfortunately, drug resistance testing is still not readily accessible in resource limited settings, because genotyping is expensive and requires sophisticated laboratory and data management infrastructure. An open access genotypic drug resistance monitoring method to manage individuals and assess transmitted drug resistance is described. The method uses free open source software for the interpretation of drug resistance patterns and the generation of individual patient reports. The genotyping protocol has an amplification rate of greater than 95% for plasma samples with a viral load &#62;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The sensitivity decreases significantly for viral loads &#60;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The method described here was validated against a method of HIV-1 drug resistance testing approved by the United States Food and Drug Administration (FDA), the Viroseq genotyping method. Limitations of the method described here include the fact that it is not automated and that it also failed to amplify the circulating recombinant form CRF02_AG from a validation panel of samples, although it amplified subtypes A and B from the same panel.

Drug resistance testing for HIV-1 infected individuals failing antiretroviral therapy (ART) can guide future therapies and improve treatment outcomes. Optimizing individual and population health outcomes in high HIV prevalence but resource-limited settings will ultimately require affordable and accessible drug resistance genotyping and interpretation methods.

リソースの限定された設定のための手ごろな価格の、HIV-1薬剤耐性監視方法

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United States. Tacrolimus is a narrow therapeutic index drug and as such requires therapeutic drug monitoring and dose adjustment based on its whole blood trough concentrations. To facilitate home therapeutic drug and adherence monitoring, the collection of dried blood spots is an attractive concept. After a finger stick, the patient collects a blood drop on filter paper at home. After the blood is dried, it is mailed to the analytical laboratory where tacrolimus is quantified using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) in combination with a simple manual protein precipitation step and online column extraction.
For tacrolimus analysis, a 6-mm disc is punched from the saturated center of the blood spot. The blood spot is homogenized using a bullet blender and then proteins are precipitated with methanol/0.2 M ZnSO4 containing the internal standard D2,13C-tacrolimus. After vortexing and centrifugation, 100 &#181;l of supernatant is injected into an online extraction column and washed with 5 ml/min of 0.1 formic acid/acetonitrile (7:3, v:v) for 1 min. Hereafter, the switching valve is activated and the analytes are back-flushed onto the analytical column (and separated using a 0.1% formic acid/acetonitrile gradient). Tacrolimus is quantified in the positive multi reaction mode (MRM) using a tandem mass spectrometer.
The assay is linear from 1 to 50 ng/ml. Inter-assay variability (3.6%-6.1%) and accuracy (91.7%-101.6%) as assessed over 20 days meet acceptance criteria. Average extraction recovery is 95.5%. There are no relevant carry-over, matrix interferences and matrix effects. Tacrolimus is stable in dried blood spots at RT and at +4 &#176;C for 1 week. Extracted samples in the autosampler are stable at +4 &#176;C for at least 72 hr.

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

LC-MS / MSを用いて乾燥血液スポット上で免疫抑制タクロリムスの定量化

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of women are alive 5 years after diagnosis. The omentum is a preferred site of HGSC metastasis formation. Despite the clinical importance of this microenvironment, the contribution of omental adipose tissue to ovarian cancer progression remains understudied. Omental adipose is unusual in that it contains structures known as milky spots, which are comprised of B, T, and NK cells, macrophages, and progenitor cells surrounding dense nests of vasculature. Milky spots play a key role in the physiologic functions of the omentum, which are required for peritoneal homeostasis. We have shown that milky spots also promote ovarian cancer metastatic colonization of peritoneal adipose, a key step in the development of peritoneal metastases. Here we describe the approaches we developed to evaluate and quantify milky spots in peritoneal adipose and study their functional contribution to ovarian cancer cell metastatic colonization of omental tissues both in vivo and ex vivo. These approaches are generalizable to additional mouse models and cell lines, thus enabling the study of ovarian cancer metastasis formation from initial localization of cells to milky spot structures to the development of widespread peritoneal metastases.

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.

生体内および生体外では腹膜脂肪にミルキースポット構造の卵巣がん転移性コロニー形成を研究するためのアプローチで

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

A Method of Trigonometric Modelling of Seasonal Variation Demonstrated with Multiple Sclerosis Relapse Data

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to 55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 clinical centers across 20 countries located in both hemispheres. Central to the success of this method was the strategic use of plot analysis to guide and corroborate the statistical regression modelling. Initial plot analysis was necessary for establishing realistic hypotheses regarding the presence and structural form of seasonal and latitudinal influences on relapse probability and then testing the performance of the resultant models. Trigonometric regression was then necessary to quantify these relationships, adjust for important confounders and provide a measure of certainty as to how plausible these associations were. Synchronization of graphing techniques with regression modelling permitted a systematic refinement of models until best-fit convergence was achieved, enabling novel inferences to be made regarding the independent influence of both season and latitude in predicting relapse onset timing in MS. These methods have the potential for application across other complex disease and epidemiological phenomena suspected or known to vary systematically with season and/or geographic location.

Combining plot analysis with trigonometric regression is a robust method for exploring complex, cyclical phenomena such as relapse onset timing in multiple sclerosis (MS). This method enabled unbiased characterisation of seasonal trends in relapse onset permitting novel inferences around the influence of seasonal variation, ultraviolet radiation (UVR) and latitude.

多発性硬化症の再発のデータを用いて実証季節変動の三角モデリングの方法

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to  55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 ...

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring cardiomyocytes lost due to injury and disease. In contrast to the robust cardiac regeneration of certain lower vertebrates, adult mammalian hearts typically show minimal capacity for heart regeneration and repair. However, recent studies have sparked considerable scientific interest with the finding that, between postnatal day 1 to 7 (P1 to P7), the neonatal mouse heart retains significant regenerative potential after apical resection (i.e., surgical amputation and exposure of left ventricular apex). One major controversy over this finding might be due to the diverse surgery-related procedures used in efforts to replicate or expand upon this important finding. These instructions dynamically present the materials and methodology for apical resection in a mouse model. The salient steps of this rodent survival surgery involve hypothermia anesthesia, thoracotomy, surgical amputation of heart ventricular apex, and suture and recovery of mice. The approach described could expand the application of the apical resection mouse model for cardiovascular research.

A step-by-step video protocol of apical resection is demonstrated in this study. Apical resection is a recently highlighted surgical approach in mammalian heart regeneration research. This study may promote the application of apical resection as a standard methodology in research into the mechanism underlying heart regeneration.

アピカル切除マウスモデルは、初期の哺乳類の心臓の再生を研究するために

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

Assessment of Child Anthropometry in a Large Epidemiologic Study

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to understand health effects of child growth and adiposity. Gold standard methods of measuring adiposity, such as dual X-ray absorptiometry (DXA), may not be feasible in large field studies. Research staff can, however, complete anthropometric measurements, such as body circumferences and skinfold measurements, using inexpensive portable equipment. In this protocol we detail how to obtain manual anthropometric measurements from children, including standing and sitting height, weight, waist circumference, hip circumference, mid-upper arm circumference, triceps skinfold thickness, and subscapular skinfold thickness, and procedures to assess the quality of these measurements. To demonstrate accuracy of these measurements, among 1,110 school-aged children in the pre-birth cohort Project Viva we calculated Spearman correlation coefficients comparing manual anthropometric measurements with a gold standard measure of body fat, DXA fat mass1. To address reliability, we evaluate intra-rater technical error of measurement at a quality control session conducted on adult female volunteers.

In epidemiologic studies of children, well-trained research staff can accurately and precisely assess weight, height, sitting height, skinfold thicknesses, and body circumferences.

大規模な疫学研究における児童身体計測の評価

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

真空の血のコレクション システムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

ラットの血液サンプル コレクションの代替方法として鎖骨下静脈穿刺

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...