아동 건강의 유니스 케네디 슈라이버 국립 연구소 :이 작품은 건강의 국립 연구소와 미국 질병 통제 및 예방 센터를 통해 협력 합의에 의해 재정 지원 작업, 가족 및 건강 네트워크 (www.WorkFamilyHealthNetwork.org)에 의해 지원되었다 인간 발달 (그랜트 # U01HD051217, U01HD051218, U01HD051256, U01HD051276), 국립 연구소 (부여 # U01AG027669)를 노화에, 행동 과학 과학 연구, 국립 심장 폐 혈액 연구소 (R01HL107240), 그리고 직업에 대한 국립 연구소의 사무실 안전 보건 (그랜트 # U01OH008788, U01HD059773). 윌리엄 T. 그랜트 재단, 알프레드 P 슬로안 재단, 어린이와 가족을위한 관리의 보조금은 추가 자금을 제공하고 있습니다. 이 책의 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 이러한 기관 및 사무실의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

<ol>
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Biol. , (2012).</li></ol>

마츠 타니 미국의 과학 자문위원회에, 고문 및 딘스 모어 LLC에 대한 전문가 증인의 역할, 컨설팅을받은, (, ESRC-0977, ClinicalTrials.gov 식별자 NCT00900159 지금 Sunovion)​​ Orfeu 벅스 Sepracor Inc의에서 조사 개시 부여를 받았습니다 웨이크 포레스트 대학 의료 센터에서 요금.

생체 의학, 세포 생물학, 유전학, 심리학, 사회학, 인구 통계학, 사회 역학 등 다양한 분야에 걸쳐 매우 유용한 도구입니다. 각 분야 내에서 초기 단계의 타당성과 신뢰성 바이오 마커 연구는 숨겨진 질환의 위험을 모두 발견하고 건강 결과의 길이 방향 예측을 제공하는 데 사용되었다. 이러한 경우, 정확한 생체는, 내구성 (즉, 그들은 바이오 마커를 추출하기 위해 시료 채취 및 실험실 분석의 구현 사이의 지연을 살아남을 수 있음) (모델의 다양한 즉 유용) 다목적가 필요합니다. DBS 수집이 비교적 간단한 과정이지만, 몇 가지 기술은 수집 장소의 볼륨을 최대화 할 수 있습니다. 수집을 시작하기 전에, 참가자의 손을 보장하는 것은 따뜻하고, 손가락에 손상이 갈 일단 따라서 혈관이 팽창 된 것을, 혈액의 흐름을 도움이 될 것입니다. 손 온열 장치를 사용하거나 갖는참가자 따뜻한 물에 손을 실행할는이 과정에 도움이 될 수 있습니다. 수집 전에 손가락 착유 손가락 끝에 혈액을 뽑아 혈액 흐름을 돕기 위해 손을 따뜻하게하는 것이다. 착유는 연습을 향상시키는 과정이다. 수집가들이 가장 편안하고 효율적인 찾을 어떤 기술을 사용해야하지만 가장 일반적인 방법은 집의 반대 손으로 참가자의 손 착유 포함한다. 이 방법은 반대 손은 참가자의 손목을 안정시킬 수있는 동안 수집가의 샘이 깊은 참가자의 손바닥에 작동합니다. 한 참가자의 왼손 손가락에서 혈액을 수집 한 경우 예를 들어, 집은 오른손으로 자신의 왼쪽 손과 우유와 함께 참가자의 손목을 안정 것이다. 착유 오히려 손가락 끝으로 피를 뽑아 근육에 작업 손 위의 피부를 당겨, 확고한 그립을 사용하지 포함하는 동안 만든 일반적인 실수. 그것은 핀을 피하는 것도 중요칭 단단히 혈액의 흐름을 방해 둘, nonmilking 손으로 참가자의 손목을 재밌 착유 손 또는 손가락. 손가락을 천공 할 때, 확실하게 배출하기 전에 손가락으로 란셋을 눌러 가능한 한 구멍이 깊은합니다. 얕은 구멍이 적은 혈액의 흐름을 빠르게 응고가 발생합니다. 손가락을 천공 한 후, 신속하게 작업하는 열쇠입니다. 얇은 피가 쉽게 수집 및 큰 반점이 발생합니다. 천자 후 혈액이 응고 될 때까지 더욱 더 점성이됩니다. 카드 큰 부피의 핏자국을 수집하는 데 필요한 시간이 덜. 이상적으로 참가자의 혈액이 자신의 무게 떨어질 것이다 인하의 얇은 충분하지만, 어떤 사람의 혈액이 두껍거나 혈전 다른 사람보다는 빨리으로이 모든 참가자의 경우되지 않습니다. 피가 손가락에서 빠지지 너무 두꺼우면, 필터 카드 컬렉션의 혈액에 회부해야합니다. ㅁ혈액에 카드를 가져 오는 도중 그것은 오히려 그냥 카드에 혈액을 dabbing보다, 가능한 한 오랫동안을 위해 손가락에 매달려있는 동안 드롭과 접촉 카드를 유지하는 것이 중요합니다. 이 스폿의 크기를 최대화하는 손가락으로부터 혈액 풀을 도울 것이다. 이 기술은 피와 카드 사이의 접촉을 유지하기 위해 꾸준한 손을 필요로한다. 양손을 사용하여, 하나는 카드를 보유하는 참가자의 손을 견고하게하고, 서로 접촉에 두 손을 유지하는 것은 함께 카드와 혈액을 안정화하는 데 도움이 있습니다. 이러한 심 대사 위험 평가 등의 고급 연구 분야는 오랫동안 같은 C-반응성 단백질 (CRP), 인슐린 및 당화 혈색소 (당화 혈색소) 초기 위험 탐지 및 방지 노력뿐만 아니라, &quot;하드 엔드 포인트&quot;의 생체와 같은 생체에 의존 심혈관 질환 (CVD) 위험과 CVD 관련 사망 12. 임상 역학 자주 prospectivel하는 바이오 마커를 평가Y는 심장 질환과 타입 II 당뇨병과 같은 심 대사 위험의 결과를 예측하고있다. 아마도 가장 널리 프레이밍 햄 위험 점수, CVD (13)을 예측하는 유틸리티를 보여 주었다 혈압, HDL 콜레스테롤 수치, 총 콜레스테롤 수준을 포함하는 복합 모든 생체의 사용입니다. 그러나, 프레이밍 햄의 점수는 몇 가지 기술적 인 논쟁을 경험하고, 심장 혈관 연구에 관한보다 정확하고 특정 바이오 마커의 필요성을 제안, 건강, 사회적, 환경 적 요인을 연결에 초점을 맞춘 연구에 한계가있다. ELISA 또는 DBS 샘플의 분석이 가능하고 유사한 기술을 사용하여 시판 키트 수가있다. DBS 샘플의 분석에 필요한 솔루션 2로 건조 된 샘플을 가지고 특정 최적화 용출 단계를 사용합니다. 더 많은 분석을위한 분석은 1을 개발하고 있습니다로이 연구의 확장 영역입니다. 일 중이미 검증되고 널리 사용되는 전자 분석법은 콜레스테롤이, CRP 10,14,15, IgE16, EBV 9,15, 렙틴 (17), 그리고 18 cyotkines. 진단 검사 의학의 워싱턴 대학의학과 (UW 연구소 메드) 바이오 마커 연구소 (: 마크 Wener과 감독) 등의 DBS의 분석, 전문 실험실은 여러 가지가있을 수 있습니다. 오히려 외로운 바이오 마커보다 생체의 패널, 심장 혈관 및 당뇨병 연구 분야의 가장 유용하다는 것을 염두에 베어링, 생체는 유틸리티를 극대화하기 위해 상황에 맞는 다양한 요소와 함께 고려 될 필요가있다. 바이오 마커 연구에 재정적 및 데이터 수집 시간에, 그러나 비용이 많이들 수 있습니다. 위스콘신이 정확하고, 튼튼하고, 다목적 바이오 마커를 선택하는 것이 중요합니다 동안 따라서, 직장과 가족 바이오 마커 연구는 저렴 적절한 바이오 마커를 선택하면 실용성에 뿌리를해야하며, 신속하게 수집 할 수 있습니다일 용이성. 또한, 실제적인 고려는 종종 동시에 하나의 프로 시저 내에서 가격, 품질, 속도를 최대화 할 수없는 결과를 초래할. 여기에 필드와 인구 연구 내에서 건강 바이오 마커 연구의 다음 단계를 거짓말. 바이오 마커 연구 분야 극적인 성장기 중이다하지만 대부분의 작업은 아직 오는 것이다.

바이오 마커는 정상에서 임상 적으로 식별 가능한 질병 1에 기여할 수있는 병원성에 이르기까지 다양한 생물 학적 과정에 대한 중요한 정보를 제공 할 수 있습니다. 연구 설정에서 건조 핏자국 (DBS)은 전체 혈액에서 바이오 마커를 수집하는 방법으로 정맥 천자에 점점 더 선호되고있다. DBS 컬렉션은 정맥 천자 간단 비교적 고통이 덜 침습적이고, 최소한의 스토리지 요건 (즉, 샘플을 즉시 동결시키고 분석 이전에 안정 냉동실 환경에서 장기간 저장 될 수있는 필요로하지 않고) 요구한다. DBS 샘플은 콜레스테롤, C-반응성 단백질, 글리코 실화 헤모글로빈, 엡스타인 - 바 바이러스 항체 및 사이토 카인 등 여러 가지 분석 물질의 종류에 대해 시험 할 수있다. 정맥 천자는 오랫동안 혈액에서 바이오 마커의 수집을위한 황금 표준되었습니다. 그러나, 획득, 저장 및 혈액 샘플을 발송하는 adheren이 필요합니다특정 연구 프로토콜에 불가능할 수도 프로토콜 및 건강 코드들의 개수, 세륨. DBS 샘플링 절차가 간단하고 공식 인증을 필요로하지 않는 동안 phlebotomists에 공식적으로, 정맥 천자에 대한 인증을 받아야합니다. 정맥 혈액 수집은 또한 DBS 컬렉션 (즉, 바늘, 튜브, 회전식 문이)보다 더 많은 장비를 필요로하고, 더 후 수집 노력. 정맥 천자 샘플 및 -20 ° C 및 -70 °의 사이 냉동 원심 분리 (또는 소정 시간 동안 실온에서 서 통해 혈액 샘플에서 추출 즉 혈청 또는 혈장) C 즉시 분석 물질의 열화를 방지하기 위해 처리되어야 , DBS 샘플 단순히 공기 건조 허용되어야하고이 냉동실로 전송하기 전에, 회 이상 분석에 따라 실온에서 저장 될 수있다. DBS 샘플은 위에서 설명한 이유로 정맥 천자 샘플보다 수집 저렴. DBS 샘플도이전의 분석에 배송 및 보관 비용을 절감, 적은 공간을 차지합니다. 바이오 마커로 침의 사용은 biobehavioral 연구의 핵심이되고있다. 타액 바이오 마커를 수집 할 수있는 간단한 비 침습적 방법을 제공하고 코티솔 또는 코티닌 3-5을 측정하기위한 현장 작업에 대한 표준이되었습니다. 소변은 비 침습적으로 모아질 수 있고 멜라토닌 분석법 또는 독성에 대한 인구 수준의 연구에 사용될 수있는 다른 표본이다. 소변과 타액 모두 정직하고 참가자 스스로 완성 할 수있는 수집 절차를 제공하지만, 모든 분석은 이러한 미디어에 측정 할 수 있습니다. DBS는 정맥 천자에 간단하고 비용 효율적인 대안을 제공하고 필드에 점점 구현 연구 도구가되고 있으며 인구는 6 연구.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Asepti II Microbial Wipes</td>
			<td style="width:71px;">EcoLab</td>
			<td style="width:119px;">D12330345</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Bio-hazard waste bags</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">14220-092</td>
			<td style="width:167px;">High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bio-hazard waste barrel</td>
			<td style="width:71px;">Tyco</td>
			<td style="width:119px;">58578-092</td>
			<td style="width:167px;">8g. Slide lid</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:71px;">BD Medical</td>
			<td style="width:119px;">BD305487</td>
			<td style="width:167px;">1.4 qt.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Chux</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82020-845</td>
			<td style="width:167px;">Absorbent bench underpads&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gloves</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">XSmall: 89038-267</td>
			<td style="width:167px;">Powder-free, latex-free nitrile gloves</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Small: 89038-268</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Medium: 89038-270</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Large: 89038-272</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">XLarge: 89038-274</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Hand sanitizer (e.g., Purell)</td>
			<td style="width:71px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td style="width:119px;">89040-210</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Alcohol wipes</td>
			<td style="width:71px;">WEBCOL and CURITY</td>
			<td style="width:119px;">82003-856</td>
			<td style="width:167px;">Prep pads</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gauze</td>
			<td style="width:71px;">VERSALON</td>
			<td style="width:119px;">82004-826</td>
			<td style="width:167px;">Non-woven sponges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Band-Aids</td>
			<td style="width:71px;">Nutramax Stat Strips</td>
			<td style="width:119px;">15431-475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Lancets</td>
			<td style="width:71px;">Owen Mumford</td>
			<td style="width:119px;">82028-060</td>
			<td style="width:167px;">3.0 mm, 21 ga.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Protein paper collection cards</td>
			<td style="width:71px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">Custom-build</td>
			<td style="width:167px;">903 Protein Saver Collection paper</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Desiccant</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">61161-319</td>
			<td style="width:167px;">Humidity sponges</td>
		</tr>
		<tr height="168">
			<td height="168" style="height:168px;width:216px;">Specimen bags</td>
			<td style="width:71px;">Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip</td>
			<td style="width:119px;">56766-370</td>
			<td style="width:167px;">6&#8221; x 9&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Specimen storage cooler</td>
			<td style="width:71px;">Igloo</td>
			<td style="width:119px;">Playmate Mini</td>
			<td style="width:167px;">4 qt.; direct from manufacturer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dried blood spot collection of health biomarkers to maximize participation in population studies

바이오 마커는 질병, 건강, 노출, 또는 다른 생물학적 정보를 직접 측정 한 생물학적 지표입니다. 인구 및 사회 과학, 바이오 마커, 전송을 쉽게 얻을 수 있으며, 분석 할 필요가있다. 마른 핏자국이 필요를 충족, 높은 응답 속도로 현장에서 수집 할 수 있습니다. 이러한 요소는 마멸 방지하는 것이 중요 개입 등의 종단 연구 설계에서 특히 중요하며, 높은 응답 속도는 결과의 해석을 향상시킬 수 있습니다. 건조 혈액 반점 시료 채취 후 정맥 천자 간단 퀵 비교적 고통 덜 침습적이고, 최소 필드 저장 요건을 요구 (즉 샘플을 즉시 동결하지 않아도 안정된 냉동실 환경 이전에 오랜 기간 동안 저장 될 수있다 분석). 샘플은 콜레스테롤, C-반응성 단백질, 당화 혈색소, 수많은 사이토 카인, 및 O 등 다양한 분석의 다양한 분석 할 수 있습니다거기 분석뿐만 아니라 유전 물질을 제공한다. 최근의 여러 연구에서 사용으로 DBS의 컬렉션 묘사된다.

<img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1.jpg" /> 그림 1. 마른 핏자국 샘플. 콜렉션 카드가 건조하는 과정에서 네 개의 유효 수집 명소로 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" target="_blank">더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2.jpg" /> 그림 2. 좋은과 나쁜 말린 핏자국 샘플. 성공 (오른쪽)과 실패 (왼쪽) DBS 수집의 결과가 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" target="_blank">큰 메신저를 보려면 여기를 클릭하십시오</a>나이. <img alt="그림 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3.jpg" /> 그림 3. 관리자의 태도 및 직원 심 대사 질환의 위험 6과 관련된 사례.이 그림은 버크, LF, 벅스, OM, Ertel, K. &amp; Okechukwu, 균형 가족 사업과 관련하여 C. 관리자의 사례에서 수정 된 직원들의 심장 혈관을 예측 다양한 의료 설정에서 위험과 수면 기간 산업 보건 심리학 115, 316-329 (2010)의. 저널. 직원 &#39;일과 가정의 필요를 돕는에 대한 개방성과 창조성의 중간 또는 낮은 일 가족 점수로 관리자에 노출 된 직원, 두 개 이상의 심혈관 위험 (현재 흡연자, 비만, 고혈압 또는 과대 광고를 갖는 통계적으로 유의 한 증가 확률이rtension, 높은 콜레스테롤 수치, 높은 당화 혈색소 (헤모글로빈 A1C) 또는 당뇨병 진단). 최고 및 중간 패널은 건조 핏자국과 (도 안정적으로 건조 핏자국으로 측정 할 수있다) 의료 기기의 지점에 의해 평가 헤모글로빈 A1C에 의해 평가 총 콜레스테롤에 대한 표준 편차 ± 평균값을 묘사. 하단 패널은 관리자 별 심혈관 질환의 위험을 보여줍니다. 직접 치료를 제공하는 간호사 및 기타 직원으로 제한 분석하는 일 · 가정 문제와 관련된 낮은 창의력과 개방성을 가진 관리자에 노출이 개인에 특히 중요 할 수 있음을 나타냅니다 (OR 낮은 WF의 점수 = 6.4, P = 0.01). 모든 모델은 연령, 성별, 임금, 교육, 인종 / 민족, 그리고 현장에 대해 제어 할 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" target="_blank">더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

바이오 마커는 질병이나 건강의 직접 측정 한 생물학적 지표입니다. 인구 및 사회 과학, 바이오 마커, 전송을 쉽게 얻을 수 있으며, 분석 할 필요가있다. 말린 혈액 스팟 (DBS) 컬렉션이이 요구 사항을 충족, 높은 응답 속도로 현장에서 수집하고 생체의 다양한 분석 할 수 있습니다.

건강 바이오 마커의 혈액 스팟 컬렉션 인구 연구에의 참여를 극대화하기 위해 건조

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

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Research

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Medicine

36.1K 조회수.  Harvard School of Public Health.  바이오 마커는 질병이나 건강의 직접 측정 한 생물학적 지표입니다. 인구 및 사회 과학, 바이오 마커, 전송을 쉽게 얻을 수 있으며, 분석 할 필요가있다. 말린 혈액 스팟 (DBS) 컬렉션이이 요구 사항을 충족, 높은 응답 속도로 현장에서 수집하고 생체의 다양한 분석 할 수 있습니다. 

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Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

PTSD의, 신경 Hematologic, 그리고 행동 상관 관계를 누설하는 행위에 대해서는 동물 모델에서 생체

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

연구

의학

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Unbiased discovery proteomics strategies have the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve diagnostic and prognostic testing in a clinical setting and may help guide therapeutic interventions. When large numbers of candidate proteins are identified, it may be difficult to validate candidate biomarkers in a timely and efficient fashion from patient plasma samples that are event-driven, of finite volume and irreplaceable, such as at the onset of acute graft-versus-host disease (GVHD), a potentially life-threatening complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT).
Here we describe the process of performing commercially available ELISAs for six validated GVHD proteins: IL-2R&alpha;5, TNFR16, HGF7, IL-88, elafin2, and REG3&alpha;3 (also known as PAP1) in a sequential fashion to minimize freeze-thaw cycles, thawed plasma time and plasma usage. For this procedure we perform the ELISAs in sequential order as determined by sample dilution factor as established in our laboratory using manufacturer ELISA kits and protocols with minor adjustments to facilitate optimal sequential ELISA performance. The resulting plasma biomarker concentrations can then be compiled and analyzed for significant findings within a patient cohort. While these biomarkers are currently for research purposes only, their incorporation into clinical care is currently being investigated in clinical trials.
This technique can be applied to perform ELISAs for multiple proteins/cytokines of interest on the same sample(s) provided the samples do not need to be mixed with other reagents. If ELISA kits do not come with pre-coated plates, 96-well half-well plates or 384-well plates can be used to further minimize use of samples/reagents.

High throughput validation of multiple candidate biomarkers can be performed by sequential ELISA in order to minimize freeze/thaw cycles and use of precious plasma samples. Here, we demonstrate how to sequentially perform ELISAs for six different validated plasma biomarkers1-3 of graft-versus-host disease (GVHD)4 on the same plasma sample.

급성 이식 - 대 - 호스트 질병의 생체의 유효성을 검사에 대한 높은 처리량 순차적 엘리사

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

An Affordable HIV-1 Drug Resistance Monitoring Method for Resource Limited Settings

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in sub-Saharan Africa continue to expand, individuals on ART should be closely monitored for the emergence of drug resistance. Surveillance of transmitted drug resistance to track transmission of viral strains already resistant to ART is also critical. Unfortunately, drug resistance testing is still not readily accessible in resource limited settings, because genotyping is expensive and requires sophisticated laboratory and data management infrastructure. An open access genotypic drug resistance monitoring method to manage individuals and assess transmitted drug resistance is described. The method uses free open source software for the interpretation of drug resistance patterns and the generation of individual patient reports. The genotyping protocol has an amplification rate of greater than 95% for plasma samples with a viral load &#62;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The sensitivity decreases significantly for viral loads &#60;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The method described here was validated against a method of HIV-1 drug resistance testing approved by the United States Food and Drug Administration (FDA), the Viroseq genotyping method. Limitations of the method described here include the fact that it is not automated and that it also failed to amplify the circulating recombinant form CRF02_AG from a validation panel of samples, although it amplified subtypes A and B from the same panel.

Drug resistance testing for HIV-1 infected individuals failing antiretroviral therapy (ART) can guide future therapies and improve treatment outcomes. Optimizing individual and population health outcomes in high HIV prevalence but resource-limited settings will ultimately require affordable and accessible drug resistance genotyping and interpretation methods.

자원 제한 설정에 대한 경제적 인 HIV-1 약제 내성 모니터링 방법

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United States. Tacrolimus is a narrow therapeutic index drug and as such requires therapeutic drug monitoring and dose adjustment based on its whole blood trough concentrations. To facilitate home therapeutic drug and adherence monitoring, the collection of dried blood spots is an attractive concept. After a finger stick, the patient collects a blood drop on filter paper at home. After the blood is dried, it is mailed to the analytical laboratory where tacrolimus is quantified using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) in combination with a simple manual protein precipitation step and online column extraction.
For tacrolimus analysis, a 6-mm disc is punched from the saturated center of the blood spot. The blood spot is homogenized using a bullet blender and then proteins are precipitated with methanol/0.2 M ZnSO4 containing the internal standard D2,13C-tacrolimus. After vortexing and centrifugation, 100 &#181;l of supernatant is injected into an online extraction column and washed with 5 ml/min of 0.1 formic acid/acetonitrile (7:3, v:v) for 1 min. Hereafter, the switching valve is activated and the analytes are back-flushed onto the analytical column (and separated using a 0.1% formic acid/acetonitrile gradient). Tacrolimus is quantified in the positive multi reaction mode (MRM) using a tandem mass spectrometer.
The assay is linear from 1 to 50 ng/ml. Inter-assay variability (3.6%-6.1%) and accuracy (91.7%-101.6%) as assessed over 20 days meet acceptance criteria. Average extraction recovery is 95.5%. There are no relevant carry-over, matrix interferences and matrix effects. Tacrolimus is stable in dried blood spots at RT and at +4 &#176;C for 1 week. Extracted samples in the autosampler are stable at +4 &#176;C for at least 72 hr.

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

LC-MS / MS를 사용하여 건조 혈액 명소에 면역 억제제 타 크롤리 무스의 정량화

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of women are alive 5 years after diagnosis. The omentum is a preferred site of HGSC metastasis formation. Despite the clinical importance of this microenvironment, the contribution of omental adipose tissue to ovarian cancer progression remains understudied. Omental adipose is unusual in that it contains structures known as milky spots, which are comprised of B, T, and NK cells, macrophages, and progenitor cells surrounding dense nests of vasculature. Milky spots play a key role in the physiologic functions of the omentum, which are required for peritoneal homeostasis. We have shown that milky spots also promote ovarian cancer metastatic colonization of peritoneal adipose, a key step in the development of peritoneal metastases. Here we describe the approaches we developed to evaluate and quantify milky spots in peritoneal adipose and study their functional contribution to ovarian cancer cell metastatic colonization of omental tissues both in vivo and ex vivo. These approaches are generalizable to additional mouse models and cell lines, thus enabling the study of ovarian cancer metastasis formation from initial localization of cells to milky spot structures to the development of widespread peritoneal metastases.

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.

생체 내 및 생체 외 복막 지방이에 밀키 스팟 구조의 난소 암 전이성 식민지를 연구하는 접근 방식

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

A Method of Trigonometric Modelling of Seasonal Variation Demonstrated with Multiple Sclerosis Relapse Data

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to 55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 clinical centers across 20 countries located in both hemispheres. Central to the success of this method was the strategic use of plot analysis to guide and corroborate the statistical regression modelling. Initial plot analysis was necessary for establishing realistic hypotheses regarding the presence and structural form of seasonal and latitudinal influences on relapse probability and then testing the performance of the resultant models. Trigonometric regression was then necessary to quantify these relationships, adjust for important confounders and provide a measure of certainty as to how plausible these associations were. Synchronization of graphing techniques with regression modelling permitted a systematic refinement of models until best-fit convergence was achieved, enabling novel inferences to be made regarding the independent influence of both season and latitude in predicting relapse onset timing in MS. These methods have the potential for application across other complex disease and epidemiological phenomena suspected or known to vary systematically with season and/or geographic location.

Combining plot analysis with trigonometric regression is a robust method for exploring complex, cyclical phenomena such as relapse onset timing in multiple sclerosis (MS). This method enabled unbiased characterisation of seasonal trends in relapse onset permitting novel inferences around the influence of seasonal variation, ultraviolet radiation (UVR) and latitude.

다발성 경화증 재발 데이터로 입증 된 계절 변화의 삼각 모델링하는 방법

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to  55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 ...

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring cardiomyocytes lost due to injury and disease. In contrast to the robust cardiac regeneration of certain lower vertebrates, adult mammalian hearts typically show minimal capacity for heart regeneration and repair. However, recent studies have sparked considerable scientific interest with the finding that, between postnatal day 1 to 7 (P1 to P7), the neonatal mouse heart retains significant regenerative potential after apical resection (i.e., surgical amputation and exposure of left ventricular apex). One major controversy over this finding might be due to the diverse surgery-related procedures used in efforts to replicate or expand upon this important finding. These instructions dynamically present the materials and methodology for apical resection in a mouse model. The salient steps of this rodent survival surgery involve hypothermia anesthesia, thoracotomy, surgical amputation of heart ventricular apex, and suture and recovery of mice. The approach described could expand the application of the apical resection mouse model for cardiovascular research.

A step-by-step video protocol of apical resection is demonstrated in this study. Apical resection is a recently highlighted surgical approach in mammalian heart regeneration research. This study may promote the application of apical resection as a standard methodology in research into the mechanism underlying heart regeneration.

치근단 절제술 마우스 모델은 초기 포유류의 심장 재생을 연구하는

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

Assessment of Child Anthropometry in a Large Epidemiologic Study

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to understand health effects of child growth and adiposity. Gold standard methods of measuring adiposity, such as dual X-ray absorptiometry (DXA), may not be feasible in large field studies. Research staff can, however, complete anthropometric measurements, such as body circumferences and skinfold measurements, using inexpensive portable equipment. In this protocol we detail how to obtain manual anthropometric measurements from children, including standing and sitting height, weight, waist circumference, hip circumference, mid-upper arm circumference, triceps skinfold thickness, and subscapular skinfold thickness, and procedures to assess the quality of these measurements. To demonstrate accuracy of these measurements, among 1,110 school-aged children in the pre-birth cohort Project Viva we calculated Spearman correlation coefficients comparing manual anthropometric measurements with a gold standard measure of body fat, DXA fat mass1. To address reliability, we evaluate intra-rater technical error of measurement at a quality control session conducted on adult female volunteers.

In epidemiologic studies of children, well-trained research staff can accurately and precisely assess weight, height, sitting height, skinfold thicknesses, and body circumferences.

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

진공 혈액 수집 시스템으로 비 취 쥐의 꼬리 정 맥에서 혈액 컬렉션 반복

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

쥐에서 혈액 샘플 컬렉션의 대체 방법으로 빵 꾸 하 정 맥

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...