Ce travail a été soutenu par le travail, la famille et le Réseau de santé (www.WorkFamilyHealthNetwork.org), qui est financé par un accord de coopération à travers les National Institutes of Health et les Centers for Disease Control and Prevention: Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health et le développement humain (Grant # U01HD051217, U01HD051218, U01HD051256, U01HD051276), l&#39;Institut National sur le Vieillissement (Grant # U01AG027669), Bureau of Behavioral Science et recherche en sciences, le National Heart, Lung and Blood Institute (R01HL107240), et l&#39;Institut national d&#39;hygiène et sécurité et la santé (Grant # U01OH008788, U01HD059773). Subventions de la Fondation William T. Grant, Alfred Sloan Foundation P, et l&#39;Administration pour les enfants et les familles ont fourni des fonds supplémentaires. Le contenu de cette publication relève de la seule responsabilité des auteurs et ne représentent pas nécessairement les positions officielles de ces instituts et bureaux.

<ol>
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Biol. , (2012).</li></ol>

Orfeu Buxton a reçu une subvention menée à l&#39;initiative de Sepracor Inc (maintenant Sunovion; ESRC-0977, ClinicalTrials.gov Identifier NCT00900159); sert de consultant et témoin expert pour Dinsmore LLC, membre du Conseil consultatif scientifique de Matsutani Amérique, et a reçu le conseil frais du centre médical de Wake Forest University.

Les biomarqueurs sont des outils extrêmement utiles dans de multiples disciplines, comme la médecine, la biologie cellulaire, la génétique, la psychologie, la sociologie, la démographie et l&#39;épidémiologie sociale. Dans chaque discipline, la recherche de biomarqueurs de validité de phase précoce et la fiabilité a été utilisée afin de découvrir à la fois le risque de maladie cachée et fournir prédiction longitudinale des résultats de santé. Dans ces cas, les biomarqueurs qui sont exacts, durable (c&#39;est à dire qu&#39;ils peuvent survivre le décalage entre la collecte et la mise en œuvre de l&#39;analyse de laboratoire échantillon pour extraire le biomarqueur) et polyvalent (c.-à-utile dans une variété de modèles) sont requis. Tandis que la collecte DBS est une procédure relativement simple, plusieurs techniques peuvent aider à maximiser le volume de taches recueillies. Avant le début de la collecte, en veillant à la main d&#39;un participant est chaud, et donc que les vaisseaux sanguins sont dilatés, aidera la circulation sanguine une fois que le doigt est percé. Utilisation de chauffe-mains ou d&#39;avoir unparticipant exécuter leurs mains sous l&#39;eau chaude peut aider à ce processus. Traite le doigt avant la collecte va tirer le sang au bout du doigt et réchauffer la main pour aider la circulation sanguine. La traite est un processus qui s&#39;améliore avec la pratique. Les collectionneurs devraient utiliser quelque soit la technique, ils trouvent plus confortable et efficace, mais l&#39;approche la plus courante consiste à traire la main du participant avec la main opposée du collecteur. Cette méthode permettra de pouce du collectionneur de travailler en profondeur dans la paume de la participant tandis que la main opposée peut stabiliser le poignet du participant. Par exemple, si l&#39;on recueillaient le sang d&#39;un doigt sur la main gauche du participant, le collecteur devrait se stabiliser le poignet du participant avec la main gauche et le lait avec leur main droite. Erreurs courantes faites pendant la traite comprennent pas l&#39;aide d&#39;une prise ferme, tirant sur la peau au-dessus de la main de travail et non dans les muscles pour tirer le sang vers le bout du doigt. Il est également important d&#39;éviter la brocheching le doigt de la main de traite ou de préhension étroitement le poignet du participant avec la main nonmilking, les deux qui entravent la circulation sanguine. Lorsque la perforation du doigt, faire la ponction aussi profondément que possible en appuyant fermement la lancette dans le doigt avant rejet. Une ponction peu profond en résulte moins de la circulation sanguine et la coagulation plus rapide. Après perforation du doigt, travailler rapidement est la clé. Fluidifier le sang conduit à faciliter la collecte et grandes taches. Après la ponction, le sang devient plus visqueux et plus jusqu&#39;à ce que la coagulation. Le moins de temps nécessaire pour recueillir les taches de sang sur la carte plus leur volume. Idéalement le sang du participant sera suffisamment minces que les gouttes tomberont de leur propre poids, mais ce ne sera pas le cas pour tous les participants, que le sang de certaines personnes est plus épais ou des caillots plus vite que d&#39;autres. Si le sang est trop épais pour tomber du doigt, la carte de filtrage doit être portée à la collecte du sang pour. When apportant de la carte dans le sang, il est important de maintenir la carte en contact avec la goutte alors qu&#39;il est suspendu à partir du doigt le plus longtemps possible, plutôt que de simplement en tamponnant le sang à la carte. Cela aidera le sang de traction du doigt afin de maximiser la taille de la tache. Cette technique nécessite une main ferme pour maintenir le contact entre le sang et la carte. Avec les deux mains, l&#39;une pour stabiliser la main et un participants à tenir la carte, et en gardant les deux mains en contact avec une autre aide à stabiliser la carte et le sang ensemble. Domaines de recherche de pointe, tels que l&#39;évaluation du risque cardiométabolique, ont longtemps compté sur les biomarqueurs tels que la protéine C-réactive (CRP), l&#39;insuline, et l&#39;hémoglobine glycosylée (HbA1c) pour la détection précoce des risques et de prévention, ainsi que des biomarqueurs de &quot;points de terminaison dur&quot; pour les maladies cardiovasculaires (MCV) de risque et la mortalité des maladies cardiovasculaires associées 12. Épidémiologie clinique évalue souvent biomarqueurs pour prospectively prédire les résultats de risque cardiométabolique tels que les maladies cardiaques et le diabète de type II. Peut-être le plus largement utilisé de tous les biomarqueurs est le score de risque de Framingham, un composite qui comprend la pression artérielle, taux de cholestérol HDL et les niveaux totaux de cholestérols qui a démontré l&#39;utilité pour prédire les maladies cardiovasculaires 13. Cependant, le score de Framingham a connu des controverses techniques, et a des limites dans les études ont porté sur les liens entre les facteurs sociaux et environnementaux pour la santé, ce qui suggère la nécessité de biomarqueurs plus précises et spécifiques liées à la recherche cardiovasculaire. Il existe un certain nombre de kits ELISA disponibles dans le commerce en utilisant des techniques semblables ou disponibles pour l&#39;analyse d&#39;échantillons de DBS. Nécessaire pour le dosage d&#39;échantillons de DBS sont l&#39;utilisation de mesures spécifiques et optimisés élution pour amener les échantillons séchés dans la solution 2. C&#39;est un domaine de recherche en expansion que des essais pour plusieurs analytes sont actuellement en cours d&#39;élaboration 1. Parmi èmedosages e déjà validés et largement utilisés sont le taux de cholestérol 2, CRP 10,14,15, IgE16, EBV 9,15, la leptine 17, et cyotkines 18. Il ya un certain nombre de laboratoires spécialisés dans l&#39;analyse de la SCP, y compris l&#39;Université de Washington Département de médecine de laboratoire (UW Lab Med) biomarqueurs de laboratoire (Réalisateur: Mark Wener). Gardant à l&#39;esprit que d&#39;un panel de biomarqueurs, plutôt que d&#39;un biomarqueur solitaire, est le plus utile dans les domaines de la recherche cardiovasculaire et le diabète, les biomarqueurs doivent être considérés avec une variété de facteurs contextuels, afin de maximiser leur utilité. la recherche de biomarqueurs peut être coûteux mais, à la fois financièrement et en temps pour la collecte de données. Ainsi, alors qu&#39;il est essentiel de choisir des biomarqueurs qui sont exacts, durable et polyvalent, la recherche de biomarqueurs travail et la famille doit être enraciné dans pratique en sélectionnant biomarqueurs qui sont peu coûteux, appropriée, et peut être collecté rapidement wie facilité. De plus, des considérations pratiques donnent souvent lieu à une incapacité à optimiser simultanément le prix et la qualité, et la vitesse à l&#39;intérieur d&#39;une procédure. Ici se trouvent les prochaines étapes de la recherche de biomarqueurs de la santé au sein des études de terrain et de la population. Le champ de recherche de biomarqueurs est actuellement dans une période de croissance spectaculaire, mais la plupart du travail est encore à venir.

Les biomarqueurs peuvent fournir des informations précieuses sur les processus biologiques normaux ou pathogènes qui peuvent contribuer à la maladie cliniquement identifiables 1. Dans les milieux de la recherche, des taches de sang séché (DBS) sont de plus en plus préférée à une ponction veineuse comme une méthode de collecte des biomarqueurs dans le sang total. Collection DBS est simple, relativement indolore, moins invasive puis la ponction veineuse, et nécessite des exigences de stockage minimales (par exemple les échantillons n&#39;ont pas besoin d&#39;être immédiatement congelé et peut être stocké pendant une longue période de temps dans un milieu de congélation stable avant le dosage). Échantillons DBS peuvent être testés pour une variété d&#39;analytes différents, y compris le cholestérol, la protéine C-réactive, l&#39;hémoglobine glycosylée, les anticorps du virus d&#39;Epstein-Barr, et de plusieurs cytokines. Ponction veineuse a longtemps été la norme d&#39;or pour la collecte de biomarqueurs dans le sang. Toutefois, l&#39;obtention, le stockage et l&#39;expédition des échantillons de sang nécessite adherenCE à un certain nombre de protocoles et codes de santé, ce qui peut ne pas être possible dans certains protocoles de recherche. Phlebotomists doivent être officiellement certifiés pour la ponction veineuse, tandis que les procédures d&#39;échantillonnage SRD sont plus simples et ne nécessitent pas une certification officielle. Collecte de sang veineux nécessite également plus de matériel que le fait collection DBS (c.-à-aiguilles, tubes, tourniquets), et des efforts plus après la collecte. Des échantillons de ponction veineuse doivent être traités (par exemple le sérum ou le plasma extrait de l&#39;échantillon de sang par centrifugation ou par abandon à la température ambiante pendant une période de temps donnée) et on les congèle entre -20 ° C et -70 ° C immédiatement, afin d&#39;éviter la dégradation des analytes , tandis que les échantillons DBS doivent simplement être séchés à l&#39;air et peuvent être conservés à température ambiante pendant une semaine ou plus en fonction de l&#39;analyte, avant le transfert à un congélateur 2. Échantillons DBS sont moins coûteuses à collecter que les échantillons de ponction veineuse pour des raisons décrites ci-dessus. Échantillons DBS aussiprendre moins de place, réduisant les coûts de transport et de stockage avant le test. L&#39;utilisation de la salive comme biomarqueur est devenu essentiel dans les études biobehavioral. La salive est une méthode simple, non invasive pour recueillir des biomarqueurs et est devenu la norme pour les travaux sur le terrain visant à mesurer le cortisol ou la cotinine 3-5. L&#39;urine est un autre spécimen qui peuvent être recueillies de manière non invasive et peuvent être utilisés dans des études de niveau de la population pour les essais de la mélatonine ou de la toxicologie. Bien que l&#39;urine et la salive offrent simple des procédures de collecte qui sont en mesure de remplir par les participants eux-mêmes, tous les analytes peuvent être mesurés dans ces milieux. DBS offrent un moyen simple, rentable, alternative à la ponction veineuse et deviennent un outil de recherche de plus en plus mis en œuvre dans le domaine et étudie population 6.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Asepti II Microbial Wipes</td>
			<td style="width:71px;">EcoLab</td>
			<td style="width:119px;">D12330345</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Bio-hazard waste bags</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">14220-092</td>
			<td style="width:167px;">High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bio-hazard waste barrel</td>
			<td style="width:71px;">Tyco</td>
			<td style="width:119px;">58578-092</td>
			<td style="width:167px;">8g. Slide lid</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:71px;">BD Medical</td>
			<td style="width:119px;">BD305487</td>
			<td style="width:167px;">1.4 qt.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Chux</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82020-845</td>
			<td style="width:167px;">Absorbent bench underpads&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gloves</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">XSmall: 89038-267</td>
			<td style="width:167px;">Powder-free, latex-free nitrile gloves</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Small: 89038-268</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Medium: 89038-270</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Large: 89038-272</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">XLarge: 89038-274</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Hand sanitizer (e.g., Purell)</td>
			<td style="width:71px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td style="width:119px;">89040-210</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Alcohol wipes</td>
			<td style="width:71px;">WEBCOL and CURITY</td>
			<td style="width:119px;">82003-856</td>
			<td style="width:167px;">Prep pads</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gauze</td>
			<td style="width:71px;">VERSALON</td>
			<td style="width:119px;">82004-826</td>
			<td style="width:167px;">Non-woven sponges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Band-Aids</td>
			<td style="width:71px;">Nutramax Stat Strips</td>
			<td style="width:119px;">15431-475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Lancets</td>
			<td style="width:71px;">Owen Mumford</td>
			<td style="width:119px;">82028-060</td>
			<td style="width:167px;">3.0 mm, 21 ga.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Protein paper collection cards</td>
			<td style="width:71px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">Custom-build</td>
			<td style="width:167px;">903 Protein Saver Collection paper</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Desiccant</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">61161-319</td>
			<td style="width:167px;">Humidity sponges</td>
		</tr>
		<tr height="168">
			<td height="168" style="height:168px;width:216px;">Specimen bags</td>
			<td style="width:71px;">Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip</td>
			<td style="width:119px;">56766-370</td>
			<td style="width:167px;">6&#8221; x 9&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Specimen storage cooler</td>
			<td style="width:71px;">Igloo</td>
			<td style="width:119px;">Playmate Mini</td>
			<td style="width:167px;">4 qt.; direct from manufacturer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dried blood spot collection of health biomarkers to maximize participation in population studies

Les biomarqueurs sont des indicateurs biologiques directement mesurées de la maladie, la santé, les expositions, ou d&#39;autres informations biologiques. Dans la population et les sciences sociales, les biomarqueurs doivent être faciles à obtenir, le transport, et à analyser. Taches de sang séché répondre à ce besoin, et peuvent être recueillies sur le terrain avec des taux de réponse élevés. Ces éléments sont particulièrement importants dans la conception des études longitudinales, y compris des interventions où l&#39;attrition est essentielle pour éviter, et des taux de réponse élevés améliorent l&#39;interprétation des résultats. Collecte d&#39;échantillons secs de tache de sang est simple, rapide, relativement indolore, moins invasive, puis ponction veineuse, et nécessite des besoins de stockage de champ minimale (échantillons n&#39;ont pas besoin d&#39;être immédiatement congelé et peut être stocké pendant une longue période de temps dans un environnement de congélateur stable avant test). Les échantillons peuvent être analysés pour une variété d&#39;analytes différents, y compris le cholestérol, la protéine C-réactive, l&#39;hémoglobine glycosylée, de nombreuses cytokines, et outres analytes, ainsi que de fournir le matériel génétique. Collection DBS est dépeinte comme employé dans plusieurs études récentes.

<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1.jpg" /> Figure 1. Gouttes de sang séchées échantillon. Une carte de collection est représenté avec quatre taches recueillies valides dans le processus de séchage. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour agrandir l&#39;image.</a> <img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2.jpg" /> Figure 2. Bonne et mauvaise secs échantillons ponctuels de sang. Résultats de succès (à droite) et échec (à gauche) collection DBS sont présentés. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour agrandir l&#39;im</a>âge. <img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3.jpg" /> Figure 3. Des des attitudes et des pratiques associées à un risque employé de la maladie cardiométabolique 6 des gestionnaires. Ce chiffre a été modifié depuis Berkman, LF, Buxton, l&#39;OM, ​​Ertel, K. &amp; Okechukwu, les pratiques de C. Gestionnaire liés au travail familial équilibre prédisent cardiovasculaire des employés risque et la durée du sommeil en milieu de soins de longue durée. Journal de psychologie de la santé au travail 115, 316-329 (2010). Les employés exposés à des gestionnaires avec des scores travail-famille milieu ou bas de l&#39;ouverture et de la créativité pour aider avec le travail de leurs employés et des besoins de la famille, ont des cotes augmentation statistiquement significative d&#39;avoir deux ou plusieurs risques cardiovasculaires (fumeur actuel, l&#39;obésité, l&#39;hypertension artérielle ou battagertension, taux de cholestérol élevé, et une grande hémoglobine glycosylée (Hb A1C) ou le diagnostic de diabète). Panneaux supérieurs et intermédiaires représentent les valeurs moyennes ± écarts-types pour le cholestérol total évalué par taches de sang séché et Hb A1C évalué par point de dispositif de soins (qui peut également être mesurée de façon fiable par des taches de sang séché). Panneau inférieur montre que le risque de maladies cardio-vasculaires par le score de gestionnaire. L&#39;analyse est limitée aux infirmières et autres employés qui fournissent des soins directs indiquent que l&#39;exposition aux gestionnaires ayant peu de créativité et d&#39;ouverture des questions connexes à travail-famille peut être particulièrement important pour ces personnes (ou faible score WF = 6,4, p = 0,01). Tous les modèles de contrôle pour l&#39;âge, le sexe, le salaire, l&#39;éducation, la race / l&#39;origine ethnique, et lieu de travail. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour agrandir l&#39;image.</a>

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Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Les biomarqueurs sont des indicateurs biologiques directement mesurées de la maladie ou de la santé. Dans la population et les sciences sociales, les biomarqueurs doivent être faciles à obtenir, le transport, et à analyser. Séché tache de sang (DBS) collection répond à ce besoin, peuvent être recueillies sur le terrain avec des taux de réponse élevés et analysé pour une variété de biomarqueurs.

Séché Blood Spot Collection de biomarqueurs de santé pour maximiser la participation à des études de la population

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

36.1K vues.  Harvard School of Public Health.  Les biomarqueurs sont des indicateurs biologiques directement mesurées de la maladie ou de la santé. Dans la population et les sciences sociales, les biomarqueurs doivent être faciles à obtenir, le transport, et à analyser. Séché tache de sang (DBS) collection répond à ce besoin, peuvent être recueillies sur le terrain avec des taux de réponse élevés et analysé pour une variété de biomarqueurs. 

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Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

Biomarqueurs dans un modèle animal pour Révéler Corrélats neuronaux, hématologiques et du comportement de stress post-traumatique

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Recherche

Médecine

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Unbiased discovery proteomics strategies have the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve diagnostic and prognostic testing in a clinical setting and may help guide therapeutic interventions. When large numbers of candidate proteins are identified, it may be difficult to validate candidate biomarkers in a timely and efficient fashion from patient plasma samples that are event-driven, of finite volume and irreplaceable, such as at the onset of acute graft-versus-host disease (GVHD), a potentially life-threatening complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT).
Here we describe the process of performing commercially available ELISAs for six validated GVHD proteins: IL-2R&alpha;5, TNFR16, HGF7, IL-88, elafin2, and REG3&alpha;3 (also known as PAP1) in a sequential fashion to minimize freeze-thaw cycles, thawed plasma time and plasma usage. For this procedure we perform the ELISAs in sequential order as determined by sample dilution factor as established in our laboratory using manufacturer ELISA kits and protocols with minor adjustments to facilitate optimal sequential ELISA performance. The resulting plasma biomarker concentrations can then be compiled and analyzed for significant findings within a patient cohort. While these biomarkers are currently for research purposes only, their incorporation into clinical care is currently being investigated in clinical trials.
This technique can be applied to perform ELISAs for multiple proteins/cytokines of interest on the same sample(s) provided the samples do not need to be mixed with other reagents. If ELISA kits do not come with pre-coated plates, 96-well half-well plates or 384-well plates can be used to further minimize use of samples/reagents.

High throughput validation of multiple candidate biomarkers can be performed by sequential ELISA in order to minimize freeze/thaw cycles and use of precious plasma samples. Here, we demonstrate how to sequentially perform ELISAs for six different validated plasma biomarkers1-3 of graft-versus-host disease (GVHD)4 on the same plasma sample.

Haut débit séquentiel ELISA pour la validation des biomarqueurs de réaction aiguë du greffon contre l&#39;hôte

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

An Affordable HIV-1 Drug Resistance Monitoring Method for Resource Limited Settings

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in sub-Saharan Africa continue to expand, individuals on ART should be closely monitored for the emergence of drug resistance. Surveillance of transmitted drug resistance to track transmission of viral strains already resistant to ART is also critical. Unfortunately, drug resistance testing is still not readily accessible in resource limited settings, because genotyping is expensive and requires sophisticated laboratory and data management infrastructure. An open access genotypic drug resistance monitoring method to manage individuals and assess transmitted drug resistance is described. The method uses free open source software for the interpretation of drug resistance patterns and the generation of individual patient reports. The genotyping protocol has an amplification rate of greater than 95% for plasma samples with a viral load &#62;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The sensitivity decreases significantly for viral loads &#60;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The method described here was validated against a method of HIV-1 drug resistance testing approved by the United States Food and Drug Administration (FDA), the Viroseq genotyping method. Limitations of the method described here include the fact that it is not automated and that it also failed to amplify the circulating recombinant form CRF02_AG from a validation panel of samples, although it amplified subtypes A and B from the same panel.

Drug resistance testing for HIV-1 infected individuals failing antiretroviral therapy (ART) can guide future therapies and improve treatment outcomes. Optimizing individual and population health outcomes in high HIV prevalence but resource-limited settings will ultimately require affordable and accessible drug resistance genotyping and interpretation methods.

Une méthode de surveillance abordable VIH-1 pour la résistance aux médicaments à ressources limitées

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United States. Tacrolimus is a narrow therapeutic index drug and as such requires therapeutic drug monitoring and dose adjustment based on its whole blood trough concentrations. To facilitate home therapeutic drug and adherence monitoring, the collection of dried blood spots is an attractive concept. After a finger stick, the patient collects a blood drop on filter paper at home. After the blood is dried, it is mailed to the analytical laboratory where tacrolimus is quantified using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) in combination with a simple manual protein precipitation step and online column extraction.
For tacrolimus analysis, a 6-mm disc is punched from the saturated center of the blood spot. The blood spot is homogenized using a bullet blender and then proteins are precipitated with methanol/0.2 M ZnSO4 containing the internal standard D2,13C-tacrolimus. After vortexing and centrifugation, 100 &#181;l of supernatant is injected into an online extraction column and washed with 5 ml/min of 0.1 formic acid/acetonitrile (7:3, v:v) for 1 min. Hereafter, the switching valve is activated and the analytes are back-flushed onto the analytical column (and separated using a 0.1% formic acid/acetonitrile gradient). Tacrolimus is quantified in the positive multi reaction mode (MRM) using a tandem mass spectrometer.
The assay is linear from 1 to 50 ng/ml. Inter-assay variability (3.6%-6.1%) and accuracy (91.7%-101.6%) as assessed over 20 days meet acceptance criteria. Average extraction recovery is 95.5%. There are no relevant carry-over, matrix interferences and matrix effects. Tacrolimus is stable in dried blood spots at RT and at +4 &#176;C for 1 week. Extracted samples in the autosampler are stable at +4 &#176;C for at least 72 hr.

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

Quantification de l&#39;immunosuppresseur tacrolimus sur des taches de sang séché en utilisant LC-MS / MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of women are alive 5 years after diagnosis. The omentum is a preferred site of HGSC metastasis formation. Despite the clinical importance of this microenvironment, the contribution of omental adipose tissue to ovarian cancer progression remains understudied. Omental adipose is unusual in that it contains structures known as milky spots, which are comprised of B, T, and NK cells, macrophages, and progenitor cells surrounding dense nests of vasculature. Milky spots play a key role in the physiologic functions of the omentum, which are required for peritoneal homeostasis. We have shown that milky spots also promote ovarian cancer metastatic colonization of peritoneal adipose, a key step in the development of peritoneal metastases. Here we describe the approaches we developed to evaluate and quantify milky spots in peritoneal adipose and study their functional contribution to ovarian cancer cell metastatic colonization of omental tissues both in vivo and ex vivo. These approaches are generalizable to additional mouse models and cell lines, thus enabling the study of ovarian cancer metastasis formation from initial localization of cells to milky spot structures to the development of widespread peritoneal metastases.

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.

Dans vivo et ex vivo approches pour étudier Cancer de l&#39;ovaire métastatique colonisation de Lactée spot Structures en péritonéale adipeux

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

A Method of Trigonometric Modelling of Seasonal Variation Demonstrated with Multiple Sclerosis Relapse Data

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to 55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 clinical centers across 20 countries located in both hemispheres. Central to the success of this method was the strategic use of plot analysis to guide and corroborate the statistical regression modelling. Initial plot analysis was necessary for establishing realistic hypotheses regarding the presence and structural form of seasonal and latitudinal influences on relapse probability and then testing the performance of the resultant models. Trigonometric regression was then necessary to quantify these relationships, adjust for important confounders and provide a measure of certainty as to how plausible these associations were. Synchronization of graphing techniques with regression modelling permitted a systematic refinement of models until best-fit convergence was achieved, enabling novel inferences to be made regarding the independent influence of both season and latitude in predicting relapse onset timing in MS. These methods have the potential for application across other complex disease and epidemiological phenomena suspected or known to vary systematically with season and/or geographic location.

Combining plot analysis with trigonometric regression is a robust method for exploring complex, cyclical phenomena such as relapse onset timing in multiple sclerosis (MS). This method enabled unbiased characterisation of seasonal trends in relapse onset permitting novel inferences around the influence of seasonal variation, ultraviolet radiation (UVR) and latitude.

Une méthode de modélisation trigonométrique de variation saisonnière démontrée avec la sclérose en plaques Relapse données

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to  55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 ...

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring cardiomyocytes lost due to injury and disease. In contrast to the robust cardiac regeneration of certain lower vertebrates, adult mammalian hearts typically show minimal capacity for heart regeneration and repair. However, recent studies have sparked considerable scientific interest with the finding that, between postnatal day 1 to 7 (P1 to P7), the neonatal mouse heart retains significant regenerative potential after apical resection (i.e., surgical amputation and exposure of left ventricular apex). One major controversy over this finding might be due to the diverse surgery-related procedures used in efforts to replicate or expand upon this important finding. These instructions dynamically present the materials and methodology for apical resection in a mouse model. The salient steps of this rodent survival surgery involve hypothermia anesthesia, thoracotomy, surgical amputation of heart ventricular apex, and suture and recovery of mice. The approach described could expand the application of the apical resection mouse model for cardiovascular research.

A step-by-step video protocol of apical resection is demonstrated in this study. Apical resection is a recently highlighted surgical approach in mammalian heart regeneration research. This study may promote the application of apical resection as a standard methodology in research into the mechanism underlying heart regeneration.

Modèle apicale résection souris pour étude au début de régénération de coeur de mammifère

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

Assessment of Child Anthropometry in a Large Epidemiologic Study

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to understand health effects of child growth and adiposity. Gold standard methods of measuring adiposity, such as dual X-ray absorptiometry (DXA), may not be feasible in large field studies. Research staff can, however, complete anthropometric measurements, such as body circumferences and skinfold measurements, using inexpensive portable equipment. In this protocol we detail how to obtain manual anthropometric measurements from children, including standing and sitting height, weight, waist circumference, hip circumference, mid-upper arm circumference, triceps skinfold thickness, and subscapular skinfold thickness, and procedures to assess the quality of these measurements. To demonstrate accuracy of these measurements, among 1,110 school-aged children in the pre-birth cohort Project Viva we calculated Spearman correlation coefficients comparing manual anthropometric measurements with a gold standard measure of body fat, DXA fat mass1. To address reliability, we evaluate intra-rater technical error of measurement at a quality control session conducted on adult female volunteers.

In epidemiologic studies of children, well-trained research staff can accurately and precisely assess weight, height, sitting height, skinfold thicknesses, and body circumferences.

Évaluation de l&#39;anthropométrie des enfants dans une étude épidémiologique Grand

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

Répété de collecte de sang de la veine caudale des Rats Non anesthésiés avec un système de collecte de sang de vide

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Ponction de la veine sous-clavière comme méthode Alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...