The authors are solely responsible for the design and conduct of the presented study. Dr. Marbacher was supported by a grant from the Swiss National Science Foundation (PBSKP3-123454). The authors declare no conflict of interests. 
Author contributions to the study and manuscript preparation include the following. Conception and design: SM, JM, JF. Acquisition of data: SM, EA, JF. Analysis and interpretation of data: SM, JF, JM. Drafting the article: SM, JF, JM. Critically revising the article: JH, MN. Statistical analysis: SM, JF. Study supervision: JF, JH, MN.

注：Wistar系雄性ラット（平均体重：356±44グラム; 10〜14週齢）に22〜24°Cと12時間の明/ペレット食餌に自由に利用、水道水で明暗サイクルでの動物飼育室で飼育したまた、施設のガイドラインに準拠した人道的なケアを受けた。実験は見直され、フィンランドのヘルシンキ大学の動物福祉委員会によって承認された。 NOTE：メデトミジン塩酸塩（0.5mgの/ kg）および塩酸ケタミンの腹腔内注射（50mg / kg）の重量適応皮下注射によりラットを麻酔次のデモンストレーションでは私たちの外科的方法は以下の通りである。つま先ピンチ反射の欠如のための試験は、ラットが完全に麻酔をかけていることを確認します。どちらかアルコールや水に、例えばクロルヘキシジンのために、眼軟膏を適用し、手術部位をクリップして、適切な消毒剤で皮膚を洗浄してください。防護服、ヘッドカバーと顔を、手を洗うマスク、無菌手術用手袋。無菌手術の条件を維持するために外科助手助剤を有し、外科的特性（ 表1に記載されたように）文書化する。有害刺激（足指のピンチテスト）に呼吸数、心拍数、および反応に従うことによって手術中の麻酔15分毎の深さを監視する。ブプレノルフィンの皮下注射（0.03ミリグラム/ kg）は、術後鎮痛のために与えられ、必要に応じて12時間ごとに繰り返した。 （1）ハードウェア、消耗品、およびポジショニング<ol><li>小動物手術室静かな、無菌を維持し、23±3℃の室温を維持する。以下の最小限の機器が必要となる実験的な動脈瘤の手術を実行するには： <ol><li>理想的にアシスタントスコープとデジタル顕微鏡カメラを搭載したテーブルトップ手術用顕微鏡を使用してください。実験台を保護するために、非多孔質の再利用可能な操作面や洗浄可能機器の表面を使用してください。 </li><li&gt;このような皮膚の消毒剤、生理食塩水、より小さく、より大きなガーゼ綿棒と9-0マイクロ縫合糸、5-0非吸収性、および3-0吸収性縫合糸を含む縫合材料などの消耗品を準備します。 </li><li>外科はさみ、組織鉗子、軟部組織スプレッダまたは自己保持リトラクター、および2つのモスキート外科クランプ：以下の標準手術器具を使用してください。 </li><li>湾曲マイクロニードルホルダー、湾曲した1と2の直線マイクロピンセット、および直線または曲線microscissor：含ん基本顕​​微楽器セットを使用してください。 </li><li>手術中に測定器非粘着性、清潔を保つために滅菌生理食塩水で満たされた腎臓の皿に顕微楽器を保管してください。腎臓皿をゴム製マットまたはマイクロ器具の先端の損傷を防止するための外科手袋で埋められます。すべての電源が無菌であり、手順は実験動物での生存の手術のための現在の推奨に従って、無菌技術を用いて行われていることを確認します<sup&gt; 8-10。 </li><li>また、血管クリップアプリケータと3非外傷性の一時的な血管クランプを使用しています。これは、使用されるクランプは、ラット大動脈の非常に薄い壁への損傷を防ぐために、低閉鎖力を有することが重要である。また、半分ミリメートルスケールバーとルーラー、小さな色ゴムパッド、ショート鈍針を準備します。 </li><li> 、仰臥位でラットを置き、皮膚にストレッチや圧縮を適用せずに、両方のフロントを固定化し、サージカルテープで足後肢、そして背中の腰部の下に置くことによって厚いマーカーまたは焼灼ペンで自分の背中を曲げる。これは、顕微吻合を容易に大動脈、大動脈への曝露後腹膜およびアクセスを改善するために、できるだけ多くの腰椎前彎を得ることが重要である。この位置決めは、腹部大動脈瘤の作成をお勧めしますが、胸部移植片採取のために必要されていません。 </li></ol></li></ol> 2グラフト収穫<ol><li> Uファインダー全身麻酔、胸腔を開いて（グラフト虚血の開始時間）。ラットは、次の手順に進む前に応答しないことを確認するために有害なつま先のピンチを適用します。 midventral腹壁を通して切断し、ちょうど肝臓の上方にダイアフラムを識別し、胸郭へのアクセスを可能にするために、ダイアフラムの下部にある結合組織を切断する。ダウン大はさみ、鈍い側では、ただ1センチメートル左肋骨と胸郭の正中線の右側を通って切断し、胸腔を開く。肺が心臓の右側に動員される。ケタミンhydrochloride.Pulmonaryトランク、左鎖骨下静脈の心臓内注射で過剰投与によってラットを生け贄に捧げる、頭蓋大静脈を離れ、奇静脈、近位胸部大動脈の収穫を妨害する。 </li><li>尾は著名な静脈にマイクロはさみやマイクロピンセットを用いて、胸部下行大動脈の解剖を開始するには良いエントリポイントがあります。 </li><li>胸部大動脈bをトレース上向きにモスキート外科クランプで穏やか鈍後退し、切開によって大動脈弓に胸部の背側の壁からのACK。 </li><li>クランプした後、ハ​​サミで静脈を切った。静脈上のクランプを維持し、基礎となる大動脈弓を露出させるために開創として使用する。 </li><li>ちょうど大動脈を残す最初の肋間動脈の上に、非吸収性6-0絹結紮糸を配置します。 </li><li>ちょうど左鎖骨下動脈の下に下行大動脈を切断した後、合字、下記。トリミングは、垂直な標準化された動脈瘤の幾何学的形状を得るために行うことができ、または必要に応じて、動脈瘤と大動脈の軸との間の特定の角度を取得する。幅と長さの移植片を測定します。 注：収穫移植片は直ちにレシピエントラットに移植またはさらなるグラフト壁の脱細胞化を達成するために処理することができる。脱細胞化された移植片は、後日再注入（ 図1）まで-4摂氏温度で保存することができる。のTh動脈瘤壁の電子の脱細胞化は、11を拡大するために動脈瘤をかかりやすくすることが示されている。 </li></ol> 3グラフト脱細胞化<ol style="margin-left: 40px;"><li>フリーズドナー移植片はリン酸-4℃で緩衝生理食塩水。 </li><li>次の日には、移植片を解凍し、室温にて精製し、脱イオン水ですすぎ、0.1％ドデシル硫酸ナトリウム中で37℃で10時間インキュベートする。 </li><li>最後に、リン酸緩衝生理食塩水で再凍結、穏やかに撹拌しながらドデシル硫酸ナトリウム処理移植片を3回洗浄し、で維持-4℃〜使用するまで。 </li></ol> 4。動脈瘤の作成<ol style="margin-left: 40px;"><li>腹部大動脈の解剖<ol><li>動物を麻酔した後、手術部位から毛皮をクリップし、適切な消毒剤で皮膚を洗浄してください。前皮膚切開につま先ピンチ応答の欠如のためのテスト。私は性器に切開さ1cm近位を開始しますnはmidventral位置（操作開始時刻）。慎重に下にある筋肉から皮膚を分離する。胸骨下の2センチに終了解剖一つ。 </li><li>慎重にしっかりと根底にある臓器の障害を避けるために、基本的な腹部の筋肉を引き上げます。剣状突起に上向きに白線に沿った長手方向の切り込みを拡張し、膀胱のレベルで尾方向に終わる。 </li><li>静かに後腹膜腔へのアクセスを容易にするために、それを空に膀胱に圧力を加える。 </li><li>右または左に小腸、著名な盲腸を移動します。腹腔の左側下部にある、すなわち下行結腸大腸を識別します。 </li><li>背側体壁の広い露出を可能にするために小腸および頭蓋方向に下行結腸の間に靱帯を切った。離れて腸を保持するために、自己保持リトラクターを配置します。 </li><li>端側動脈瘤吻合iの理想的なロケーション腎臓および腸腰静脈間のレベルにあるのです。腹部大動脈は、脂肪組織内に埋め込まれた後腹膜に位置しています。解剖時には対になっほぼ透明尿管および精巣血管に特に注意を払う。 </li><li>腸のさらなる後退が必要な場合は、より大きなガーゼスワップを使用しています。ラットの腰の下に焼灼ペンまたは類似のオブジェクトを配置することにより、測位の間に誘導腰椎前彎は、大幅に腸後退の必要性を低減する。 </li><li>背側の体壁の腹側表面は、薄い壁側腹膜で覆われている。これを開くと、ちょうど下大動脈を可視化。隣接する大静脈から腹部大動脈を慎重にシャープで鈍的切開の間、血管壁への損傷を避ける唯一の外膜を持ってください。 </li><li>まれに、小さな腰動脈、腹部大動脈の背側表面からセグメント容器として生じると準備を妨害する。容器の連結および切断が旧姓です動脈瘤の縫合中に逆行性滲出を回避するためにDED。湾曲したマイクロ鉗子の使用は、深さの結紮糸の配置を容易にすることができる。 </li></ol></li><li>端側吻合<ol><li>腹部大動脈の下に着色されたゴム製のパッドを入れて、小さなガーゼ綿棒でそれをアップホルスター。計画された吻合部位のレベルでゆるい結合組織および外膜を除去します。 </li><li>最初に、その後、近位側吻合に腹部大動脈遠位クランプ（大動脈のクランプ開始時刻）。これは、容器をしっかり充填を確保し、その後の動脈切開を容易にします。 </li><li>直線または曲線のマイクロハサミのいずれかを使用して動脈切開を行います。マイクロ鉗子は、楕​​円形状を切り出す血管壁の非常に小さな部分をかざす。 </li><li>鈍な先端の針を用いて、両方向に生理食塩水で十分に動脈をフラッシュします。 </li><li> （動脈切開の近位端および遠位端でこの端側吻合の最初の2本の縫合糸を配置吻合開始時刻）。可能な限り、マイクロ鉗子で血管壁の把握は避けてください。各縫合糸は血管壁の全ての層を通って配置されていることを確認してください。 </li><li>どちら連続または中断縫合糸などの縫合を行います。中断縫合を選択した場合、最初の裏側9 o`clock縫合糸を配置します。その後の縫合糸は、非常に第1の縫合糸に隣接する出発離間させることができる。慎重に外膜をつかみ。内膜のいずれ絞り/把持を避けてください。 </li><li>後壁が終了すると、見当違いの縫合用吻合の管腔内の部分を確認してください。表側の同じ順序で同じ手順を実行します。縫合糸当たり3ノットの合計のうち、最初の事務所が、あまりにもタイトではないことを確認してください。 </li></ol></li><li>止血および閉鎖<ol><li>端部から側部に到る吻合を（エンド吻合時間）を完了した後、終了大動脈時間と終了グラフト虚血tiのクランプ（生理食塩水サイトをすすぎ、逆流を可能にするために、第1の遠位のクランプを取り外し私）。 </li><li>明らかな出血が余分なステッチが必要になる場合が逆流から発生した場合は（止血の開始時刻）。マイナーにじみ出るの場合​​には、ガーゼ綿棒の小片を使用して出血部位の上に穏やかな圧力で止血を達成。 </li><li>近位血管クランプを外し、もう一度吻合部位を洗浄し、動脈瘤ドームでの合字の残りの端を切り落とした。 </li><li>ピーク動脈の脈波の間の動脈瘤の体積増加を観察することにより、動脈瘤の開通性を確認してください。直接「搾乳テスト」を通じて遠位腹部動脈開通性を評価する。 </li><li>プラスチックシートと下に小さなガーゼ綿棒を削除します。作成した動脈瘤内の脈動血旋回がはっきりと見える。 </li><li>小さな染み出しがまだ存在する場合（止血の終了時刻）は、追加の止血のための脂肪組織またはSpongostanの小片を用いてその吻合部分の周りに縫合線を覆う。 </li><li>軟部組織スプレッダとガーゼ綿棒を削除します。背中を正しい位置にある小腸、盲腸、および脂肪量を配置します。 </li><li> 5-0、4-0、または3-0 3-0再吸収polyfilament縫合（終了動作時間）で連続縫合技術を用いて、皮膚創傷の閉鎖に続く吸収性または非吸収性縫合糸を用いて、正中線腹部の筋肉を閉じます。注：私たちの経験のラットでは非吸収性モノフィラメント縫合糸よりも優れた吸収性の皮膚縫合糸を容認。 </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Bouzeghrane, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+experimental+intracranial+aneurysm+models:+a+systematic+review.">In vivo experimental intracranial aneurysm models: a systematic review.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 31, 418-423 (2010).</li><li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+bilobular,+bisaccular,+and+broad-neck+microsurgical+aneurysm+formation+in+the+rabbit+bifurcation+model+for+the+study+of+upcoming+endovascular+techniques.+AJNR.">Complex bilobular, bisaccular, and broad-neck microsurgical aneurysm formation in the rabbit bifurcation model for the study of upcoming endovascular techniques. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+in-stent+restenosis:+rat+aortic+stenting.">A novel model of in-stent restenosis: rat aortic stenting.</a> Heart. 91, 393-395 (2005).</li><li>Marjamaa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occlusion+of+neck+remnant+in+experimental+rat+aneurysms+after+treatment+with+platinum-+or+polyglycolic-polylactic+acid-coated+coils.">Occlusion of neck remnant in experimental rat aneurysms after treatment with platinum- or polyglycolic-polylactic acid-coated coils.</a> Surg Neurol. 71, 458-465 (2009).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=with+the+support+of+the+NC3Rs.">with the support of the NC3Rs.</a> Aseptic Technique in Rodent Surgery. , (2014).</li><li>Bernal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+rodent+survival+surgery.">Guidelines for rodent survival surgery.</a> Journal of investigative surgery : the official journal of the Academy of Surgical Research. 22, 445-451 (2009).</li><li>Pritchett-Corning, K. 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著者は、使用される薬剤、材料、または装置のいずれにおいても、金融や商業の利害関係はない。

嚢状脳動脈瘤の複雑な生物学の理解の進歩は、動物モデル3,12,13で患者のサンプルおよび実験研究に実験室での研究によって補完疫学的および臨床データの分析に依存している。 ラットなどの小動物は、本質的に実験とハウジングの低コストに関連しており、特殊な装置の必要性が低減される。ラットでの側壁動脈瘤の顕微作成のための60分未満の平均運転時間の...

嚢状脳動脈瘤の破裂は、脳卒中、永続的な神経障害、または死亡につながる生命を脅かす出血を引き起こす。破裂は、どちらか顕微クリッピングや血管内動脈瘤の閉塞を防止することができる。動脈瘤の成長および破裂を防止するための医療処置は、未だ確立されていない。 嚢状動脈瘤のための実験モデルは、動脈瘤の生物学を研究し、新たな治療デバイスおよび戦略のテストのために必要である。これらの目的のために、異なる種におけるいくつかの異なるモデルが開発され、1が公開されている。ブタ、イヌ、ウサギにおける大きな動脈瘤モデルは、好ましくは、複雑な動脈瘤アーキテクチャ1,2に血管内イノベーションを試験するために使用される。マウス動脈瘤モデルは、他の一方で、遺伝的に改変された生物種3,4における試験研究の質問を可能にし、細胞および分子で動脈瘤生物学の明確化を促進大きな種1よりもはるかに優れレベル。血管内トランス-頸動脈及びトランス腸骨のデバイスの展開が大きくラット（&gt; 400〜500グラム）に制限されており、2.0ミリメートル、直径5,6において1.5ミリメートルより小さいステントが、ステントは、腹部大動脈への直接挿入することによっても配置することができる実験的な動脈瘤を保有するセグメント。ラット顕微腹部大動脈側壁動脈瘤モデルを用いた以前の研究は、テストの新規塞栓デバイスでの実現可能性と動脈瘤生物3,7の分子的基礎を研究する中でのその使用を実証した。 現在公開されている実験的な嚢状動脈瘤モデルの多くは、高価な機器、特殊環境（X線透視能力を持つ例えば 、滅菌手術室）、インターベンショナルラジオロジー·コンピタンス、または高価な種の使用を必要とする。これらの要件は、これらのモデルの広範な使用を制限し、そしてmは異なる研究室での異なるモデルを使用することにつながりakesデータ比較及びメタ分析不可能ではないにしても、難しい。単純堅牢で安価な実験モデルは、異なる機関から同等の結果を得るために、さまざまな研究室で標準化された方法で使用することができる標準化されたツールとして必要とされる。この目的のために、私たちはラット大動脈側壁嚢状動脈瘤モデルを作成しました。 このレポートの目的は、ステップ·バイ·ステップの手続きの手順、必要な機器についての情報を提示するために、ラットの腹部大動脈側壁瘤の成功顕微作成のための重要な解剖学的および外科的特性を議論することである。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="752">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:236px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Medetomidine</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any genericon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Ketamin</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any genericon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any genericon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">3-0 resorbable suture</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon Inc., USA</td>
			<td><a name="RANGE!C7">VCP824G</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">5-0 non absorbable suture</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon Inc., USA</td>
			<td>8618G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">6-0 non absorbable silk suture</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">C0761060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">9-0 nylon micro suture</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">G1118471</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Spongostan</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon Inc., USA</td>
			<td style="width:119px;">MS0002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Operation microscope</td>
			<td style="width:236px;">Leica , Germany</td>
			<td style="width:119px;">M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Digital microscope camera</td>
			<td style="width:236px;">Sony, Japan</td>
			<td style="width:119px;">SSC-DC58AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Standard surgical instruments</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">Multiple</td>
			<td>See protocol 1.4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Microsurgical instruments</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">Multiple</td>
			<td>See protocol 1.5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Vascular clip applicator</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Temporary vascular clamps</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">FT250T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Graph Pad Prism statistical software&#160;</td>
			<td style="width:236px;">GraphPad Software, San Diego, California, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>V 6.02 for Windows</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model

実験嚢状動脈瘤モデルは、彼らが臨床診療に導入される前に小説外科と血管内治療の選択肢とデバイスをテストするために必要である。さらに、実験モデルは、嚢状動脈瘤の破裂につながる複雑な動脈瘤生物学を解明するために必要とされる。 嚢状動脈瘤のための実験モデルのいくつかの異なる種類の異なる種で確立されている。彼らの多くは、しかし、彼らの広範な使用が制限される、特別なスキル、高価な機器、または特別な環境を必要とします。単純堅牢で安価な実験モデルは、さまざまな機関で標準化された方法で使用することができる標準化されたツールとして必要とされる。 顕微ラット腹部大動脈側壁動脈瘤モデルは、標準化された安価な新規な血管内治療戦略や動脈瘤生物学の分子的基礎の両方を研究する可能性を兼ね備えやり方。形状、サイズ、および形状によって標準化された移植片は、ドナーラットの胸部下行大動脈から採取した後、同系レシピエントラットに移植されています。動脈瘤は、連続して、端側を縫合または大動脈、腹部大動脈に9-0ナイロン縫合糸を中断されます。 私たちは、ステップバイステップの手続きの手順、必要な機器についての情報を提示し、ラットにおける腹部大動脈側壁瘤の成功顕微作成のための重要な解剖と手術の詳細を説明します。

パイロットシリーズは、14匹のラットを含んだ。その後84匹の動物の合計は、2012年追加の29の動物は、動脈嚢状移植片のためのドナーとして務め3月と9月の間に、いくつかの研究プロジェクトのために提示されたプロトコルに従って操作した。残りの実験を採取し、同じ性別、歪み、体重、および年齢のラットを用いた以前の実験から、記憶された前処理された移植片を用いて行った。 <p cl...

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The Helsinki Rat Microsurgical Sidewall Aneurysm Model

Microsurgical sidewall aneurysms in rats are created by end-to-side anastomosis of an aortic graft to the abdominal aorta. We present step-by-step instructions and discuss anatomical and surgical details for successful experimental saccular aneurysm creation.

ヘルシンキラット顕微側壁動脈瘤モデル

Experimental saccular aneurysm models are necessary for testing novel surgical and endovascular treatment options and devices before they are introduced ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

12.1K ビュー.  University of Helsinki, Helsinki, Finland. Microsurgical sidewall aneurysms in rats are created by end-to-side anastomosis of an aortic graft to the abdominal aorta. We present step-by-step instructions and discuss anatomical and surgical details for successful experimental saccular aneurysm creation.

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Microsurgical Venous Pouch Arterial-Bifurcation Aneurysms in the Rabbit Model: Technical Aspects

For ruptured human cerebral aneurysms endovascular embolization has become an equivalent alternative to aneurysm clipping.1 However, large clinical trials have shown disappointing long-term results with unacceptable high rates of aneurysm recanalization and delayed aneurysm rupture.2 To overcome these problems, animal experimental studies are crucial for the development of better endovascular devices.3-5
Several animal models in rats, rabbits, canines and swine are available.6-8 Comparisons of the different animal models showed the superiority of the rabbit model with regard to hemodynamics and comparability of the coagulation system and cost-effectiveness.9-11 
The venous pouch arterial bifurcation model in rabbits is formed by a venous pouch sutured into an artificially created true bifurcation of both common carotid arteries (CCA). The main advantage of this model are true bifurcational hemodynamics.12 The major drawbacks are the sofar high microsurgical technical demands and high morbidity and mortality rates of up to 50%.13 These limitations have resulted in less frequent use of this aneurysm model in the recent years. These shortcomings could be overcome with improved surgical procedures and modified peri- and postoperative analgetic management and anticoagulation.14-16 Our techniques reported in this paper demonstrate this optimized technique for microsurgical creation of arterial bifurcation aneurysms.

An optimized technique for the microsurgical creation of arterial bifurcation aneurysms mimicking bifurcation human cerebral aneurysms is described. A venous pouch is sutured into an artificially created true bifurcation of both common carotid arteries. Facilitated microsurgical techniques and aggressive postoperative anticoagulation and analgesia lead to minimized morbidity rates and high aneurysm patency rates.

ウサギモデルにおける顕微静脈ポーチ動脈 - 分岐瘤：技術的側面

For ruptured human cerebral aneurysms endovascular embolization has become an equivalent alternative to aneurysm clipping.1 However, large clinical trials ...

医学

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to affect the function of several organs and tissues and to contribute to the development of the many complications associated with obesity and the metabolic syndrome, including type 2 diabetes. To study the mechanisms by which excessive levels of glucose and fatty acids affect the pancreatic beta-cell and the secretion of insulin, we have established a chronic nutrient infusion model in the rat. The procedure consists of catheterizing the right jugular vein and left carotid artery under general anesthesia; allowing a 7-day recuperation period; connecting the catheters to the pumps using a swivel and counterweight system that enables the animal to move freely in the cage; and infusing glucose and/or Intralipid (a soybean oil emulsion which generates a mixture of approximately 80% unsaturated/20% saturated fatty acids when infused with heparin) for 72 hr. This model offers several advantages, including the possibility to finely modulate the target levels of circulating glucose and fatty acids; the option to co-infuse pharmacological compounds; and the relatively short time frame as opposed to dietary models. It can be used to examine the mechanisms of nutrient-induced dysfunction in a variety of organs and to test the effectiveness of drugs in this context.

A protocol for chronic infusions of glucose and Intralipid in rats is described. This model can be used to study the impact of nutrient excess on organ function and physiological parameters.

ラットにおける慢性栄養注入のモデル

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

A New Murine Model of Endovascular Aortic Aneurysm Repair

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of Abdominal aortic aneurysm (AAA) pathophysiology. There is no abdominal aortic aneurysm endograft exclusion model cheap and reproducible, which would allow deep investigations of AAA before and after treatment. We hereby describe how to induce, and then to exclude with a covered coronary stentgraft an abdominal aortic aneurysm in a rat. The well known elastase induced AAA model was first reported in 19901 in a rat, then described in mice2. Elastin degradation leads to dilation of the aorta with inflammatory infiltration of the abdominal wall and intra luminal thrombus, matching with human AAA. Endovascular exclusion with small covered stentgraft is then performed, excluding any interactions between circulating blood and the aneurysm thrombus. Appropriate exclusion and stentgraft patency is confirmed before euthanasia by an angiography thought the left carotid artery. Partial control of elastase diffusion makes aneurysm shape different for each animal. It is difficult to create an aneurysm, which will allow an appropriate length of aorta below the aneurysm for an easy stentgraft introduction, and with adequate proximal and distal neck to prevent endoleaks. Lots of failure can result to stentgraft introduction which sometimes lead to aorta tear with pain and troubles to stitch it, and endothelial damage with post op aorta thrombosis. Giving aspirin to rats before stentgraft implantation decreases failure rate without major hemorrhage. Clamping time activates neutrophils, endothelium and platelets, and may interfere with biological analysis.

Histological and biochemical modifications after aneurysm endograft exclusion are still unclear. We describe a new model of endograft implantation on a murine aneurysm. Through thrombus analysis with and without persistant circulating blood stream interface, and new endovascular biomaterials evaluation, this model will help to better understand endovascular aneurysm exclusion pathobiology.

血管内大動脈瘤の修復の新しいマウスモデル

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg dimethylnitrosamine (DMN), given intraperitoneally for three consecutive days per week. Intraperitoneal injections were performed in the fume hood as DMN is a known hepatoxin and carcinogen. The model has several advantages. Firstly, liver changes can be studied sequentially or at particular stages of interest. Secondly, the stage of liver disease can be monitored by measurement of serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) enzymes. Thirdly, the severity of liver damage at different stages can be confirmed by sacrifice of animals at designated time points, followed by histological examination of Masson&#39;s Trichome stained liver tissues. After four weeks of DMN dosing, the typical fibrosis score is 5 to 6 on the Ishak scale. The model can be reproduced consistently and has been widely used to assess the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

ラットにおけるジメチルニトロソアミン誘発性肝線維症モデル

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

角膜上皮摩耗眼はりのモデルとして角膜創傷治癒

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No current animal models of diabetes and oxygen-induced retinopathy develop the full-range progressive changes manifested in human proliferative diabetic retinopathy (PDR). Therefore, understanding of the disease pathogenesis and pathophysiology has relied largely on the use of histological sections and vitreous samples in approaches that only provide steady-state information on the involved pathogenic factors. Increasing evidence indicates that dynamic cell-cell and cell-extracellular matrix (ECM) interactions in the context of three-dimensional (3D) microenvironments are essential for the mechanistic and functional studies towards the development of new treatment strategies. Therefore, we hypothesized that the pathological fibrovascular tissue surgically excised from eyes with PDR could be utilized to reliably unravel the cellular and molecular mechanisms of this devastating disease and to test the potential for novel clinical interventions. Towards this end, we developed a novel method for 3D ex vivo culture of surgically-excised patient-derived fibrovascular tissue (FT), which will serve as a relevant model of human PDR pathophysiology. The FTs are dissected into explants and embedded in fibrin matrix for ex vivo culture and 3D characterization. Whole-mount immunofluorescence of the native FTs and end-point cultures allows thorough investigation of tissue composition and multicellular processes, highlighting the importance of 3D tissue-level characterization for uncovering relevant features of PDR pathophysiology. This model will allow the simultaneous assessment of molecular mechanisms, cellular/tissue processes and treatment responses in the complex context of dynamic biochemical and physical interactions within the PDR tissue architecture and microenvironment. Since this model recapitulates PDR pathophysiology, it will also be amenable for testing or developing new treatments.

Here, we present a protocol to study the pathophysiology of proliferative diabetic retinopathy by using patient-derived, surgically-excised, fibrovascular tissues for three-dimensional native tissue characterization and ex vivo culture. This ex vivo culture model is also amenable for testing or developing new treatments.

増殖糖尿病網膜症における線合併症の体外培養モデル

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. An aneurysm forms as a result of progressive weakening and eventual dilation of the aorta, which can rupture or tear once it reaches a critical diameter. Aneurysms of the descending aorta in the chest, called descending thoracic aortic aneurysms (dTAA), make up a large proportion of aneurysm cases in the United States. Uncontained dTAA rupture is almost universally lethal, and elective repair has a high rate of morbidity and mortality. The purpose of our model is to study dTAA specifically, to elucidate the pathophysiology of dTAA and to search for molecular targets to halt the growth or reduce the size of dTAA. By having a murine model to study thoracic pathology precisely, targeted therapies can be developed to specifically test dTAA. The method is based on the placement of porcine pancreatic elastase (PPE) directly on the outer murine aortic wall after surgical exposure. This creates a destructive and inflammatory reaction, which weakens the aortic wall and allows for aneurysm formation over weeks to months. Though murine models possess limitations, our dTAA model produces robust aneurysms of predictable size. Furthermore, this model can be used to test genetic and pharmaceutical targets which may arrest dTAA growth or prevent rupture. In human patients, interventions such as these could help avoid aneurysm rupture, and difficult surgical intervention.

We describe a surgical protocol to consistently induce robust descending thoracic aortic aneurysms in mice. The procedure involves left thoracotomy, thoracic aorta exposure, and placement of a sponge soaked in porcine pancreatic elastase on the aortic wall.

局所エラスターゼ誘発下下胸部大動脈瘤のマウス外科モデル

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Porcine Model of Infrarenal Abdominal Aortic Aneurysm

Large animal models to study abdominal aortic aneurysms are sparse. The purpose of this model is to create reproducible, clinically significant infrarenal abdominal aortic aneurysms (AAA) in swine. To achieve this, we use a combination of balloon angioplasty, elastase and collagenase, and a lysyl oxidase inhibitor, called &#946;-aminopropionitrile (BAPN), to create clinically significant infrarenal aortic aneurysms, analogous to human disease.
Noncastrated male swine are fed BAPN for 7 days prior to surgery to achieve a steady state in the blood. A midline laparotomy is performed and the infrarenal aorta is circumferentially dissected. An initial measurement is recorded prior to aneurysm induction with a combination of balloon angioplasty, elastase (500 units)/collagenase (8000 units) perfusion, and topical elastase application. Swine are fed BAPN daily until terminal procedure on either postoperative day 7, 14, or 28, at which time the aneurysm is measured, and tissue procured. BAPN + surgery pigs are compared to pigs that underwent surgery alone.
Swine treated with BAPN and surgery had a mean aortic dilation of 89.9% &#177; 47.4% at day 7, 105.4% &#177; 58.1% at day 14, and 113.5% &#177; 30.2% at day 28. Pigs treated with surgery alone had significantly smaller aneurysms compared to BAPN + surgery animals at day 28 (p &#60; 0.0003). The BAPN + surgery group had macroscopic and immunohistochemical evidence of end stage aneurysmal disease.
Clinically significant infrarenal AAA can be induced using balloon angioplasty, elastase/collagenase perfusion and topical application, supplemented with oral BAPN. This model creates large, clinically significant AAA with hallmarks of human disease. This has important implications for the elucidation of AAA pathogenesis and testing of novel therapies and devices for the treatment of AAA. Limitations of the model include variation in BAPN ingested by swine, quality of elastase perfusion, and cost of BAPN.&#160;

This novel model creates robust infrarenal abdominal aortic aneurysms in swine using a combination of balloon angioplasty, elastase/collagenase perfusion, topical elastase application, and oral compound &#946;-aminopropionitrile administration, which interferes with collagen cross-linking.

尿毛腹部大動脈瘤の豚モデル

Large animal models to study abdominal aortic aneurysms are sparse. The purpose of this model is to create reproducible, clinically significant infrarenal ...

Vessel-Sparing Microsurgical Longitudinal Intussusception Vasoepididymostomy to Treat Epididymal Obstructive Azoospermia

The epididymis is a common site of obstruction in obstructive azoospermia (OA). Vasoepididymostomy has become an important method for the treatment of epididymal OA since 2000. There are two challenges in classic microscopic vasoepididymostomy. First, anastomosis of the vas deferens and epididymis is performed with double-needle sutures. However, there is a lack of good-quality and cost-effective double-needle sutures in China, which leads to increased difficulty and poor success rates of anastomosis. Second, the separation of the vas deferens does not retain vasculature, although the vas deferens vasculature plays an important role in the blood supply to the vas deferens, epididymis, and testis. This affects the blood supply to the anastomotic area and epididymis.
Therefore, this team has made innovative improvements to address these problems. Good-quality, cost-effective, single-needle sutures, which are easy to purchase in China and other countries, were used in microsurgical longitudinal intussusception vasoepididymostomy. This can optimize the operation procedure and shorten the operation time while ensuring the success rate of the anastomosis. The surgical method of preserving the vas deferens vessels was innovatively proposed because the etiology of epididymal OA is mostly inflammatory in China. The protection of the blood supply to the vas deferens and epididymis is maximized using microsurgical forceps to separate and protect the vasculature. Patency reached 81.7% in the postoperative follow-up, indicating a better surgical treatment effect.

The present protocol describes a vessel-sparing, longitudinal intussusception vasoepididymostomy using readily available single-needle sutures in China, a safe and effective procedure, which may improve patients' patency and natural pregnancy rates.

精巣上体閉塞性無精子症を治療するための血管温存的顕微小外科縦型重積症血管隆起切除術

The epididymis is a common site of obstruction in obstructive azoospermia (OA). Vasoepididymostomy has become an important method for the treatment of ...