The authors are solely responsible for the design and conduct of the presented study. Dr. Marbacher was supported by a grant from the Swiss National Science Foundation (PBSKP3-123454). The authors declare no conflict of interests. 
Author contributions to the study and manuscript preparation include the following. Conception and design: SM, JM, JF. Acquisition of data: SM, EA, JF. Analysis and interpretation of data: SM, JF, JM. Drafting the article: SM, JF, JM. Critically revising the article: JH, MN. Statistical analysis: SM, JF. Study supervision: JF, JH, MN.

NOTA: Maschio ratti Wistar (media di peso corporeo: 356 ± 44 g; 10-14 settimane di età) sono stati alloggiati in camera animali a 22-24 ° C e dodici ore di luce / buio ciclo con libero accesso a pellet dieta, acqua di rubinetto normale e ha anche ricevuto la cura umana, in conformità con le linee guida istituzionali. Gli esperimenti sono stati esaminati e approvati dal Comitato per il benessere degli animali presso l&#39;Università di Helsinki, Finlandia. NOTA: Nella seguente dimostrazione nostro metodo chirurgico è il seguente: Anestetizzare ratto mediante iniezione sottocutanea peso adattato di medetomidina cloridrato (0,5 mg / kg) e iniezione intraperitoneale di ketamina cloridrato (50 mg / kg). Test per la mancanza di un riflesso punta pizzico per confermare che il ratto sia completamente anestetizzato. Applicare una pomata occhio, agganciare il sito chirurgico, e pulire la pelle con un disinfettante adatto, per esempio clorexidina, sia in alcool o acqua. Lavarsi le mani, indossare indumenti protettivi, un coperchio testa e visomaschera e guanti chirurgici sterili. Avere un aiuto chirurgico assistente nel mantenere condizioni asettiche chirurgia e per documentare le caratteristiche chirurgiche (come elencato nella tabella 1). Monitorare la profondità dell&#39;anestesia ogni 15 minuti durante l&#39;intervento seguendo frequenza respiratoria, frequenza cardiaca, e la reazione alla stimolazione nociva (tep pinch test). L&#39;iniezione sottocutanea di buprenorfina (0,03 mg / kg) è stato dato per l&#39;analgesia postoperatoria e ripetuto, se necessario, ogni 12 ore. 1 Hardware, Materiali di consumo, e Posizionamento <ol><li> Tenere il piccolo animale sala operatoria tranquilla, asettica, e mantenere la temperatura ambiente a 23 +/- 3 ° C. Per eseguire l&#39;intervento chirurgico aneurisma sperimentale la seguente attrezzatura minima necessaria: <ol><li> Utilizzare un tavolo microscopio operatorio perfettamente equipaggiato con un ambito assistente e la fotocamera microscopio digitale. Utilizzare superficie non porosa operativo riutilizzabile e lavabile superficie strumento per proteggere il banco di laboratorio. </li><li&gt; Preparare materiali di consumo come disinfettanti cutanei, soluzione salina fisiologica, tamponi di garza più piccoli e più grandi e materiale di sutura tra cui 9-0 micro-suture, un non-assorbibile 5-0 e 3-0 sutura assorbibile. </li><li> Utilizzare i seguenti strumenti chirurgici standard: forbici chirurgiche, pinze tessuto, spalmatore di tessuti molli o auto-divaricatore, e due pinze chirurgiche Mosquito. </li><li> Utilizzare un set di base microchirurgico strumento che include: supporto microneedle curva, una curva e due microforceps dritti, e un microscissor dritti o curvi. </li><li> Mantenere gli strumenti di microchirurgia in un piatto di rene riempito con soluzione salina sterile per mantenere lo strumento non colloso e pulite durante l&#39;intervento chirurgico. Il piatto di rene è imbottita con materassino di gomma o un guanto chirurgico per evitare di danneggiare le punte dei micro-strumenti. Assicurarsi che tutte le forniture sono sterili e la procedura viene eseguita con tecnica asettica secondo le attuali raccomandazioni per la chirurgia sopravvivenza su animali di laboratorio <sup&gt; 8-10. </li><li> Inoltre, utilizzare una clip applicatore vascolare e tre pinze vascolari temporanei atraumatica. È importante che i morsetti utilizzati hanno un potere di chiusura bassa per evitare lesioni alla parete molto sottile dell&#39;aorta di ratto. Anche preparare un righello con barre di mezzo millimetro di scala, un piccolo pad di gomma colorata, e un ago corto smussato. </li><li> Mettere i ratti in posizione supina, immobilizzare sia anteriori e posteriori zampe con nastro adesivo chirurgico senza applicare tratto o compressione per la pelle, e piegare la schiena con un pennarello o una penna di spessore cauterizzazione ponendolo sotto la zona lombare della schiena. È importante ottenere quante lordosi della colonna vertebrale lombare possibile al fine di migliorare l&#39;esposizione retroperitoneale e accesso alla sottorenale che facilita anastomosi microchirurgica. Questo posizionamento è consigliato per la creazione di aorta addominale aneurisma ma non necessaria per la raccolta graft toracico. </li></ol></li></ol> 2. innesto raccolta <ol><li> Uanestesia generale nder, aprire la cavità toracica (start innesto tempo di ischemia). Applicare un pizzico punta nociva per confermare che il ratto non risponde prima di procedere con i seguenti passi. Tagliare attraverso la parete addominale midventral, identificare il diaframma appena sopra il fegato, e tagliare il tessuto connettivo nella parte inferiore del diaframma per consentire l&#39;accesso alla gabbia toracica. Con forbici grandi, lato smussato verso il basso, tagliano costole solo uno centimetro a destra ea sinistra della linea mediana gabbia toracica e aprire la cavità toracica. I polmoni sono mobilitati per il lato destro del cuore. Sacrifica i ratti da sovradosaggio con iniezione intracardiaca di ketamina tronco hydrochloride.Pulmonary, vena succlavia sinistra, sinistra cranica vena cava, e la vena azygos interferire con la raccolta dell&#39;aorta toracica prossimale. </li><li> Caudale per le vene prominenti c&#39;è un buon punto di ingresso per iniziare la dissezione dell&#39;aorta toracica discendente utilizzando micro-forbici e microforceps. </li><li> Tracciare l&#39;aorta toracica back dalla parete dorsale del torace verso l&#39;alto per l&#39;arco aortico delicatamente retrazione schietto e dissezione con la pinza chirurgica Mosquito. </li><li> Morsetto e poi tagliare le vene con le forbici. Mantenere i morsetti sulle vene e utilizzare come un divaricatore per esporre l&#39;arco aortico sottostante. </li><li> Posizionare un non assorbibile 6-0 legatura di seta appena sopra la prima arteria intercostale lasciando l&#39;aorta. </li><li> Tagliare l&#39;aorta discendente appena sotto l&#39;arteria succlavia sinistra e poi sotto la legatura. Trimming può essere realizzata in modo da ottenere una geometria aneurisma standardizzato perpendicolare, o se necessario, per ottenere un determinato angolo tra l&#39;asse del aneurisma e l&#39;aorta. Misurare l&#39;innesto nella sua larghezza e lunghezza. NOTA: Raccolta innesti possono sia essere immediatamente trapiantate in ratti riceventi o ulteriormente elaborati per ottenere decellularization della parete dell&#39;innesto. Innesti decellularized possono essere conservati a -4 gradi Celsius fino a re-impianto in un secondo momento (Figura 1). The decellularization della parete dell&#39;aneurisma ha dimostrato di predisporre l&#39;aneurisma per ingrandire 11. </li></ol> 3 Graft Decellularization <ol style="margin-left: 40px;"><li> Innesti donatori congelare in tampone fosfato a -4 ° C. </li><li> Il giorno successivo, scongelare gli innesti, sciacquare con acqua depurata e deionizzata a temperatura ambiente, e incubare per 10 ore a 37 ° C nel 0,1% sodio dodecil solfato. </li><li> Infine, lavare gli innesti solfato trattati con sodio dodecil tre volte con agitazione, ricongelare in tampone fosfato, e mantenerlo a -4 ° C fino al momento dell&#39;uso. </li></ol> 4. Aneurisma Creation <ol style="margin-left: 40px;"><li> Dissezione della Aorta addominale <ol><li> Dopo che l&#39;animale è stato anestetizzato, agganciare il pelo dal sito chirurgico e pulire la pelle con un disinfettante idoneo. Test per la mancanza di una risposta toe-pinch prima incisione cutanea. Avviare l&#39;incisione prossimale 1cm a genitali in posizione midventral (ora di inizio dell&#39;operazione). Separare con cura la pelle dai muscoli sottostanti. Fine dissezione 1-2 centimetri sotto lo sterno. </li><li> Cautela ma con decisione tirare i muscoli addominali sottostanti per evitare danni agli organi sottostanti. Estrarre il taglio longitudinale lungo la linea alba verso l&#39;alto per il processo xifoideo e terminare in direzione caudale a livello della vescica. </li><li> Esercitare una leggera pressione sulla vescica per svuotarla al fine di agevolare l&#39;accesso allo spazio retroperitoneale. </li><li> Spostare l&#39;intestino tenue e il cieco di primo piano a destra oa sinistra. Identificare l&#39;intestino crasso e cioè del colon discendente in basso a sinistra della cavità addominale. </li><li> Tagliare il legamento tra tenue e il colon discendente in direzione craniale per consentire più ampia esposizione della parete dorsale del corpo. Posizionare un divaricatore auto-mantenendo per contenere le viscere a parte. </li><li> La posizione ideale di end-to-side aneurisma anastomosi is trova al livello tra la renale e ileolombare vene. L&#39;aorta addominale si trova retroperitoneale incorporato nel tessuto adiposo. Durante la dissezione prestare particolare attenzione alle coppie di quasi trasparenti ureteri e vasi testicolari. </li><li> Se è necessaria ulteriore retrazione di intestino, utilizzare grandi garza swap. La lordosi della colonna lombare indotta durante il posizionamento mettendo una penna cauterizzazione o un oggetto simile sotto la parte posteriore inferiore del ratto, riduce significativamente la necessità di intestino retrazione. </li><li> La superficie ventrale della parete dorsale del corpo è coperto con una peritoneo parietale sottile. Una volta che questo viene aperto, visualizza l&#39;aorta appena sotto. Durante attenta dissezione acuta e smussato dell&#39;aorta addominale dalle grandi vene adiacenti cogliere solo l&#39;avventizia per evitare danni alla parete del vaso. </li><li> Raramente, piccole arterie lombari nascono come vaso segmentale dalla superficie dorsale dell&#39;aorta addominale e interferiscono con la preparazione. Legatura e taglio della nave è needed per evitare stillicidio retrograda durante aneurisma sutura. L&#39;utilizzo di curve micro-pinza può facilitare il posizionamento legatura in profondità. </li></ol></li><li> End-to-side Anastomosi <ol><li> Mettere un pad in gomma colorata sotto l&#39;aorta addominale e rivestire con un piccolo tampone di garza. Rimuovere tessuto connettivo lasso e avventizia a livello del sito di anastomosi previsto. </li><li> Bloccare l&#39;aorta addominale distale al anastomosi prima, poi prossimale (ora di inizio clampaggio aortico). Questo assicura un riempimento fermo della nave e facilita la successiva arteriotomia. </li><li> Eseguire il arteriotomia utilizzando sia micro-forbici diritte o curve. Un micro-pinza detiene un pezzo molto piccolo della parete del vaso di ritagliare una forma ellittica. </li><li> Lavare accuratamente l&#39;arteria con soluzione fisiologica in entrambe le direzioni utilizzando un ago a punta smussata. </li><li> Mettere i primi due punti di sutura di questo anastomosi end-to-side alla fine prossimale e distale del arteriotomia (ora di inizio anastomosi). Evitare di afferrare della parete dei vasi con le micro-pinza quando possibile. Assicurarsi che ogni sutura viene inserito attraverso tutti gli strati della parete del vaso. </li><li> Eseguire la sutura sia come suture continue o interrotte. Se si sceglie di sutura interrotta poi posizionare il retro nove o`clock sutura prima. Suture successive possono essere distanziate di partenza adiacente al primo sutura. Afferrare con attenzione l&#39;avventizia. Evitare qualsiasi spremitura / afferrare dell&#39;intima. </li><li> Quando la parete di fondo è finito, controllare la parte endoluminale della anastomosi per suture fuori luogo. Eseguire le stesse procedure nello stesso ordine dal lato anteriore. Assicurarsi che la prima di un totale di tre nodi per sutura è duro ma non troppo stretto. </li></ol></li><li> Emostasi e chiusura <ol><li> Dopo la fine di anastomosi lato è completata (tempo di anastomosi termino), sciacquare il sito con soluzione salina e rimuovere il morsetto distale prima per consentire il riflusso (fine aortica serraggio tempo e la fine del trapianto ischemia time). </li><li> Se l&#39;emorragia evidente si verifica da riflusso un punto in più può essere necessaria (tempo di emostasi cominciare). In caso di stillicidio minore, ottenere emostasi con una leggera pressione sul sito di sanguinamento con un piccolo pezzo di un tampone di garza. </li><li> Rimuovere il morsetto vascolare prossimale, sciacquare il sito anastomosi una volta di più, e tagliare le rimanenti estremità della legatura alla cupola aneurisma. </li><li> Confermare pervietà dell&#39;aneurisma mediante l&#39;osservazione di aumento di volume dell&#39;aneurisma durante il picco dell&#39;onda di polso arterioso. Valutare distale dell&#39;arteria addominale pervietà attraverso la diretta &quot;test di mungitura&quot;. </li><li> Rimuovere il foglio di plastica e il piccolo tampone di garza sotto. Il vortice di sangue pulsante all&#39;interno dell&#39;aneurisma creato è chiaramente visibile. </li><li> Coprire linee di sutura intorno alla anastomosi con piccoli pezzi di tessuto adiposo o Spongostan per emostasi supplementare se piccolo stillicidio è ancora presente (ora di fine della emostasi). </li><li> Rimuovere i tessuti molli spalmatore e tamponi di garza.Posizionare l&#39;intestino tenue, il cieco, e la massa grassa di nuovo nella loro posizione corretta. </li><li> Chiudere i muscoli addominali della linea mediana con 5-0, 4-0, o 3-0 suture riassorbibili o non riassorbibili seguiti da pelle chiusura della ferita con tecnica di sutura continua con 3-0 sutura riassorbibile polifilamento (tempo di funzionamento di fine). Nota: Nella nostra esperienza ratti tollerati suture riassorbibili pelle meglio di suture monofilamento non assorbibili. </li></ol></li></ol>

<ol>
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AJNR.</a> American journal of neuroradiology. 32, 772-777 (2011).</li><li>Frosen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mural+and+bone+marrow-derived+neointimal+cells+to+thrombus+organization+and+wall+remodeling+in+a+microsurgical+murine+saccular+aneurysm+model.">Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model.</a> Neurosurgery. 58, 936-944 (2006).</li><li>Marjamaa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deletion+in+the+first+intron+of+the+Col1a1+gene+develop+dissection+and+rupture+of+aorta+in+the+absence+of+aneurysms:+high-resolution+magnetic+resonance+imaging.">Mice with a deletion in the first intron of the Col1a1 gene develop dissection and rupture of aorta in the absence of aneurysms: high-resolution magnetic resonance imaging.</a> at 4.7 T, of the aorta and cerebral arteries. 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Gli autori non hanno alcun interesse finanziario o commerciale in uno qualsiasi dei farmaci, materiali o attrezzature utilizzate.

I progressi nella nostra comprensione della complessa biologia di sacciforme dell&#39;arteria cerebrale aneurisma dipende analisi dei dati epidemiologici e clinici, integrati da studi di laboratorio su campioni di pazienti e lavori sperimentali in modelli animali 3,12,13. Piccoli animali come il topo sono intrinsecamente associati a minori costi di esperimenti e abitazioni, e la necessità di attrezzature specializzate ridotti. Un tempo medio di funzionamento totale di meno di 60 ...

La rottura di un aneurisma sacciforme dell&#39;arteria cerebrale provoca emorragia pericolosa per la vita che porta a ictus, danni neurologici permanenti, o la morte. La rottura può essere prevenuta o clipping microchirurgica o endovascolare dell&#39;aneurisma occlusione. Non è stato ancora istituito un trattamento medico per prevenire la crescita dell&#39;aneurisma e la rottura. Sono necessari modelli sperimentali per aneurismi sacciformi per studiare la biologia degli aneurismi arteriosi e per la sperimentazione di dispositivi terapeutici e le strategie. Per questi scopi, diversi modelli in diverse specie sono stati sviluppati e pubblicati 1. Modelli aneurisma più grandi in maiali, cani e conigli sono preferibilmente utilizzati per testare le innovazioni endovascolari in architettura complessa aneurisma 1,2. Modelli murini aneurisma, d&#39;altro canto, consentono test domande di ricerca di specie geneticamente modificate 3,4 e facilitare il chiarimento di aneurisma biologia a livello cellulare e molecolarelivello molto meglio di specie più grandi 1. Anche se endovascolare trans-carotideo e la distribuzione dispositivo trans-iliaca è limitato ai ratti più grandi (&gt; 400-500 g) e stent più piccolo di 2,0 mm e 1,5 mm di diametro di 5,6, stent possono anche essere collocati attraverso l&#39;inserimento diretto nel dell&#39;aorta addominale segmento di ospitare gli aneurismi sperimentali. Impieghi precedenti utilizzando il ratto microchirurgico addominale fianco aortico modello aneurisma dimostrato la sua fattibilità in dispositivi embolici test romanzo e il suo uso nello studio delle basi molecolari di aneurisma biologia 3,7. Molti dei modelli sperimentali aneurisma sacciforme attualmente pubblicati richiedono costose attrezzature, ambienti particolari (ad esempio sale operatorie sterili con capacità di fluoroscopia), la competenza radiologia interventistica, o l&#39;uso di specie costosi. Questi requisiti limitano l&#39;uso diffuso di questi modelli, e portano a l&#39;uso di modelli diversi in diversi laboratori, che mfiocchi confronto dei dati e meta-analisi di difficile, se non impossibile. Un modello sperimentale semplice, robusto ed economico è necessario come strumento standardizzato che può essere utilizzato in modo standardizzato in vari laboratori al fine di ottenere risultati comparabili da varie istituzioni. A questo scopo, abbiamo creato l&#39;aorta fianco arteriosa sacculare modello aneurisma ratto. Lo scopo di questo rapporto è quello di presentare passo-passo le istruzioni procedurali, le informazioni sulle attrezzature necessarie, e per discutere importanti caratteristiche anatomiche e chirurgiche per il successo creazione microchirurgico di aneurismi aortici addominali laterali nel ratto.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="752">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:236px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Medetomidine</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any genericon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Ketamin</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any genericon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any genericon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Sodium dodecyl sulfate (0.1%)</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">3-0 resorbable suture</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon Inc., USA</td>
			<td><a name="RANGE!C7">VCP824G</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">5-0 non absorbable suture</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon Inc., USA</td>
			<td>8618G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">6-0 non absorbable silk suture</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">C0761060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">9-0 nylon micro suture</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">G1118471</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Spongostan</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon Inc., USA</td>
			<td style="width:119px;">MS0002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Operation microscope</td>
			<td style="width:236px;">Leica , Germany</td>
			<td style="width:119px;">M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Digital microscope camera</td>
			<td style="width:236px;">Sony, Japan</td>
			<td style="width:119px;">SSC-DC58AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Standard surgical instruments</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">Multiple</td>
			<td>See protocol 1.4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Microsurgical instruments</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">Multiple</td>
			<td>See protocol 1.5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Vascular clip applicator</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">FT495T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Temporary vascular clamps</td>
			<td style="width:236px;">B. Braun, Germany</td>
			<td style="width:119px;">FT250T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Graph Pad Prism statistical software&#160;</td>
			<td style="width:236px;">GraphPad Software, San Diego, California, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>V 6.02 for Windows</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model

Modelli sperimentali aneurisma sacciforme sono necessari per testare nuove opzioni di trattamento chirurgico ed endovascolare e dispositivi prima di essere introdotti nella pratica clinica. Inoltre, sono necessari modelli sperimentali per chiarire la complessa biologia aneurisma che porta alla rottura di aneurismi sacciformi. Diversi tipi di modelli sperimentali per aneurismi sacciformi sono stati stabiliti in specie diverse. Molti di loro, tuttavia, richiedono abilità speciali, attrezzature costose, o in ambienti speciali, che limita il loro uso diffuso. Un modello sperimentale semplice, robusto ed economico è necessario come strumento standardizzato che può essere utilizzato in modo standardizzato in varie istituzioni. Il modello aortico addominale fianco aneurisma ratto microchirurgica unisce la possibilità di studiare entrambe le strategie di trattamento endovascolare nuove e le basi molecolari di aneurisma biologia in un standardizzata e poco costosomodo. Innesti standardizzati per mezzo di forma, dimensione, e la geometria vengono raccolte da aorta toracica discendente di un topo donatore e poi trapiantato a un destinatario ratto singenici. Gli aneurismi sono suturati end-to-side con continui o interrotti 9-0 suture in nylon per l&#39;aorta addominale sottorenale. Presentiamo passo-passo le istruzioni procedurali, le informazioni sulle attrezzature necessarie, e discutiamo importanti dettagli anatomici e chirurgici per il successo creazione microchirurgico di un aneurisma aortico fianco nel ratto.

Una serie pilota composto da 14 ratti. Successivamente un totale di 84 animali sono stati operati in base al protocollo presentato per diversi progetti di ricerca tra marzo e settembre 2012. Altri 29 animali servivano come donatori per innesti sacculari arteriosi. I restanti esperimenti sono stati eseguiti utilizzando innesti pre-trattati raccolti e conservati da precedenti esperimenti utilizzando ratti dello stesso sesso, ceppo, peso ed età. Il peso corporeo, tempo complessivo di funzionam...

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The Helsinki Rat Microsurgical Sidewall Aneurysm Model

Microsurgical sidewall aneurysms in rats are created by end-to-side anastomosis of an aortic graft to the abdominal aorta. We present step-by-step instructions and discuss anatomical and surgical details for successful experimental saccular aneurysm creation.

La Helsinki Rat microchirurgica Sidewall Aneurisma Modello

Experimental saccular aneurysm models are necessary for testing novel surgical and endovascular treatment options and devices before they are introduced ...

the-helsinki-rat-microsurgical-sidewall-aneurysm-model

Research

JoVE Journal

Medicine

12.1K Views.  University of Helsinki, Helsinki, Finland. Microsurgical sidewall aneurysms in rats are created by end-to-side anastomosis of an aortic graft to the abdominal aorta. We present step-by-step instructions and discuss anatomical and surgical details for successful experimental saccular aneurysm creation.

Video: The Helsinki Rat Microsurgical Sidewall Aneurysm Model

Microsurgical Venous Pouch Arterial-Bifurcation Aneurysms in the Rabbit Model: Technical Aspects

For ruptured human cerebral aneurysms endovascular embolization has become an equivalent alternative to aneurysm clipping.1 However, large clinical trials have shown disappointing long-term results with unacceptable high rates of aneurysm recanalization and delayed aneurysm rupture.2 To overcome these problems, animal experimental studies are crucial for the development of better endovascular devices.3-5
Several animal models in rats, rabbits, canines and swine are available.6-8 Comparisons of the different animal models showed the superiority of the rabbit model with regard to hemodynamics and comparability of the coagulation system and cost-effectiveness.9-11 
The venous pouch arterial bifurcation model in rabbits is formed by a venous pouch sutured into an artificially created true bifurcation of both common carotid arteries (CCA). The main advantage of this model are true bifurcational hemodynamics.12 The major drawbacks are the sofar high microsurgical technical demands and high morbidity and mortality rates of up to 50%.13 These limitations have resulted in less frequent use of this aneurysm model in the recent years. These shortcomings could be overcome with improved surgical procedures and modified peri- and postoperative analgetic management and anticoagulation.14-16 Our techniques reported in this paper demonstrate this optimized technique for microsurgical creation of arterial bifurcation aneurysms.

An optimized technique for the microsurgical creation of arterial bifurcation aneurysms mimicking bifurcation human cerebral aneurysms is described. A venous pouch is sutured into an artificially created true bifurcation of both common carotid arteries. Facilitated microsurgical techniques and aggressive postoperative anticoagulation and analgesia lead to minimized morbidity rates and high aneurysm patency rates.

Microchirurgia arteriosa, venosa Pouch biforcazione aneurismi nel modello Rabbit: Aspetti Tecnici

For ruptured human cerebral aneurysms endovascular embolization has become an equivalent alternative to aneurysm clipping.1 However, large clinical trials ...

Ricerca

Medicina

A New Murine Model of Endovascular Aortic Aneurysm Repair

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of Abdominal aortic aneurysm (AAA) pathophysiology. There is no abdominal aortic aneurysm endograft exclusion model cheap and reproducible, which would allow deep investigations of AAA before and after treatment. We hereby describe how to induce, and then to exclude with a covered coronary stentgraft an abdominal aortic aneurysm in a rat. The well known elastase induced AAA model was first reported in 19901 in a rat, then described in mice2. Elastin degradation leads to dilation of the aorta with inflammatory infiltration of the abdominal wall and intra luminal thrombus, matching with human AAA. Endovascular exclusion with small covered stentgraft is then performed, excluding any interactions between circulating blood and the aneurysm thrombus. Appropriate exclusion and stentgraft patency is confirmed before euthanasia by an angiography thought the left carotid artery. Partial control of elastase diffusion makes aneurysm shape different for each animal. It is difficult to create an aneurysm, which will allow an appropriate length of aorta below the aneurysm for an easy stentgraft introduction, and with adequate proximal and distal neck to prevent endoleaks. Lots of failure can result to stentgraft introduction which sometimes lead to aorta tear with pain and troubles to stitch it, and endothelial damage with post op aorta thrombosis. Giving aspirin to rats before stentgraft implantation decreases failure rate without major hemorrhage. Clamping time activates neutrophils, endothelium and platelets, and may interfere with biological analysis.

Histological and biochemical modifications after aneurysm endograft exclusion are still unclear. We describe a new model of endograft implantation on a murine aneurysm. Through thrombus analysis with and without persistant circulating blood stream interface, and new endovascular biomaterials evaluation, this model will help to better understand endovascular aneurysm exclusion pathobiology.

Un nuovo modello murino di endovascolare aneurisma dell&#39;aorta riparazione

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

Dimostrazione del Topo ischemica pelle ferita Modello

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg dimethylnitrosamine (DMN), given intraperitoneally for three consecutive days per week. Intraperitoneal injections were performed in the fume hood as DMN is a known hepatoxin and carcinogen. The model has several advantages. Firstly, liver changes can be studied sequentially or at particular stages of interest. Secondly, the stage of liver disease can be monitored by measurement of serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) enzymes. Thirdly, the severity of liver damage at different stages can be confirmed by sacrifice of animals at designated time points, followed by histological examination of Masson&#39;s Trichome stained liver tissues. After four weeks of DMN dosing, the typical fibrosis score is 5 to 6 on the Ishak scale. The model can be reproduced consistently and has been widely used to assess the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

Il dimetilnitrosamina indotta fibrosi epatica modello nel ratto

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

Guarigione delle ferite di abrasione epiteliale corneale con oculare Burr come un modello per Cornea

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No current animal models of diabetes and oxygen-induced retinopathy develop the full-range progressive changes manifested in human proliferative diabetic retinopathy (PDR). Therefore, understanding of the disease pathogenesis and pathophysiology has relied largely on the use of histological sections and vitreous samples in approaches that only provide steady-state information on the involved pathogenic factors. Increasing evidence indicates that dynamic cell-cell and cell-extracellular matrix (ECM) interactions in the context of three-dimensional (3D) microenvironments are essential for the mechanistic and functional studies towards the development of new treatment strategies. Therefore, we hypothesized that the pathological fibrovascular tissue surgically excised from eyes with PDR could be utilized to reliably unravel the cellular and molecular mechanisms of this devastating disease and to test the potential for novel clinical interventions. Towards this end, we developed a novel method for 3D ex vivo culture of surgically-excised patient-derived fibrovascular tissue (FT), which will serve as a relevant model of human PDR pathophysiology. The FTs are dissected into explants and embedded in fibrin matrix for ex vivo culture and 3D characterization. Whole-mount immunofluorescence of the native FTs and end-point cultures allows thorough investigation of tissue composition and multicellular processes, highlighting the importance of 3D tissue-level characterization for uncovering relevant features of PDR pathophysiology. This model will allow the simultaneous assessment of molecular mechanisms, cellular/tissue processes and treatment responses in the complex context of dynamic biochemical and physical interactions within the PDR tissue architecture and microenvironment. Since this model recapitulates PDR pathophysiology, it will also be amenable for testing or developing new treatments.

Here, we present a protocol to study the pathophysiology of proliferative diabetic retinopathy by using patient-derived, surgically-excised, fibrovascular tissues for three-dimensional native tissue characterization and ex vivo culture. This ex vivo culture model is also amenable for testing or developing new treatments.

Un modello di coltura del tessuto Ex Vivo per fibrovascolare complicazioni nella retinopatia diabetica proliferativa

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. An aneurysm forms as a result of progressive weakening and eventual dilation of the aorta, which can rupture or tear once it reaches a critical diameter. Aneurysms of the descending aorta in the chest, called descending thoracic aortic aneurysms (dTAA), make up a large proportion of aneurysm cases in the United States. Uncontained dTAA rupture is almost universally lethal, and elective repair has a high rate of morbidity and mortality. The purpose of our model is to study dTAA specifically, to elucidate the pathophysiology of dTAA and to search for molecular targets to halt the growth or reduce the size of dTAA. By having a murine model to study thoracic pathology precisely, targeted therapies can be developed to specifically test dTAA. The method is based on the placement of porcine pancreatic elastase (PPE) directly on the outer murine aortic wall after surgical exposure. This creates a destructive and inflammatory reaction, which weakens the aortic wall and allows for aneurysm formation over weeks to months. Though murine models possess limitations, our dTAA model produces robust aneurysms of predictable size. Furthermore, this model can be used to test genetic and pharmaceutical targets which may arrest dTAA growth or prevent rupture. In human patients, interventions such as these could help avoid aneurysm rupture, and difficult surgical intervention.

We describe a surgical protocol to consistently induce robust descending thoracic aortic aneurysms in mice. The procedure involves left thoracotomy, thoracic aorta exposure, and placement of a sponge soaked in porcine pancreatic elastase on the aortic wall.

Modello chirurgico murine dell'elastasi topica indotta decrescente all'aneurtica toracica

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Porcine Model of Infrarenal Abdominal Aortic Aneurysm

Large animal models to study abdominal aortic aneurysms are sparse. The purpose of this model is to create reproducible, clinically significant infrarenal abdominal aortic aneurysms (AAA) in swine. To achieve this, we use a combination of balloon angioplasty, elastase and collagenase, and a lysyl oxidase inhibitor, called &#946;-aminopropionitrile (BAPN), to create clinically significant infrarenal aortic aneurysms, analogous to human disease.
Noncastrated male swine are fed BAPN for 7 days prior to surgery to achieve a steady state in the blood. A midline laparotomy is performed and the infrarenal aorta is circumferentially dissected. An initial measurement is recorded prior to aneurysm induction with a combination of balloon angioplasty, elastase (500 units)/collagenase (8000 units) perfusion, and topical elastase application. Swine are fed BAPN daily until terminal procedure on either postoperative day 7, 14, or 28, at which time the aneurysm is measured, and tissue procured. BAPN + surgery pigs are compared to pigs that underwent surgery alone.
Swine treated with BAPN and surgery had a mean aortic dilation of 89.9% &#177; 47.4% at day 7, 105.4% &#177; 58.1% at day 14, and 113.5% &#177; 30.2% at day 28. Pigs treated with surgery alone had significantly smaller aneurysms compared to BAPN + surgery animals at day 28 (p &#60; 0.0003). The BAPN + surgery group had macroscopic and immunohistochemical evidence of end stage aneurysmal disease.
Clinically significant infrarenal AAA can be induced using balloon angioplasty, elastase/collagenase perfusion and topical application, supplemented with oral BAPN. This model creates large, clinically significant AAA with hallmarks of human disease. This has important implications for the elucidation of AAA pathogenesis and testing of novel therapies and devices for the treatment of AAA. Limitations of the model include variation in BAPN ingested by swine, quality of elastase perfusion, and cost of BAPN.&#160;

This novel model creates robust infrarenal abdominal aortic aneurysms in swine using a combination of balloon angioplasty, elastase/collagenase perfusion, topical elastase application, and oral compound &#946;-aminopropionitrile administration, which interferes with collagen cross-linking.

Modello porcinario dell'aneurisma aortico addominale a infrarosso

Large animal models to study abdominal aortic aneurysms are sparse. The purpose of this model is to create reproducible, clinically significant infrarenal ...

Vessel-Sparing Microsurgical Longitudinal Intussusception Vasoepididymostomy to Treat Epididymal Obstructive Azoospermia

The epididymis is a common site of obstruction in obstructive azoospermia (OA). Vasoepididymostomy has become an important method for the treatment of epididymal OA since 2000. There are two challenges in classic microscopic vasoepididymostomy. First, anastomosis of the vas deferens and epididymis is performed with double-needle sutures. However, there is a lack of good-quality and cost-effective double-needle sutures in China, which leads to increased difficulty and poor success rates of anastomosis. Second, the separation of the vas deferens does not retain vasculature, although the vas deferens vasculature plays an important role in the blood supply to the vas deferens, epididymis, and testis. This affects the blood supply to the anastomotic area and epididymis.
Therefore, this team has made innovative improvements to address these problems. Good-quality, cost-effective, single-needle sutures, which are easy to purchase in China and other countries, were used in microsurgical longitudinal intussusception vasoepididymostomy. This can optimize the operation procedure and shorten the operation time while ensuring the success rate of the anastomosis. The surgical method of preserving the vas deferens vessels was innovatively proposed because the etiology of epididymal OA is mostly inflammatory in China. The protection of the blood supply to the vas deferens and epididymis is maximized using microsurgical forceps to separate and protect the vasculature. Patency reached 81.7% in the postoperative follow-up, indicating a better surgical treatment effect.

The present protocol describes a vessel-sparing, longitudinal intussusception vasoepididymostomy using readily available single-needle sutures in China, a safe and effective procedure, which may improve patients' patency and natural pregnancy rates.

Vasoepidididimostomia microchirurgica longitudinale risparmiante vasoepididimomia per il trattamento dell'azoospermia ostruttiva epididimale

The epididymis is a common site of obstruction in obstructive azoospermia (OA). Vasoepididymostomy has become an important method for the treatment of ...