博士はキーティングは、DODのグラントCA100335によって資金を供給し、聖剣帯の財団奨学生です。

すべての記載された手順を見直し、当社の制度的動物管理使用委員会によって承認された。 1実験を計画<ol><li>噴射すべきセルを選択してください。接着細胞培養株、遺伝的に改変されたクローン、神経前駆細胞、初代培養、または脱凝集性腫瘍：さまざまなソースからの細胞を注入するための候補である。希望モデルの​​タイプは、注射の最も適切なサイトを定義します。 <ol><li>注射のための細胞数を決定します。腫瘍を形成するのに必要な細胞数は、細胞株に応じて変化し、経験的に決定されなければならない。腫瘍増殖速度は、細胞型、細胞数および組織培養継代回数に大きく依存する。 1×10 4〜2×10 5以上の注射ごとに複数に及ぶ細胞数を変化させ、成長率の腫瘍を作り出した。 </li><li>注射のためのボリュームを制限します。細胞は、無血清培地またはリン酸緩衝sの最小の容積に懸濁されるべきである26 G針を滑らかで、容易な通過を可能にアリーン（PBS）が挙げられる。小さい体積は、実際に、脳内に送達より正確で得られた腫瘍を定義し;最適な結果は、3〜6μlの範囲の容積を注入することによって得られる。混合サンプリング、正確な測定を可能にするために関係なく、計画された注入回数を、懸濁した細胞の少なくとも50μlの最終全体積を準備することを計画。 </li></ol></li><li>モデルに適したマウスを選択してください。ヒト腫瘍のマウスモデルは、典型的には、免疫媒介性移植片拒絶を回避するために、若い免疫不全マウスを利用する。適切な予防措置が除染、消毒、および資機材の殺菌を含め、取得された場合、作業は生物学的安全キャビネットの中で場所を取る必要はありません。ここに示されている作業は、生後6〜12週の間、雄と雌の無胸腺ヌードマウスで行われている。 20g未満の重量を量るマウスは、として位置決めすることが困難な場合がtereotaxicフレームおよび低体温の影響をより受けやすいかもしれません。 </li></ol> 2機器を組み立て<ol><li>入手し、マウスを定位フレーム、アライメントコンソール、およびマウスガス麻酔ヘッドホルダー、マイクロシリンジポンプ、熱パッド、麻酔器、光ファイバ作業ランプ、可変速度回転ドリルを除染。清掃し、すべての機器を除染。 </li><li>シリンジポンプの動作に必要な他の変数（注入容量、流量、速度単位、注射器型を含む）プログラム注入パラメータ。各特定のモデルの設定を最適化します。 注：これらの注射での設定は（デバイスタイプ「E」）25μlの注射器を用いて400 NL /分の速度（レートの単位「M」）で3000 NLサンプルであった非グループ化（「N」）モードで。 </li><li>最後の里をやって、滅菌脱イオン水を数回のすすぎで26 G針で精密マイクロシリンジ（のdiH 2 O）および70％エタノール（エタノール）を清掃してくださいのdiH 2 OでNSE一部を除くすべてのモデルは、オートクレーブ処理するように設計されていません。プランジ​​ャーの動きが滑らかで、自由であることを確認してください。 </li><li>麻酔引き渡し装備を入手します。それは、麻酔の深さと持続時間を調節することが容易であるイソフルランは、好ましい麻酔薬である。定位ユニットは、マウスの麻酔ガスアタッチメントで、必要なチューブとコネクタは、マウスに麻酔器からガス混合物を提供するために用意されていることを装備していることを確認します。 </li><li>細い先端（歯）はさみ、ピンセット2 /止血、縫合のために、中規模のはさみ、中·先の細いピンセット、および少なくとも2つの1ミリメートル歯科用ドリルビットを含むオートクレーブ手術器具、。 70％エタノール、消毒剤、またはビーズ滅菌器で手術中にきれいな楽器にしてください。 </li><li> （所望の場合）から、イソフルラン、鎮痛剤、眼軟膏剤/潤滑剤、抗生物質軟膏、生理食塩水、30％過酸化水素（H 2 O 2）、防腐剤、および骨ろうを得る獣医や医療の供給。無菌のdiH 2 Oおよび70％エタノールを調製します。そのようなガーゼパッド、無菌包帯、縫合糸、エタノール綿棒、コットン先端スワブ、無菌手術用手袋、手術用ブレードなど多くの使い捨ては、材料リストに項目ごとに表示されます。頭蓋骨をマークする先端の細い油性マジックを除染し、外科的使用のために専用にする必要があります。 </li></ol> 3注射用の細胞を調製<ol><li>ここに示した実験では、不死化ヒトGBM細胞株を選択します。セルの数（2×10 5）を、経験的に注入される懸濁液の体積（3μl）を決定します。詳細には、細胞型によって変化し得る。正確な測定、混合、および注入を容易にするために、少なくとも50μlの容量を使用してください。 </li><li>メディアまたはPBS中の細胞を再懸濁をトリプシン処理。細胞注入の直前に、次の手順を実行します。 <ol><li>吸引により細胞から培地を除去し、100mmプレート当たり10 mlのPBSですすぎ; PBSを除去します。 </li><li>広告各100mmプレートにd 1とmlのトリプシンとは、単一細胞懸濁液を得るためにちょうど十分な長さRTでインキュベートする。 </li><li> 100mmプレートあたり5ミリリットルダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）+10％ウシ胎児血清（FBS）をトリプシン活性を停止します。 </li><li> 100mmプレートあたり〜5ミリリットルの無血清DMEM（SF-DMEM）中で450×gで遠心分離し、再懸濁することにより細胞をペレット化。 </li><li>血球計または自動細胞カウンターを用いて生細胞を数える。 </li><li> 2×10 5細胞/3μlのに生細胞密度を調整（または実験によって決定される）細胞をペレット化し、SF-DMEM中に再懸濁することにより。 </li></ol></li><li>氷や冷却パック（細胞が凍結することはできません）で冷却した細胞を保管してください。指のフリックにより穏やかに混合します。 </li></ol> 4。手術のために、マウスを麻酔し、準備する<ol><li> 〜5％のイソフルラン（酸素流量〜2リットル/分）を使用して麻酔を誘導または獣医師の指示として。誘導は、2から3分かかります。十分な深さでマウスを維持〜3％イソフルランで麻酔の。 <ol><li>つま先のピンチによって麻酔の深さを確認し、必要であればイソフルランを調整し、作業中は呼吸や足指のピンチ応答を監視し続ける。暖かさのためのガーゼパッドとマウスを覆い、注入速度に応じて、1時間に45分かかる場合があります手順、全体で定期的にマウスを監視します。 </li></ol></li><li>丁寧に舌の上や口の中に口蓋バーをスライドさせることにより、定位フレーム内にマウスを置きます。歯の穴に正面切歯フック。できるだけ水平に近いように耳 - 目の表面と、頭を安定させるために耳のバーを使用してください。外耳道に棒を強制しないでください。これは、安全にヘッドを位置決めすることが重要です。指先で軽くサイド側へと上下の動きをチェックしてください。フィット感を最適化するために、定位ユニットの調整可能なコントロールを使用します。 </li><li>眼軟膏で目を注油。ポビドン - iodinの交互の用途で二回目と耳の間の皮膚をきれいに電子防腐70％エタノール。 </li><li>フランク（または監督など）に選ばれた鎮痛剤の皮下（SQ）を注入する。 </li></ol> 5。噴射を行う<ol><li>注射部位を決定します。注射部位は、大きさやマウスの菌株及び細胞の種類によって変化し得る。脳室に近づきすぎて注入された細胞は、疾患の頭蓋脊髄普及につながる可能性があります。浅すぎる注入された細胞は、針トラックを通って成長することがあります。 注：ここに示した実験では、ターゲットは大脳皮質の前頭領域として定義されたサイトは、2.5ミリメートル（右）、1.5mmの前方、及びブレグマに対して3.5ミリメートル腹が選択された横方向（ 図1）、生産20〜30グラムの範囲の、マウスにおける脳の腫瘍。 </li><li>ブレグマと注射部位を露出させるために頭部の皮膚を通して無菌技術を用いて、小さな切開（〜8ミリメートル、長）を作成します。正中軸と右耳（に向かって、右眼との間の点から斜めカット、 <strong&gt;図2）は、ブレグマと注射部位の両方にアクセスすることができます。 </li><li>皮膚を撤回し、頭蓋骨の表面を乾燥させるために滅菌綿棒を使用しています。ブレグマを可視化するためにH 2 O 2で湿らせた綿棒で他の骨ブロット。 H 2 O 2は、ブレグマで交差冠状および矢状縫合糸に沿って白色の泡状の細い線を残し、酸素の泡を生成する。 </li><li>マイクロポンプに針の付いた空の注射器をロックし、前頂の上に直接、針の先端を操縦;セットには、0.0ミリメートル、横0.0ミリメートル前方/後方、及び0.0ミリメートル腹側/背側に整列コンソール上の座標。 </li><li>定位固定ユニットのコントロール·ノブを使用して、横2.5ミリメートル（右）とブレグマ（または希望の場所）に対する1.5mmの前方に針を移動します。少しシリンジを上げ、専用のサインペンで頭蓋骨上の正確な位置をマーク。頭蓋骨の外表面は、ブレグマと水平面上にない場合は、（i。E。、背側/腹側はもはやゼロを読み取って座標なし）、注入の深さがずれていないことを確実にするために0.0に読んで腹側/背側をリセットします。 </li><li>ステップ5.5のペンでマーク適切なサイトに無菌歯科先端装備、手持ち回転式ドリルで頭蓋骨に小さな穴を開けます。頭蓋骨の角度でドリルを持ち、非常に静かに骨に先端をタッチします。必要に応じて繰り返します。実際に頭蓋骨のこの層を貫通する針を残して、骨をほぼ完全ではないドリル、最もクリーン注射をもたらす。 </li><li> PBSまたは生理食塩水で湿らせた綿棒で骨のほこりを取り除きます。ポンプにシリンジを返すと場所を確認するためにまっすぐにバーホールに針を下ろします。バーホールを針でセンタリングされていない場合は、開口部を拡大するためのドリルを使用しています。 </li><li>静かに細胞懸濁液を混合し、ポンプコントローラを使用してシリンジ内にセルを描画。気泡や塊を避け、針のウィットを拭く外部表面上の汚染細胞を除去する時間アルコール綿棒。注射器/注射針が詰まったり凍結されている場合は、削除し、すぐに滅菌水できれいにし、70％エタノール。 </li><li>頭蓋骨の表面の高さ（0.0ミリメートル腹側/背側）に針を下ろします。そして、ゆっくりと（より約1分）頭蓋骨の全厚さを貫通し、4mmのventrallの深さに脳を貫通する針を下ろします。腹側3.5ミリメートルにゆっくり針を撤回。マウスヘッドが定位ユニットにしっかりと保持されている場合、頭蓋骨のほとんど動きがあってはならない。 </li><li>正しいパラメータが細胞をautoinjectするポンプ制御装置（2.2節）を押して「RUN / STOP」（または製品マニュアルの指示など）を締結していることを確認します。マウスを監視し、必要であれば、イソフルランを調整します。注射器を見て、プランジャーがバレルに移動していることを確認してください。冷凍または詰まっ動きが曲がっ/壊れたプランジャーになることがあります。 </li><li> B中の針を1から2分待ち雨は、その後非常にゆっくりと（3から4分かけて）組織から針を引き抜く。注入が完了した後、針を除去するための合計時間は5分である。バーホール周辺を覆い隠すために綿棒を使用してください。骨を乾燥させるために開いている皮膚のエッジを残す。 </li><li>ポンプから注射器を取り出し、すぐに70％エタノールで滅菌H 2 Oで3回3回すすぎ、および滅菌H 2 Oで3倍（またはメーカの指示どおりに）。 EtOHで針を拭き、脇に置きます。 </li><li>バーホールに（1または2μLに相当）を滅菌骨ろうを適用し、上におよび骨の中にワックスを固めるために滅菌綿棒の木の先端を使用。表面が十分に乾燥している場合は、固執する必要があります。 </li><li>マウスと周囲の作業領域の上に、滅菌ドレープを広げ、切開を縫合。 3ステッチで十分です。あるいは、外科用接着剤を使用することができる。局所抗生物質を適用します。 </li><li> 0％にイソフルランを削減し、定位ユニットからマウスを取り外し、Cであること歯を保護するためにareful。耳、口や舌をチェックしてください。 </li><li>密接に注射後のマウスを監視します。 5から10分間の熱パッドの上に置いてマウス;その後（熱パッドの上に）ケージに転送され、マウスが覚醒し、歩行可能になるまで観察します。それは胸骨横臥を維持するために十分な意識を取り戻したまでマウスを無人のままにしないでください。完全に回復するまで、他の動物の会社にマウスを返さないでください。痛みの兆候が認めている場合、追加の鎮痛剤の使用を考えてみましょう。 </li></ol> 6。完了し、モニター回収·腫瘍の開発<ol><li> 70％エタノール、マウスの間のビーズ滅菌器や消毒剤を使用して、すべての楽器や機器を清掃してください。 </li><li>痛み、感染症や他の合併症の兆候が、処置後2日間注射したマウスを監視します。処置後24および48時間（または指示など）で鎮痛を注入。必要に応じて、7〜10日で縫合糸を取り除きます。 </li><li>疾患の臨床徴候についてマウスを評価、paralysisは、体重減少、発作、または一般的な病気の活性を減少させた。 </li><li> [ ビボイメージングシステム（IVIS） は 、磁気共鳴イメージング（MRI）など]の適切な方法によって腫瘍の発達を監視する。 </li></ol>

<ol>
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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+intracranial+brain+tumor+xenografts+with+subsequent+analysis+of+tumor+growth+and+response+to+therapy+using+bioluminescence+imaging.">Establishing intracranial brain tumor xenografts with subsequent analysis of tumor growth and response to therapy using bioluminescence imaging.</a> J. Vis. Exp. (41), (2010).</li><li>Valadez, J. G., Sarangi, A., Lundberg, C. J., Cooper, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+orthotopic+glioma+xenografts+recapitulate+infiltrative+growth+and+isocitrate+dehydrogenase+I+mutation.">Primary orthotopic glioma xenografts recapitulate infiltrative growth and isocitrate dehydrogenase I mutation.</a> J. Vis. Exp. (83), (2014).</li><li>Baumann, B. C., Dorsey, J. F., Benci, J. L., Joh, D. Y., Kao, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotactic+intracranial+implantation+and+in+vivo+bioluminescent+imaging+of+tumor+xenografts+in+a+mouse+model+system+of+glioblastoma+multiforme.">Stereotactic intracranial implantation and in vivo bioluminescent imaging of tumor xenografts in a mouse model system of glioblastoma multiforme.</a> J. Vis. Exp. (67), (2012).</li><li>Iwami, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+of+intracranial+injection+via+the+postglenoid+foramen+for+brain+tumor+mouse+models.">A novel method of intracranial injection via the postglenoid foramen for brain tumor mouse models.</a> Journal of neurosurgery. 116, 630-635 (2012).</li></ol>

著者らは、開示することは何もない。

ヒト脳癌の同所性マウスモデルは、臨床治療の有効性を評価するための優れたツールであるが、脳組織内の細胞の配置を最適化するために注意しなければならないことができる。腫瘍の大きさの研究過度のアリコート量、準最適な注入技術及び性急な注入速度が漏出し、望ましくない場所での腫瘍細胞の出現をもたらし得ることが示されている（脳室、脊髄、硬膜外の領域など ）と高...

脳腫瘍細胞のインビトロ研究は、増殖、生存、遊走、および癌細胞の浸潤を駆動する分子メカニズムを解剖するための非常に貴重である。培養細胞実験は、シグナル伝達経路を定義する潜在的な治療標的が示唆され、薬物治療に対する細胞応答を特徴付けることができる。しかし、in vitroでのシステムは、医薬品への生物の応答を予測するのはあまりにも単純化している。それらは生理的反応、免疫応答、細胞微小環境、および動物生体系の全体的な不均一性を欠いている。臨床観察を1に動物モデルを比較する際の重要な相違をもたらし、人間のプロセス内のイベントを再現しないことが可能な場合、遺伝子操作さのモデルは、非常に貴重なことができますが、分子の違いは種とマウス細胞の間に存在する。脇腹の皮下にヒト脳腫瘍細胞株の皮下（SQ）注射を含むマウス異種移植片モデルは、実行が容易であるおよび測定;彼らは、遺伝子改変および薬物投与/送達、代謝および毒性の影響に対処するために使用することができる。重大な欠点は、しかし、SQモデルの有用性を制限する。微小環境は、天然に存在する脳腫瘍の再現しない：さまざまな細胞型および組織の相互作用を;脳に特有のローカルな血管系、および無数の他の要因は複製することはできません。より正確に、天​​然に存在する脳腫瘍のユニークな環境を再現し、医薬品介入の効果をテストするには、マウス同所モデルが利用されるべきである。また、同所技術が人間の主要な非癌性細胞（分化した細胞または前駆）遺伝子操作されたアプローチの一部として使用することができる遺伝的に腫瘍形成が生じる、またはヒト間質細胞なしで、マウスの該当部位に変形して注入されるヒトの1に見られるものと同様。 この記事では説明して正確かつ再現性マウスにおいて脳腫瘍を作成するための方法論。この技術を使用して、ユーザは正確にマウス大脳皮質の前頭側頭頂側頭部の指定した場所に懸濁された細胞の小アリコートを注入することができます。マウスの死亡率は極めて低い。私たちの手の中に、全くマウスは185の手順の後に外科的合併症で死亡していない。得られた腫瘍の特性は、典型的なヒト臨床腫瘍のそれと比較することができる。例えば：などの成長速度、壊死の程度、浸潤の程度は、細胞型の異質性、有糸分裂細胞の存在、増殖およびアポトーシスのマーカー、細胞株または脱凝集ヒト組織または腫瘍サンプルは、次にそれらの能力に基づいて評価することができる実際の臨床プレゼンテーションをシミュレートします。それらは動物負担ウィット内に存在するように、細胞培養におけるそれらの性能に基づいて選択された医薬品は、代謝機能、循環系、および血液脳関門の文脈において試験することができるhaの腫瘍、関連する建築のコンテキスト内のすべての。さらに、注射用に選択された細胞は、遺伝的に腫瘍の増殖および生存に対する等の特定のノックダウン、欠失、ノックイン、突然変異の影響を調査するために修飾することができる。 多くの刊行物は、頭蓋内のさまざまな技術を用いて腫瘍の研究を文書化する。 Yamada らは、染料およびU87細胞の注射の詳細な研究を行なったし、最小化する量と噴射率が最高の腫瘍2を生成したことがわかった。 ブルックスらは、マイクロプロセッサ制御式のインジェクタではなく、ウイルスベクターを送達するための手動の方法を使用して、優れた再現性と効率性を発見した。最適噴射パラメータに関する彼らの結論は、細胞送達3にも適用可能である。 Shankavaram らは、多形性膠芽腫（GBM）細胞株を脳内に（手動による方法を使用して）同所注射したことを示したCLの遺伝子発現プロファイルを再現したinical腫瘍がより密接によりインビトロまたはSQ異種移植片において 、前臨床試験4のために頭蓋モデルの使用をサポートする。ジャンニーニらは、追加のマウスの脳内に連続継代によりヌードマウスの脇腹に維持されていた人間の手術標本から細胞を注入し、このアプローチは、モデル5で患者の腫瘍遺伝子変化を保っていることを示した。同様の結果は、李ら 6で報告された。定位セットアップ、慎重に定義注射部位、およびゆっくりと着実な注入速度を使用すると、彼らは一貫性のある成長率と高い（100％）の生着率で再現性の脳腫瘍を得た。この技術の有効性は、したがって、十分に確立されている。文献検索は、この技術の用途は広範囲であることを示唆している。カーティーらは、正常transgeniの前頭皮質中に治療遺伝子を発現するウイルスベクターを送達するための頭蓋内注射を使用アルツハイマー病7のCモデル。サチらは既に同所注入さGBM腫瘍8を担持するヌードマウスに神経幹細胞ベースの担体中に治療的腫瘍溶解性アデノウイルスを送達するための頭蓋内注射の使用を記載している。明らかに、頭蓋内注射は、前臨床研究のための汎用性と効果的なツールです。可視化実験のジャーナル以前の出版物は、基本的なアプローチ9-11を説明し、私たちは簡単にマスター技術を使用して、精度の高いレベルに頭蓋内腫瘍注射と同所モデリングの概念を取る。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="866">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:87px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:287px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Equipment</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:349px;">Small Animal Stereotaxic Instrument with Digital Display Console.</td>
			<td style="width:87px;">Kopf</td>
			<td style="width:145px;">Model 940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Mouse Gas Anesthesia Head Holder</td>
			<td style="width:87px;">Kopf</td>
			<td style="width:145px;">Model 923-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Mouse Ear Bars</td>
			<td style="width:87px;">Kopf</td>
			<td style="width:145px;">Medel 922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Fiber Optic Illuminator</td>
			<td style="width:87px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">12-562-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">UltraMicroPump III</td>
			<td style="width:87px;">WPI</td>
			<td style="width:145px;">UMP3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Micro4 microprocessor</td>
			<td style="width:87px;">WPI</td>
			<td style="width:145px;">UMC4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Variable speed hand-held rotary drill</td>
			<td style="width:87px;">Dremel</td>
			<td style="width:145px;">Model 300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Dental drill bit, 1.0 mm</td>
			<td style="width:87px;">Spoelting</td>
			<td style="width:145px;">514554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Adaptor for dental drill bit: 3/32 inch collet</td>
			<td style="width:87px;">Dremel</td>
			<td style="width:145px;">481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Heating pad</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td>for mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Isoflurane vaporizer system</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td>for mice</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:349px;">Medical tubing and connectors</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:287px;">to connect isoflurane vaporizer with stereotaxic frame</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Instruments</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Precision 25 ul micro syringe</td>
			<td style="width:87px;">Hamilton&#160;</td>
			<td style="width:145px;">7636-01</td>
			<td>Model 702, without needle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Microsyringe needles, 26s gauge&#160;</td>
			<td style="width:87px;">Hamilton&#160;</td>
			<td style="width:145px;">7804-04</td>
			<td>RN, 25 mm point style 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Fine-tipped scissors (straight, sharp/sharp)</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Medium-sized standard scissors</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Standard serrated forceps</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Serrated hemostats (2)</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Fine-tipped forceps</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Supplies</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Sutures 5-0 vicryl P-3 13 mm (Ethicon)</td>
			<td style="width:87px;">MWI</td>
			<td style="width:145px;">J463G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Surgical blades #10, stainless (Feather)</td>
			<td style="width:87px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">296#10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:349px;">Isoflurane (Fluriso)&#160;</td>
			<td style="width:87px;">VetOne&#160;</td>
			<td style="width:145px;">NDC 13985-528-60</td>
			<td style="width:287px;">Item #502017. Liquid inhalation anesthetic. federal law restricts this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Carprofen (Rimadyl Injectable 50 mg/mL)&#160;</td>
			<td style="width:87px;">Pfizer</td>
			<td style="width:145px;">NDC 61106-8507-01</td>
			<td>dilute in saline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Ophthalmic ointment (artificial tears)</td>
			<td style="width:87px;">Rugby</td>
			<td style="width:145px;">NDC 0536-6550-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Topical antibiotic (AK-Poly-Bac )</td>
			<td style="width:87px;">Akorn</td>
			<td style="width:145px;">NDC 17478-238-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Povidone-iodine topical antiseptic, 10% (Betadine)</td>
			<td style="width:87px;">Betadine</td>
			<td style="width:145px;">NDC 67618-150-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Hydrogen Peroxide, 30%</td>
			<td style="width:87px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:145px;">H325-100</td>
			<td>for visualizing skull landmarks</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Sterile saline</td>
			<td style="width:87px;">VetOne&#160;&#160;</td>
			<td style="width:145px;">NDC 13985-807-25</td>
			<td>for diluting solutions, cleaning tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Bone wax</td>
			<td style="width:87px;">WPI</td>
			<td style="width:145px;">Item #501771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Sterile drapes</td>
			<td style="width:87px;">McKesson</td>
			<td style="width:145px;">25-517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Sterile surgical gloves</td>
			<td style="width:87px;">McKesson</td>
			<td style="width:145px;">(to fit)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Sterile gauze pads, 2 x 2</td>
			<td style="width:87px;">Fisherbrand&#160;</td>
			<td style="width:145px;">22028556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Sterile gauze pads, 4 x 4</td>
			<td style="width:87px;">Fisherbrand&#160;</td>
			<td style="width:145px;">22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Alcohol prep pads (medium)</td>
			<td style="width:87px;">PDI</td>
			<td style="width:145px;">B603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Sterile cotton-tipped applicators</td>
			<td style="width:87px;">Fisherbrand&#160;</td>
			<td style="width:145px;">23-400-114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:349px;">Sterile 0.5 ml screw cap tube with caps for cells</td>
			<td style="width:87px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:145px;">1405-4700</td>
			<td>for cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Individually wrapped sterile dispo pipettes</td>
			<td style="width:87px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">BD 357575</td>
			<td>for needle cleaning solutions</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">BD insulin syringes with needles&#160;</td>
			<td style="width:87px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">329461</td>
			<td>for analgesic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">70% ethanol</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td>for cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:349px;">Sterile di H2O</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td>for cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Microfuge tubes for cleaning solutions</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td>for needle cleaning solutions</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:349px;">Felt tip pen (dedicated)</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td>for marking skull</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creating anatomically accurate and reproducible intracranial xenografts of human brain tumors

特に脳のようなユニークな生理学的および建築資質を持つサイトにインビトロおよび異所性モデルができない-同所腫瘍モデルは、生きた動物のコンテキストで、現在で介入することなく、腫瘍の種類の特性を研究するための最良の方法です。そのような血管系、血液脳関門、代謝、薬物送達および毒性、およびその他の関連要因のホストなどの機能を占めている。同所性モデルもそれらの限界を持っているが、関心のある適切な手法腫瘍細胞を正確にはヒトの脳において最も密接に模倣する条件組織に移植することができる。一貫性の速度および圧力で正確に測定された容積を正確に定義するための場所を提供する方法を採用することにより、予測可能な成長速度を有するヒト脳腫瘍のマウスモデルが再現可能に作成され、さまざまな介入の信頼できる分析のために適切であることができる。ここに記載されているプロトコルは、TEに焦点を当てて設計および頭蓋内注射の準備、手術を行うと、成功したと再現性の腫瘍の成長を確保し、異なる脳の腫瘍モデルの範囲に合わせてカスタマイズすることができ、さまざまな条件のための出発点を提供するchnical詳細。

信頼性の高い頭蓋内異種移植片は、この記載された技術を使用して作成することができます。マウスの頭蓋骨（ 図1）の重要な構造を識別することはブレグマの認識を可能にし、正確で再現性の注入場所に調査員を案内します。これらの研究ではU251親系統は、ルシフェラーゼ（U251-Luc）、ノまたはU87でトランスフェクトしたU251細胞は、ヒトGBM組織培養細胞はSF-DMEMの4〜6μlの懸濁?...

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Creating Anatomically Accurate and Reproducible Intracranial Xenografts of Human Brain Tumors

脳はよくインビトロまたは異所性の分析によって示されていない資質を持つユニークなサイトです。再現性のある場所および成長特性を有する同所性マウスモデルを確実に定位固定装置及び低圧シリンジポンプを用いて頭蓋内の注射を使用して作成することができる。

解剖学的に正確な作成と人間の脳の腫瘍の再現性頭蓋内異種移植片

Orthotopic tumor models are currently the best way to study the characteristics of a tumor type, with and without intervention, in the context of a live ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

15.4K ビュー.  University of Colorado School of Medicine. 脳はよくインビトロまたは異所性の分析によって示されていない資質を持つユニークなサイトです。再現性のある場所および成長特性を有する同所性マウスモデルを確実に定位固定装置及び低圧シリンジポンプを用いて頭蓋内の注射を使用して作成することができる。 

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Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

免疫不全マウスにおけるヒト網膜芽細胞腫の腫瘍の確立と伝播

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

医学

Automated Midline Shift and Intracranial Pressure Estimation based on Brain CT Images

In this paper we present an automated system based mainly on the computed tomography (CT) images consisting of two main components: the midline shift estimation and intracranial pressure (ICP) pre-screening system. To estimate the midline shift, first an estimation of the ideal midline is performed based on the symmetry of the skull and anatomical features in the brain CT scan. Then, segmentation of the ventricles from the CT scan is performed and used as a guide for the identification of the actual midline through shape matching. These processes mimic the measuring process by physicians and have shown promising results in the evaluation. In the second component, more features are extracted related to ICP, such as the texture information, blood amount from CT scans and other recorded features, such as age, injury severity score to estimate the ICP are also incorporated. Machine learning techniques including feature selection and classification, such as Support Vector Machines (SVMs), are employed to build the prediction model using RapidMiner. The evaluation of the prediction shows potential usefulness of the model. The estimated ideal midline shift and predicted ICP levels may be used as a fast pre-screening step for physicians to make decisions, so as to recommend for or against invasive ICP monitoring.

An automated midline shift estimation and intracranial pressure (ICP) pre-screening system based on computed tomography (CT) images for patients with traumatic brain injury (TBI) is proposed using image processing and machine learning techniques.

脳のCT画像に基づく自動ミッドラインシフト、頭蓋内圧の推定

In this paper we present an automated system based mainly on the computed tomography (CT) images consisting of two main components: the midline shift ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality treatment consisting of surgical resection, post-operative radiation therapy and temozolomide chemotherapy 1. New therapeutic approaches are clearly needed to improve patient survival and quality of life. The development of more effective treatment strategies would be aided by animal models of GBM that recapitulate human disease yet allow serial imaging to monitor tumor growth and treatment response. In this paper, we describe our technique for the precise stereotactic implantation of bio-imageable GBM cancer cells into the brains of nude mice resulting in tumor xenografts that recapitulate key clinical features of GBM 2. This method yields tumors that are reproducible and are located in precise anatomic locations while allowing in vivo bioluminescent imaging to serially monitor intracranial xenograft growth and response to treatments 3-5. This method is also well-tolerated by the animals with low perioperative morbidity and mortality.

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

We describe an integrated method for the precise, stereotactic implantation of human glioblastoma multiforme cells into the brains of nude mice and subsequent serial in vivo imaging to monitor growth and response to treatment of the resultant xenografts.

定位頭蓋内注入と<emインビボ&gt;</em多形性膠芽腫のマウスモデル系における腫瘍異種移植片の&gt;生物発光イメージング

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

新規高分解能<em生体内で&gt;</em腫瘍増殖と治療に頭蓋内構造物の動的応答を研究する&gt;イメージング技術

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

免疫不全マウスの皮下および肝内ヒト肝細胞癌異種移植片の生成

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Lesion Explorer: A Video-guided, Standardized Protocol for Accurate and Reliable MRI-derived Volumetrics in Alzheimer's Disease and Normal Elderly

Obtaining in vivo human brain tissue volumetrics from MRI is often complicated by various technical and biological issues. These challenges are exacerbated when significant brain atrophy and age-related white matter changes (e.g. Leukoaraiosis) are present. Lesion Explorer (LE) is an accurate and reliable neuroimaging pipeline specifically developed to address such issues commonly observed on MRI of Alzheimer's disease and normal elderly. The pipeline is a complex set of semi-automatic procedures which has been previously validated in a series of internal and external reliability tests1,2. However, LE's accuracy and reliability is highly dependent on properly trained manual operators to execute commands, identify distinct anatomical landmarks, and manually edit/verify various computer-generated segmentation outputs.
LE can be divided into 3 main components, each requiring a set of commands and manual operations: 1) Brain-Sizer, 2) SABRE, and 3) Lesion-Seg. Brain-Sizer's manual operations involve editing of the automatic skull-stripped total intracranial vault (TIV) extraction mask, designation of ventricular cerebrospinal fluid (vCSF), and removal of subtentorial structures. The SABRE component requires checking of image alignment along the anterior and posterior commissure (ACPC) plane, and identification of several anatomical landmarks required for regional parcellation. Finally, the Lesion-Seg component involves manual checking of the automatic lesion segmentation of subcortical hyperintensities (SH) for false positive errors.
While on-site training of the LE pipeline is preferable, readily available visual teaching tools with interactive training images are a viable alternative. Developed to ensure a high degree of accuracy and reliability, the following is a step-by-step, video-guided, standardized protocol for LE's manual procedures.

Lesion Explorer: A Video-guided, Standardized Protocol for Accurate and Reliable MRI-derived Volumetrics in Alzheimer&#039;s Disease and Normal Elderly

Lesion Explorer (LE) is a semi-automatic, image-processing pipeline developed to obtain regional brain tissue and subcortical hyperintensity lesion volumetrics from structural MRI of Alzheimer's disease and normal elderly. To ensure a high level of accuracy and reliability, the following is a video-guided, standardized protocol for LE's manual procedures.

病変エクスプローラ：アルツハイマー病における正確で信頼性のMRI誘導Volumetrics用ビデオガイド下、標準化されたプロトコルおよび標準高齢者

Obtaining in vivo human brain tissue volumetrics from MRI is often complicated by various technical and biological issues. These challenges are ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable cell lines are inoculated either by intravesical instillation (model of nonmuscle invasive growth) or intramural injection into the bladder wall (model of invasive growth). Both procedures are complex and highly time-consuming. Additionally, the superficial model has its shortcomings due to the lack of cell lines that are tumorigenic following instillation. Intramural injection, on the other hand, is marred by the invasiveness of the procedure and the associated morbidity for the host mouse.
With these shortcomings in mind, we modified previous methods to develop a minimally invasive approach for creating orthotopic bladder cancer xenografts. Using ultrasound guidance we have successfully performed percutaneous inoculation of the bladder cancer cell lines UM-UC1, UM-UC3 and UM-UC13 into 50 athymic nude. We have been able to demonstrate that this approach is time efficient, precise and safe. With this technique, initially a space is created under the bladder mucosa with PBS, and tumor cells are then injected into this space in a second step. Tumor growth is monitored at regular intervals with bioluminescence imaging and ultrasound. The average tumor volumes increased steadily in in all but one of our 50 mice over the study period.
In our institution, this novel approach, which allows bladder cancer xenograft inoculation in a minimally-invasive, rapid and highly precise way, has replaced the traditional model.

The established technique to inoculate primary invasive orthotopic bladder cancer xenografts requires laparotomy and mobilization of the bladder. This procedure inflicts significant morbidity on the mice, is technically challenging and time-consuming. We therefore developed a high-precision, percutaneous approach utilizing ultrasound guidance.

マウス同所性膀胱異種移植片の最小侵襲性の確立

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent marker. Mouse models (brain tumor and arthritis) were used to evaluate the usefulness of this method. Saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles tagged with CellVue Maroon (CVM) fluorophore were administered intravenously. Animals were then placed in the rotational holder (MARS) of the in vivo imaging system. Images were acquired in 10&#176; steps over 380&#176;. A rectangular&#160;region of interest (ROI) was placed across the full image width at the model disease site. Within the ROI, and for every image, mean fluorescence intensity was computed after background subtraction. In the mouse models studied, the labeled nanovesicles were taken up in both the orthotopic and transgenic brain tumors, and in the arthritic sites (toes and ankles). Curve analysis of the multi angle image ROIs determined the angle with the highest signal. Thus, the optimal angle for imaging each disease site was characterized. The MAROI method applied to imaging of fluorescent compounds is a noninvasive, economical, and precise tool for in vivo quantitative analysis of the disease states in the described mouse models.

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo quantitation of a fluorescent marker delivered by saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles. Employing mouse models of cancer and arthritis, we demonstrate how the MAROI signal curve analysis can be used for the precise mapping and biological characterization of disease processes.

蛍光SAPC-DOPSナノベシクルを用いて脳腫瘍、関節炎のin vivo光イメージング中

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Fast and Accurate Exhaled Breath Ammonia Measurement

This exhaled breath ammonia method uses a fast and highly sensitive spectroscopic method known as quartz enhanced photoacoustic spectroscopy (QEPAS) that uses a quantum cascade based laser. The monitor is coupled to a sampler that measures mouth pressure and carbon dioxide. The system is temperature controlled and specifically designed to address the reactivity of this compound. The sampler provides immediate feedback to the subject and the technician on the quality of the breath effort. Together with the quick response time of the monitor, this system is capable of accurately measuring exhaled breath ammonia representative of deep lung systemic levels. 
Because the system is easy to use and produces real time results, it has enabled experiments to identify factors that influence measurements. For example, mouth rinse and oral pH reproducibly and significantly affect results and therefore must be controlled. Temperature and mode of breathing are other examples. As our understanding of these factors evolves, error is reduced, and clinical studies become more meaningful. This system is very reliable and individual measurements are inexpensive. 
The sampler is relatively inexpensive and quite portable, but the monitor is neither. This limits options for some clinical studies and provides rational for future innovations.

Ammonia is an important physiologic metabolite relevant to various disease and wellness states. It is also a difficult molecule to measure in breath, which demands particular precautions be taken to obtain accurate results. Not all factors influencing ammonia are known, but progress can be difficult without accounting for these factors.

高速かつ正確な呼気アンモニア測定

This exhaled breath ammonia method uses a fast and highly sensitive spectroscopic method known as quartz enhanced photoacoustic spectroscopy (QEPAS) that ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

ヒト腫瘍異種移植片からマウス細胞の枯渇は大幅に標的細胞の下流分析を向上させます

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...