The authors acknowledge financial support from Houston Methodist Research Institute, the National Natural Science Foundation of China (Nos., 21231007 and 21121061), the Ministry of Education of China (Nos., 20100171110013 and 313058), the National Basic Research Program of China (973 Program No. 2014CB845604), and the Fundamental Research Funds for the Central Universities.

1. PCPS粒子の準備<ol><li> 2時間、95℃での過酸化水素の30％溶液中の非官能化多孔質シリコン粒子を酸化する。緩やかに攪拌しながら65℃で2日間、イソプロピルアルコール2％（3-アミノプロピル）トリエトキシシランの溶液中で酸化された粒子をアミノ化。 </li><li>ペレットを懸濁する短時間の超音波処理を使用して、18,800×gで30分間溶液を遠心し、イソプロピルアルコールとエタノールで3回二粒子を洗浄する。ステップ1.3および1.4を実行する際にエタノール溶液中の粒子のままにしておきます。 </li><li>アイソトン希釈液10mlに粒子懸濁液（ 例えば 、10μl）を既知の容量を追加し、ストック溶液中の粒子の濃度を決定するために、粒子計数分析装置の粒子を数える。 </li><li> （3-ジメチルアミノプロピル） - - N &#39;エチルカルボジイミド塩酸塩（EDC、0.1ナノモル）/ N NとL-アルギニン（0.1ナノモル）の酸基を活性</em&gt;穏やかに撹拌しながら室温で2時間、エタノール20ml中のヒドロキシスクシンイミド（NHS、0.1ナノモル）。 </li><li>簡単に言えば、粒子原液を超音波処理し、L-アルギニン溶液に10億粒子を添加し、緩やかに攪拌しながら室温で18時間反応を残す。 </li><li>で4時間エタノール20mlにEDC（0.1ナノモル）/ NHS（0.1ナノモル）と（tert-ブトキシカルボニル）-L-アスパラギン酸カルボニル（Boc-ASP-OH、1ナノモル） - Nの最初のアスパラギン酸グループをアクティブ化緩やかに攪拌しながら4℃。 </li><li> 10ミリリットルのエタノール中50 mgのポリエチレンイミンを溶解及びBoc-ASP-OH混合物にソリューションを追加します。反応を穏やかに撹拌しながら室温で24時間進行しましょう​​。 </li><li>緩やかに攪拌しながら6時間4℃でEDC（0.1ナノモル）/ NHS（0.1ナノモル）とのBoc-ASP-OH / PEI溶液の第二アスパラギン酸基をアクティブにします。 </li><li> PCPS粒子を得るためには、ステップ1.8からのBoc-ASP-OH / PEI溶液にステップ1.5から粒子溶液を追加。反応は穏やかST RTで18時間進行させる<html> irring。 </li><li>ペレットを懸濁する短時間の超音波処理を使用して、18,800×gで30分間溶液を遠心し、エタノールで粒子溶液を3回洗浄する。 </li></ol> 2. PCPS粒子特性評価<ol><li>走査型電子顕微鏡（SEM）を用いて、粒子のサイズを測定する。 <ol><li>きれいなシリカのSEMサンプルスタブ上の粒子懸濁液を一滴（エタノール中万個/μl）を配置し、真空下、室温で乾燥させてください。 </li><li>レンズ内検出器を用いての3-5mm作業距離8 15kVでSEM画像を測定する。 </li></ol></li><li>粒子アナライザーシステムを用いて、粒子のゼータ電位を測定する。 <ol><li> 1ミリリットルの10mMリン酸緩衝液（pH7.4）で、粒子懸濁液10μl（エタノール中万個/μl）を混ぜる。 </li><li>折り畳まれた毛細管細胞にサンプルをロードし、製造者の指示に従ってゼータ電位を測定する。 </li></ol></li></ol>ル &quot;&gt; 3。PCPS粒子へのsiRNAのロード中<ol><li>真空O / Nの下（PCPS粒子作製工程1.9から）PCPS粒子を乾燥させます。 </li><li>乾燥したPCPS粒子と超音波処理を簡単にヌクレアーゼフリー水（20μL）中のsiRNA（4μgの）を追加します。 siRNAの比率に次粒子を使用してください：2×10 5個/ 0.2μgのsiRNAを、4×10 5個/ 0.2μgのsiRNAを、6×10 5個/ 0.2μgのsiRNAを、8×10 5個/ 0.2μgのsiRNAを、10× 10 5個/ 0.2μgのsiRNAおよび12×10 5個/ 0.2μgのsiRNAを。 </li><li> siRNAは、粒子への結合を可能にするためにシェーカー上で4℃で3時間（1,000 rpm）でインキュベートする。 </li></ol>のsiRNA / PCPSパーティクル比の4の最適化<ol><li> siRNAの比が異なる粒子（PCPS粒子へのsiRNAのロードを参照）PCPS /コントロールsiRNA粒子の20μlにDNAローディング色素を追加します。 </li><li> SAMのロードDNAゲル染色を含む2％アガロースゲルに公正妥当。 </li><li>ランニング緩衝液中で20分間120 Vの定電圧で電気泳動を行います。 </li><li>画像取得と解析ソフトウェアでゲルを分析します。 </li></ol> PCPS粒子からのsiRNAの5リリース<ol><li>ドデシル硫酸ナトリウム（SDS、2％）中のsiRNA比（ステップ3を参照）とは異なる粒子とPCPS /対照siRNA粒子の20μLを混合し、室温で1時間放置する。 </li><li>サンプルにDNAローディング色素を追加します。 </li><li> DNAゲル染色を含む2％アガロースゲルにロードしたサンプル。 </li><li> DNAの電気泳動装置と電源を用いてランニング緩衝液中で20分間、120 Vの定電圧で電気泳動を行う。 </li><li>画像取得と解析ソフトウェアでゲルを分析します。 </li></ol> PCPS粒子の6。共焦点顕微鏡<ol><li> PCPS /蛍光コントロールsiRNA粒子（10×10 5個/ 0の5μlを添加する。ガラスカバースリップへの2μgのsiRNA / 20μL）。 </li><li>共焦点顕微鏡により粒子層を可視化。 </li></ol>のArg-PEI /コントロールsiRNAナノ粒子の7キャラ<ol><li>シリコン材料を分解およびArg-PEI /対照siRNAナノ粒子を形成するために、リン酸緩衝生理食塩水100μlにPCPS / siRNAの粒子（10×10 6 PCPS粒子/2μgのsiRNA）を追加し、37℃で（1,000 rpm）で振る2日。 </li><li> 18800×gで30分間サンプルを遠心し、上清を収集します。 </li><li>動的光散乱（DLS）による形成のArg-PEI / siRNAのナノ粒子のサイズを測定する。 <ol><li> 1ミリリットルの10mMリン酸緩衝液（pH7.4）で10μlの上清を混合し、プラスチック製キュベットに配置します。 </li><li>製造業者の説明書に従って粒子アナライザーシステムを用いて粒子のサイズを測定する。 </li></ol></li><li>形成されたのArg / PEI-siRNAのサイズと形態を決定します原子間力顕微鏡のナノ粒子。 <ol><li>シリコンウエハー上に上清と場所の10μlのを取る。 </li><li>原子間力顕微鏡（AFM）を有する粒子を可視化する。 </li></ol></li></ol> 8.細胞培養<ol><li>細胞培養培地中で培養MDA-MB-231ヒト乳癌細胞を、10％ウシ胎児血清および1％ペニシリン-ストレプトマイシン、5％CO 2、湿度95％及び37℃で補充した。 </li></ol> PCPS粒子との生細胞の9共焦点顕微鏡<ol><li> 2ウェル培養プレート中で細胞を24時間/ウェルの3×10 5細胞の播種密度でスライドする。 </li><li>細胞に蛍光対照siRNAを搭載しPCPS粒子（10×10 5個/ siRNAの比に0.2μgの粒子、50 nMのsiRNA）を追加します。 </li><li> 12時間後の粒子博覧会のために（チャンバに付属、5％CO 2、湿度95％、37℃）、共焦点顕微鏡で細胞の映画を記録確認してください。 </li></ol> PCPS粒子との固定された細胞の10共焦点顕微鏡<ol><li> 2ウェル培養プレート中で細胞を24時間/ウェルの3×10 5細胞の播種密度でスライドする。 </li><li>細胞に蛍光対照siRNA（10×10 5個/ siRNAの比に0.2μgの粒子、50 nMのsiRNA）をを搭載しPCPS粒子を追加し、1日、7日間と10日間インキュベートする。 </li><li>リン酸緩衝生理食塩水で細胞を2回洗浄し、その後、10分間、4％パラホルムアルデヒド溶液で固定します。 </li><li>リン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄。 </li><li> 10分間0.1％のオクチルフェノールエトキシレートと細胞を透過した後、それらをリン酸緩衝生理食塩水で三回洗浄する。 </li><li>穏やかに攪拌しながら室温で10分間、リン酸緩衝生理食塩水、ウシ血清（10 mg / ml）でのアルブミンで細胞をブロックする。 </li><li>繊維状アクチンを可視化するために、蛍光標識したファロイジン（1μL/ 40μlの細胞をインキュベート穏やかに攪拌しながら室温で20分間この溶液）をブロックした後、リン酸緩衝生理食塩水で洗う。 </li><li>フレームからスライドを削除し、核を可視化するために4 &#39;、6-ジアミジノ-2-フェニルインドール（DAPI）で抗退色試薬を加える。 </li><li>上にカバーガラスを追加し、共焦点顕微鏡を用いた細胞の画像を撮影する。 </li></ol> PCPS /蛍光コントロールsiRNA粒子を用いた細胞の11。フローサイトメトリー<ol><li> 24時間/ウェルの3×10 5細胞の播種密度で、6ウェルプレート中の細胞をプレート。 </li><li>細胞に蛍光対照siRNAを搭載しPCPS粒子（10×10 5個/ siRNAの比に0.2μgの粒子、50 nMのsiRNA）を追加し、24時間インキュベートする。 </li><li>リン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄し、細胞スクレーパーでそれらをこすり。 </li><li>分析前に、2％ウシ胎児血清を含むリン酸緩衝生理食塩水で細胞を保存する。ネガティブコントロールとして未処理細胞を使用してください。 </li><li>流れCYを実行しますtometry。 </li></ol> PCPS粒子およびPCPS /コントロールsiRNA粒子を用いた細胞の12細胞の生存率<ol><li> 24時間/ウェルの3×10 3個の細胞密度で96ウェルプレート中の細胞をプレート。 </li><li> PCPS粒子で細胞を処理（1.5×10 5 /ウェルおよび6×10 5 /ウェル）またはPCPS /コントロールsiRNA粒子48（10×10 5個/ siRNAの比に0.2μgの粒子、10および100nMのsiRNA）時間と72時間。対照としてリン酸緩衝生理食塩水（追加粒子と同じ体積）で処理した未処理細胞および細胞を使用する。三連で各サンプルをアッセイ。 </li><li>製造業者の説明書に従って細胞増殖アッセイを行う。 </li><li>平均±標準偏差としてデータを表す。 </li></ol> PCPS / ATM変異のsiRNA粒子を用いた細胞の13ウエスタンブロット<ol><li>細胞密度で6ウェルプレート中の細胞をプレートに2×10 5細胞/ワット24時間のエル。 </li><li> PCPS /コントロールsiRNA（50 nM）の粒子またはPCPS / ATM siRNAを72時間（50 nM）の粒子で細胞をインキュベートする。コントロールとして未処理細胞を使用してください。 </li><li>溶解プロテアーゼ阻害剤カクテルを補充したタンパク質抽出試薬を用いて細胞。 </li><li> 14000×gで10分間の細胞溶解物を遠心し、上清を回収する。 </li><li>製造業者の説明書に従ってタンパク質定量アッセイを用いてタンパク質濃度を決定する。 </li><li> （5μlの2-メルカプトエタノール/ mlのバッファーで）サンプルローディングバッファーをサンプルに添加し、99℃で6分間、それらを加熱する。 </li><li>ランニング緩衝液中で12％SDSポリアクリルアミドゲル中のタンパク質サンプル（20μgの/μl）をロードし、電気泳動装置と電源を用いてポリアクリルアミドゲル電気泳動（1時間、120 V）を行う。 </li><li>電気泳動装置を用いてニトロセルロース膜（1時間、100 V）を（20％メタノール）転写バッファーでゲルを転送し電源。 </li><li> 1時間5％ドライミルクで膜をブロックします。 </li><li>千希釈O / N：1で（ステップ13.9）からブロッキング溶液中で（ウサギから）ATM一次抗体で膜をインキュベートする。 </li><li> 1時間2500希釈：1、0.1％ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートを含有するリン酸緩衝生理食塩水でメンブレンを洗浄した後（ステップ13.9）から、ブロッキング溶液中で二次抗体（抗ウサギ）と一緒にインキュベートする。 </li><li> 0.1％ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートを含有するリン酸緩衝生理食塩水でメンブレンを洗浄し、画像取得及び解析ソフトウェアを用いてウェスタンブロット検出試薬を有するタンパク質バンドを検出する。 </li><li>二次抗体（抗マウス1：4000希釈）：ローディングコントロールのために、膜と繰り返し（10,000希釈マウスから、1）βアクチン一次抗体を使用して13.9から13.12ステップ洗う。 </li></ol>

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The authors declare that they have no competing financial interests.

このプロトコルは、細胞へのsiRNAの配信の成功とトランスフェクションのための方法を説明します。具体的には、siRNAの送達は、カチオン官能化されたpSi粒子からなる多機能プラットフォームを使用することによって達成される。様々な癌遺伝子は高い特異性で標的化することができるようにするsiRNA療法の使用は、大きな可能性、 例えば 、癌治療を有する。したがって、siRNAの治療の...

低分子干渉RNA（siRNA）は、遺伝子の発現を抑制することができる二本鎖RNA分子である。近年では、siRNAは、臨床応用1-5将来の使用のための治療の可能性を示してbiodrugsの新世代として開発されている。しかし、siRNAの治療の成功の実装が原因ヌクレアーゼ、貧しい細胞内取り込み、低トランスフェクション効率およびエンドソーム/リソソーム5から非効率的なリリースによる分解に、かなりの課題である。これらの障害の多くは、安全かつ効率的に病変組織にsiRNAを送達することができ、配信プラットフォームの開発によって克服することができる。ウイルスのキャリアと比較して、非ウイルスプラットフォームは、安全性、低コスト、調整の容易さなどのいくつかの利点を提供する。特に、このようなポリマーおよび脂質などの陽イオン性ナノ粒子は、siRNA送達のために有用3が証明されている。 以前、我々は、円盤状のDRを開発したUG送達システム、多段ベクトル（MSV）と呼ばれる。このプラットフォームは、1つの車両が別のから解放されているシーケンシャルな段階に基づいている。第二段目の車両が薬物または造影剤6,7を装填したナノ粒子である一方、第段階車両は、生分解性の多孔質シリコン（のpSi）から作られたマイクロ粒子である。 Siは8を分解するのpSi材料に埋め込 ​​まれたナノ粒子は、徐々に放出される。 Si粒子を使用する利点は、形態および表面特性を容易に最適な生体内分布および薬物放出を達成するように調整することができることである。最近、腫瘍組織へのsiRNAのリポソームの送達のためのMSVプラットホームの使用の成功は、卵巣癌および乳癌のマウスモデル9、10に示した。 本研究では、MSVプラットフォームのプリンシパルに基づいてsiRNAのための普遍的なデリバリーシステムを作製した。この送達システムの有効性は、以前に我々を実証されている異なるsiRNA分子11をる。システムは、ポリエチレンイミン（PEI）およびアルギニン（Argで）でグラフトされたpSiからなる、ポリカチオン官能化多孔質シリコン（PCPS）担体である。以前に11 demonstartedとしてArgおよびのpSiが、PEIの毒性を減少するために役立つことができるが、PEIは、siRNAとの静電相互作用を形成するのを助けることができる。のpSi微粒子がsiRNAの保護と持続的な放出を可能にしながら、また、PEIの存在は、細胞内取り込みとエンドソーム脱出を支援することができます。のpSi粒子が徐々に異なる形態および狭いサイズ分布11を有しているのArg-PEI / siRNAのナノ粒子（ 図1）の形成をもたらす、生理学的条件下で分解する。 PCPS / siRNAのシステムの安定性に関する詳細については、シェンらの研究を参照してください。11。第二段階のナノ粒子は最初にpresaの複数形ではないので、このPCPSプラットフォームは、従来のMSVとは異なるntのキャリアであるが、第一段階キャリヤ11は、12を劣化させるような時間をかけて形成されている。PCPSシステムのsiRNA積載効率、細胞毒性および遺伝子サイレンシング効率は、 インビトロで評価されている。トランスフェクション効率は、DNA修復10に関与する突然変異した毛細血管拡張性運動失調（ATM）癌遺伝子に対するsiRNAを用いて測定した。以前に、ATMの抑制は乳癌モデル10における腫瘍増殖を減少させることが示されている。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1812">
	<tbody>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;width:605px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:421px;">Company/Institution</td>
			<td style="width:133px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:653px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Polyethylenimine (PEI), branched</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">408727</td>
			<td style="width:653px;">Average molecular weight ~25,000 Da</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">L-Arginine</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">A5006</td>
			<td style="width:653px;">Reagent grade, &#8805;98%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Boc-Asp-OH</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">408-468</td>
			<td style="width:653px;">99%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">(3-&#8203;Aminopropyl)&#8203;triethoxysilane</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">440140</td>
			<td style="width:653px;">99%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Hydrogen peroxide solution</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">216763</td>
			<td style="width:653px;">30&#160;wt. % in H2O</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Sulfuric acid</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">339741</td>
			<td style="width:653px;">100.00%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">W292907</td>
			<td style="width:653px;">&#8805;99.7%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Ethanol</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">459844</td>
			<td>&#8805;99.5%&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>03449</td>
			<td>&#8805;99%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Albumin from bovine serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7030-10G</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Ataxia-telangiectasia mutated siRNA&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Designed in-house</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Tris Acetate-EDTA buffer</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">T9650</td>
			<td style="width:653px;">For DNA agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">TWEEN 20</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:653px;">Polyethylene glycol sorbitan monolaurate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">2-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:421px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>M6250</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3771</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sodium phosphate monobasic</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>71496</td>
			<td style="width:653px;">For making phosphate buffer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>71640</td>
			<td style="width:653px;">For making phosphate buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Mouse IgG</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">A4416</td>
			<td style="width:653px;">Secondary antibody (anti-mouse) for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">N-Hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">130672</td>
			<td style="width:653px;">98%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">CELLSTAR 96W Microplate Tissue Culture Treated Clear w/ Lid</td>
			<td style="width:421px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:133px;">655182</td>
			<td style="width:653px;">96-well plate</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">10X Tris-Glycine Liquid</td>
			<td style="width:421px;">Li-Cor&#160;</td>
			<td style="width:133px;">928-40010</td>
			<td style="width:653px;">Transfer buffer for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Paraformaldehyde solution 4% in PBS&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Santa Cruz</td>
			<td>Sc-281692</td>
			<td style="width:653px;">Fixation of cells</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS)</td>
			<td style="width:421px;">Promega</td>
			<td style="width:133px;">G5421</td>
			<td style="width:653px;">Proliferation assay</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:133px;">BP399-500</td>
			<td style="width:653px;">10 X Solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Corning cellgro Dulbecco&#39;s Modification of Eagle&#39;s (Mod.)</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:133px;">MT-15-017-CM</td>
			<td style="width:653px;">Cell culture media, 1X solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td>AC21568-2500</td>
			<td style="width:653px;">Octyl phenol ethoxylate, permeabilization agent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Cover glass</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-530C&#160;</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Methanol</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>A412-1</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot transfer buffer</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Plastic Cuvettes</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:133px;">14-377-010&#160;</td>
			<td style="width:653px;">For size measurements using Zetasizer Nano ZS</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Molecular BioProducts RNase AWAY Surface Decontaminant</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:133px;">14-754-34</td>
			<td style="width:653px;">Spray for removing RNAse contamination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Agarose</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:133px;">BP165-25</td>
			<td style="width:653px;">Low melting point, for running RNA samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Invitrogen</td>
			<td>P36935</td>
			<td style="width:653px;">Antifade reagent with DAPI, nucelus detection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td style="width:421px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:133px;">A12379</td>
			<td style="width:653px;">Dissolve 300 units in 1.5 ml methanol, detection of filamentous actin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">SYBR Safe DNA Gel Stain</td>
			<td style="width:421px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:133px;">S33102</td>
			<td style="width:653px;">Visualization of RNA</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Negative Control siRNA</td>
			<td style="width:421px;">Qiagen</td>
			<td style="width:133px;">1022076</td>
			<td style="width:653px;">Control siRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">AllStars Neg. siRNA AF 555</td>
			<td style="width:421px;">Qiagen</td>
			<td style="width:133px;">1027294</td>
			<td style="width:653px;">Fluorescent control siRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Cell scraper</td>
			<td style="width:421px;">Celltreat</td>
			<td>229310</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BioLite Multidishes and Microwell Plates</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td>130184</td>
			<td style="width:653px;">6-well plate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce LDS Sample Loading Buffer (4X)&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td>84788</td>
			<td style="width:653px;">Sample loading buffer for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Pierce BCS Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:133px;">23227</td>
			<td style="width:653px;">Protein quantification assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktails (100X)</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:133px;">78430</td>
			<td style="width:653px;">Protease inhibitor cocktail, use at 1X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:133px;">78501</td>
			<td style="width:653px;">Protein extraction reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sorvall Legend Micro 21R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002440</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Beta Actin Antibody&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific&#160;</td>
			<td>MA1-91399</td>
			<td>&#946;-actin primary antibody (from mouse) for western blor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6X TriTrack DNA Loading Dye</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td>R1161</td>
			<td style="width:653px;">DNA loading dye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nuclease-Free Water&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Life Technologies</td>
			<td>AM9938</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Fat Dry Milk</td>
			<td style="width:421px;">Lab Scientific</td>
			<td>M0841</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-well BD Falcon culture slides&#160;</td>
			<td style="width:421px;">BD Biosciences</td>
			<td>354102</td>
			<td style="width:653px;">2-well culture slides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amersham ECL Western blot detection reagent.&#160;</td>
			<td style="width:421px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td style="width:133px;">RPN2106</td>
			<td style="width:653px;">Western blot detection reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BA Membranes</td>
			<td style="width:421px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>10402096</td>
			<td style="width:653px;">Nitrocellulose membrane for Wester blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ATM (D2E2) Rabbit mAb</td>
			<td style="width:421px;">Cell Signaling</td>
			<td>2873S</td>
			<td style="width:653px;">ATM primary antibody (from rabbit) for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td style="width:421px;">Cell Signaling&#160;</td>
			<td>7074</td>
			<td style="width:653px;">Secondary antibody (anti-rabbit) for Western blot&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Folded capillary cells</td>
			<td style="width:421px;">Malvern&#160;</td>
			<td style="width:133px;">DTS 1061</td>
			<td style="width:653px;">For zeta potentail measurements using Zetasizer Nano ZS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">MDA-MB-231 cell line</td>
			<td style="width:421px;">ATCC</td>
			<td style="width:133px;">HTB-26</td>
			<td style="width:653px;">Mammary Gland/Breast</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">12% Mini-PROTEAN TGX Gel</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>456-1043&#160;</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biorad PowerPac HC</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>164-5052</td>
			<td>Power supply for electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x Tris/Glycine/SDS Buffer</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>161-0732</td>
			<td>Running buffer for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wide Mini-Sub Cell GT Cell</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>170-4405</td>
			<td>Electrophoresis equipment for DNA agarose gel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini-PROTEAN Tetra cell</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>165-8000</td>
			<td>Electrophoresis equipment for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ChemiDoc XRS+ System with Image Lab Software</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>170-8265</td>
			<td>Image acquisition and analysis software for gels and blots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#34; (10cm) dia., 5x7mm diced Silicon Wafer</td>
			<td>Ted Pella&#160;</td>
			<td>16007</td>
			<td>Silicon waferfor scanning electron microscopy and atomic force microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermomixer R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22670107</td>
			<td>Shaker&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoton II diluent</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>8546719</td>
			<td>Isoton diluent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multisizer 4 Coulter Counter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A63076</td>
			<td>Particle counting analyzer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Non-functionalized porous silicon particles&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Microelectronics Research Center, University of Texas at Austin</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Dicoidal shape. 2.6 &#956;m (diameter) x 0.7 &#956;m (hight), provided in isopropyl alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Zetasizer Nano ZS</td>
			<td style="width:421px;">Malvern</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Particle analyzer system for size and zeta potential&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Scanning Electron Microscope</td>
			<td style="width:421px;">FEI</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Particle size and shape&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Atomic Force Microscope</td>
			<td style="width:421px;">Bruker</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Particle size and shape</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Fluo ViewTM 1000 Confocal Microscope</td>
			<td style="width:421px;">Olympus</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Visualization of fixed and live cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

porous silicon microparticles for delivery of sirna therapeutics

Small interfering RNA (siRNA) can be used to suppress gene expression, thereby providing a new avenue for the treatment of various diseases. However, the successful implementation of siRNA therapy requires the use of delivery platforms that can overcome the major challenges of siRNA delivery, such as enzymatic degradation, low intracellular uptake and lysosomal entrapment. Here, a protocol for the preparation and use of a biocompatible and effective siRNA delivery system is presented. This platform consists of polyethylenimine (PEI) and arginine (Arg)-grafted porous silicon microparticles, which can be loaded with siRNA by performing a simple mixing step. The silicon particles are gradually degraded over time, thereby triggering the formation of Arg-PEI/siRNA nanoparticles. This delivery vehicle provides a means for protecting and internalizing siRNA, without causing cytotoxicity. The major steps of polycation functionalization, particle characterization, and siRNA loading are outlined in detail. In addition, the procedures for determining particle uptake, cytotoxicity, and transfection efficacy are also described.

このプロトコルは、安全で効率的なsiRNAトランスフェクションのための非ウイルス送達システムの使用を記載する。 SEMの結果は、PCPS粒子の形状は円筒形であり、2.6ミクロン（ 図2A）の直径を有することが明らかになった。粒子は、正にそれによって負に帯電したヌクレオチドと結合静電が可能約8.21のゼータ電位（ 図2B）が充電される。 PCPS粒子の異なる層の共焦点?...

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Porous Silicon Microparticles for Delivery of siRNA Therapeutics

配信は、低分子干渉RNA（siRNA）の治療的実施のための主要な課題である。このプロトコルは、アルギニン及びポリエチレンイミングラフト化多孔質シリコン微粒子からなる多機能性および生体適合性siRNA送達プラットフォームの使用を含む。

siRNAの治療を送達するための多孔質シリコンマイクロ粒子

Small interfering RNA (siRNA) can be used to suppress gene expression, thereby providing a new avenue for the treatment of various diseases. However, the ...

porous-silicon-microparticles-for-delivery-of-sirna-therapeutics

Research

JoVE Journal

Bioengineering

10.8K ビュー.  Houston Methodist Research Institute. 配信は、低分子干渉RNA（siRNA）の治療的実施のための主要な課題である。このプロトコルは、アルギニン及びポリエチレンイミングラフト化多孔質シリコン微粒子からなる多機能性および生体適合性siRNA送達プラットフォームの使用を含む。 