3つの臨床実験は、糞便微生物叢移植が多くのヒト疾患の治療の可能性を運ぶことを示唆しました。さらなるメカニズムの研究は、FMTをベンチからベッドサイドに持ち込むのに役立ちます。この方法は、送達経路に経口経管制を採用し、より正確な体積送達と迅速な吸収を可能にします。
適度な技術的スキルのみが必要です。手順を実演するのは、私たちの研究室の上級研究員であるXioying Zhongです。滅菌ペーパータオル、鈍端鉗子、および50ミリリットルの円錐管を準備することから始めます。
ペーパータオルと鉗子を別々のオートクレーブバッグに入れ、摂氏180度で乾熱で30分間オートクレーブします。滅菌円錐形チューブの重量を量り、チューブにその重量を書き留めます。動物室のバイオセーフティキャビネットの電源を入れます。
寝具なしでオートクレーブ滅菌した清潔なマウスケージを取り、バイオセーフティキャビネットに入れます。カバーとフードラックを取り外し、キャビネット内に置きます。滅菌ペーパータオルをケージの底に置き、金属製ラックをケージの上に戻します。
年齢が一致した糞便ドナーを特定し、マウスケージをバイオセーフティキャビネットに入れます。ケージを開き、ドナーマウスの尾をそっとつかみ、きれいなケージの上にある金属製のラックに置きます。ケージカバーをラックの上に置き、動物が排便するのを待ちます。
糞便ペレットを集めて、滅菌済みの50ミリリットルの円錐管に入れます。性別でペレットを引っ張ります。チューブを再度計量し、糞便ペレットの重量を計算します。
通常の生理食塩水に10%グリセロール溶液を加えて滅菌溶液を調製します。糞便ペレットの各グラムのために円錐形の管に10ミリリットルのこの溶液を加えてください。この混合物を、ヒュームフード内のベンチトップホモジナイザーを使用して低速で30秒間3回ホモジナイズし、糞便を再懸濁します。
糞便懸濁液を2層の滅菌綿ガーゼでろ過します。ろ液を一時的に冷蔵庫に最大6時間保管するか、滅菌極低温バイアルに詰めてマイナス80度の冷凍庫に保管します。標準的な手順に従って、ホモジナイザーまたはブレンダーを完全に清掃します。
凍結サンプルを使用する場合は、凍結糞便懸濁液を氷上で解凍します。解凍した糞便懸濁液をボルテックスで混合します。新鮮なまたは解凍した糞便懸濁液を1ミリリットルの注射器に移します。
マウスの体重を量り、適切な経管栄養針のサイズと最大投与量を選択します。マウスの鼻の先端から胸骨の底までの長さを測定して、経管栄養針をテストします。生理食塩水または糞便懸濁液に10%グリセロールをシリンジに入れ、シリンジと針の内側の気泡を取り除きます。
マウスケージを1つバイオセーフティキャビネットに入れます。プラスチック製ケージカバーを取り外し、金属製ラックを所定の位置に残します。片手で金属製ラックを開きます。
1匹のマウスの尻尾をつかみ、金属製のラックに置きます。片手でマウスの尾を持ち、もう一方の手の親指と中指を使って、肩の上の皮膚をつかんで動物を拘束します。動物の頭をゆっくりと後方に伸ばし、片手で頭を所定の位置に保持します。
経管針を口の中の舌の上に置きます。針が食道に到達するまで、上部パレットに沿ってゆっくりと前進します。一気に針をスムーズに通します。
針が適切に配置され、確認されたら、針に取り付けられたシリンジを押してゆっくりと材料を投与します。投与後、針をそっと引き抜きます。.マウスに印を付けて、ホームケージに戻します。
呼吸困難や苦痛の兆候を探して、動物を5〜10分間監視します。糞便微生物叢移植後12〜24時間の間にマウスを再度監視します。酵素免疫測定法により、インターロイキン10欠損マウスの血漿中においてB型ナトリウム利尿ペプチドが顕著に上昇していることを明らかにした。
健康なドナーの糞便微生物叢移植は、B型ナトリウム利尿ペプチドレベルの増加を有意に軽減しました。心エコー検査では、野生型マウスと比較してインターロイキン10欠損マウスにおいて左心室駆出率の有意な減少を検出した。糞便微生物叢移植により減少は有意に解消された。
これらの結果は、健康なドナーの糞便微生物叢移植が大腸炎誘発性心障害を軽減したことを示唆しています。プロトコルを試みるときは、適切な経管栄養針を選択することが不可欠です。柔軟なプラスチック製の栄養チューブは、初心者にとってより良い選択かもしれません。
強制投与前に動物の取り扱いを練習することも重要です。
