私たちは、交配試験に彼らの助けのためにアレックスHitchenとメグブースに感謝したいと思います。この作品は、TPにH015604 / 1 / NERCグラントNEによってサポートされていました。

食品着色料とフライ食品の調製<ol><li>底部にある食品の約20ミリリットル（ 図1）を標準ショウジョウバエバイアルを取る。沸騰水1リットル使用して、食品ミックス以下の配合を使用します寒天10gのデキストロース、85gのトウモロコシ粉60gを、酵母を40gと、とろとろの5分間撹拌した。混合物を75℃に冷却した後、10％nipagenの25ミリリットルを追加します。 </li><li>食品を冷却し、2滴加える固化した後-食品の最上部に青い食品着色料の（約0.5〜1 ml）を、バイアルの表面全体に広がった（ 図1）。好ましければ、異なる色の染料を使用してください。 </li><li>染料が食品の最上層で吸収されるように、冷蔵庫に2日間食べ物を残し。これは、成熟期間中にハエを損傷し、過度の湿気を避けることができます。その後、その後、過剰な水分がまだ余分な水分を吸い取るための問題である場合にティッシュペーパーの小片を追加し、それを削除します。 </li><li>転送は、個別またはグループで食品上に飛ぶ。 注：ハエが食べ物に置かれるの1日以内に腸の染色を得ることができます。また、完全に実験前（食用色素への暴露からは観測されなかった成熟期間中の死亡率の増加）に染め食べ物にハエ成熟。 </li><li>染めハエが非染めハエと容易に区別することができることを確認してください。染料の濃度が高い、または異なる色素のいずれかを使用して1.4 - 彼らは区別することができない場合は、繰り返しが1.1を繰り返します。 </li></ol>食品ぬりえを使用して2つの男と交尾トライアル<ol><li>子孫を製造するために、女性と男性のハエのペアを含む複数のバイアルを（幼虫の混雑を避けるために世話をするが、雄と雌の小グループが、また適している）を設定。 7日 - メスは卵を産むと、すべての5つの新しいバイアルにハエを移動できるようにします。対象の種に適した温度（22℃Fで保存バイアルまたはD. pseudoobscuraとD. Dのsubobscuraと25°C キイロ ）。 </li><li> 25°C、Dのpseudoobscuraで6時間- -実験的なハエを収集する前に、彼らは処女（ キイロショウジョウバエになり確実にするために、男性と女性を収集する前に設定した時間に収集バイアルからすべてのハエを取り除く、22℃で18時間とD.のsubobscura - 22℃で24時間）。 注：ハエが処女でない場合は、この意志バイアス交配試験15で彼らの行動。 <ol><li>ストアと個別に標準75×20ミリメートルのプラスチックバイアル中の成熟した男性（食品の〜20ミリリットルを含む）。これは、男性は、グループ16内に保持されている場合、いくつかの種で見られる男性の配偶行動とフィットネスにマイナスの影響を避けることができます。 </li><li>所望の処置（この場合はCO 2麻酔）への男性の半分を公開します。 CO 2マットを使用するか、必要な時間のためにハエを露出するようにタップします。 MALの店舗の半分色の食品の各治療におけるES交配が行われるまで。これは交配試験中に、それらを視覚的に区別できるようになります。 </li><li>転送するためのハエはアスピレータ17を使用しています。治療と男性の色の状態の両方を識別するために、各バイアルにラベルを付けます。ここでは、4つの処理を使用（麻酔を、無着色= G-NC、麻酔、色= GC、無麻酔、無着色、NG-NC、無麻酔、着色された、NG​​-C）。 </li></ol></li><li> 10のグループとして成熟する生鮮食品バイアル中に新たに登場し、女性を転送します。 </li><li> 3日間、D.のpseudoobscura - - 5日、D.のsubobscura -ハエが交配年齢（ キイロショウジョウバエに成熟することを許可する。7日18ショップが検討されて種に適した温度D（例えば、22℃で飛ぶ。pseudoobscuraおよびD.のsubobscuraおよびキイロショウジョウバエのために25°C）。 </li><li> CONT（個々のバイアルにメスを移動交配バイアルに順化のための交配裁判の前に1日）食品の〜20ミリリットルをaining。バイアルを区別することができるように、これらのバイアルにラベルを付けます。ニュートラルラベリング（ すなわち 、1から150）を使用して実験を盲目にするように注意してくださいので、それはすべてのバイアル中にハエの身元を推測することはできません。 注：各バイアルにハエを置き人は、彼らが染色された治療法に注意するよう、各バイアルに入れハエの正体を知っている必要があります。しかし、交配時計観察者が自分の身元を知っているべきではありません。これを行うには、少なくとも2の実験者は1つがセットアップすると1が観察するために、必要とされるであろう。 </li><li> 10との間で交配試験を開始 - 午前12時、または光はハエが（ハエのための「夜明け」）にさらされている明/暗サイクルに乗って来ると一致している時。吸引器を使用して（シングル女性のフライを含む）を各交配バイアルに2つの雄ハエを追加します。 2人の男性が異なる処置（麻酔またはからのものであることを確認してくださいコントロール）と、その一方が互いに区別することを可能にし、雄が染色されている注意すべき腸の染色を有する。 </li><li> （ - 色の着色または非いずれか）交尾が発生した場合、仲間は男性の状態を記録。 2時間の最後の試験は、想定した場合、女性は交尾しません。 注：2時間は、これらの種に適しているが、他のショウジョウバエは、多かれ少なかれ時間を必要とするかもしれない。 </li></ol> 3.独身男性の交尾トライアル<ol><li>独身男性試験のため、2回交換してプロトコル2を繰り返します。 <ol><li>ステップ2.3に着色食品に男性を保持しません。 </li><li>ステップ2.7では、各バイアルにのみ独身男性を追加します。 </li></ol></li><li>ステップ2.8において、嵌合開始し、交配が終了時刻が記録されるべき、時間ハエがバイアルに添加された時間を記録する。これらの値から、交尾成功、遅延、および期間を計算。 </li></ol> 4.データ解析<ol><li> ANAのための適切な統計パッケージを使用して、溶解。データが正常であり、唯一の2つの処理がある場合は、t検定または同等の一般化線形モデル（GLM）を使用します。 2つの雄の実験のために、すべての基本的な統計パッケージで提供され二項の試験または二項GLMを使用しています。 注：サンプル·データでは、すべての分析は、Rバージョン3.0.3 19で行った。 </li><li>各治療20の待機時間と期間の頻度ヒストグラムをプロットし、そのようなシャピロ·ウィルクとして正規性のためのテストを使用することによって、正常のための交配の待ち時間と相手デュレーションデータを確認してください。それが正常でない場合は、それを変換し、または非パラメトリック同等の統計20を使用する。 注：たとえば、独身男性の実験からのデータは変換が正常と等分散の要件を満たしてログインします。 </li><li>データを標準化することができる場合、2つの治療法21を使用する場合、使用t検定は、単一の雄型試験における交配の遅延および持続時間の違いを調べた。複数の治療が使用される場合、分散分析（ANOVA）20を試してみてください。データを正規化することができない場合は、同等のノンパラメトリック検定21を試してみてください。 </li><li>食品着色料や競合する男性20の嵌合成功時にCO 2麻酔のどちらかの効果をテストするための二項のテストを使用してください。データ例の場合のように、複数の治療法が、使用される場合、二項誤差構造21とGLMを使用する。 </li><li>例データ内の2つの男性の臨床試験では、二項誤差構造を持つGLMSを使用しています。一GLMは応答変数（0 =脱気し、脱気しないようにCO 2を調べた説明variables.One GLM装備応答変数（着色= 0と非着色= 1）種と、気体の状態、およびガス処理として色を調べ= 1）種、色の状態、およびガス処理嵌め込まれている。それぞれのケースで、最大のモデルを作成し、AIC 20に基づいてモデルの簡略化を行う。 </li></ol>

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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cuticular+hydrocarbons+and+their+effect+on+courtship+in+Drosophila+virilis+and+D.+lummei.">Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei.</a> Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).</li></ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言。

このデータは、CO 2麻酔の影響はほとんど影響を示す2 3の種で、種間で矛盾していることを示しています。我々の結果は食用色素で標識がDのCO 2麻酔よりも男性の交尾成功に低い影響を与えた示唆キイロ 。これらの実験は、食用色素、容易かつ安価に複数の男性を含む交配アッセイのためのハエを標識するために使用できることを示している。 3モデルショウジョウバエ種のみD.、検討キイロは競争力のある状況で、相手のパフォーマンスにCO 2麻酔の効果を示した。対照的に、種はいずれもDの前の結果に反して、嵌合待ち時間の観点から単一の交配試験においてガスで収集の効果を示さなかったキイロ 5。競争の影響は、そのためだけに検出可能であるCO 2麻酔のより微妙なフィットネス効果を、強調表示することができたオス - オスの競争があるような状況の下で。初期の収集と1日で暴露すると、裁判の前にDの男性の能力に悪影響を与える交配を得るためにキイロ 。二日前に裁判への暴露は、しかし、何の効果も示さなかった。 D.両pseudoobscuraとD. subobscuraは試験のいずれかのガスへの暴露の影響を示さなかった。一つの説明は、ということですD.男性は処女であることを確認するために- （旧6時間0）他の種よりも、以前の生活の中で収集する必要があるため、 キイロは、CO 2への早期の暴露に対して脆弱だった。したがって、男性のD.ハエのキューティクルがまだ硬化させる彼らのキューティクルのために長く持っていた他の種に比べて、硬化されるように、この時代のキイロはより敏感である。一般に、これはCO 2麻酔の効果が特定の種と適切に彼らの標的種で効果をテストする必要があり研究者であるという考えをサポートしています。 Currentlyは、CO 2麻酔の効果に関する研究の大部分は、 キイロショウジョウバエ 5,11,22に行われているので、他の関連種に適用することが適切でないかもしれない。 ハエを区別するために提示する代替の非侵襲的な方法は、食用色素である。結果は、この処理は全ての種を調査にわたってでは効果がなかった示唆する。しかし、その使用は、個体間で区別するために容易に安価な可視マーカーを提供することに成功したものの、それは染料Dに区別することが容易であったことに留意すべきであるpseudoobscuraとD. D.よりもsubobscuraキイロ。以前の著者は、4,6（赤、緑、青）複数の色を使用している。私たちは、特にD.、青い着色はすべての種で区別するのが最も簡単であることが判明pseudoobscuraとD. subobscura。潜在的に多くの個別にマークさflieとのより複雑な実験を可能にするいくつかの色を使用して、S。いくつかの食用色素を消費するとき、おそらく消化される、ハエを着色することができないようにしかし、異なる色素の予備試験は、必要不可欠である。他の色素）は、毒性作用を持つハエの生存を減少させ、14を避けるべきであることができる。より高価な汚れを使用する代替食品着色方法はまた、Dの腸の完全性を検査するために使用されているキイロ23。これらは、より高価な、染色方法23が、代替手段を提供することができる。 色素法は、ハエのようにクリッピングCO 2翼コレクションから染め食品上に格納することができる限り迅速である。食品の取り込みは（〜3時間）急速だったので、他の研究6で使用した色の食品上のストレージO / Nも、ハエをマークするのに十分であろう。 （ - 12日10）24翼クリッピング（永続的）または蛍光塵埃マーキングに比べ- （5時間〜4）が、着色の持続時間が比較的短い。 ショウジョウバエ種とし ​​て異なる染料が多かれ少なかれ効果的な異なる種のためになる、外観が異なり、一部の株（ 例えば 、ノックアウト突然変異体）は食生活の変化に弱いことができますように、染料のいずれかの使用は、特に長い場合は、その有効性の予備試験を必要とする色素に長期暴露は14毒性であり得る。カローらの研究とは対照的に。14、我々はDの色の食品上に複数日間保存後は有意な死亡は認められなかったキイロ （3日間）、D. pseudoobscura（5日間）、またはD.使用する染料の差によるおそらくsubobscura（7日間）。 染料技術の使用の成功のための重要なステップは、選択された染料が使用されている種と株にうまく動作することを検証し、ステップ1.5である。代替技術は、フィールド実験24で使用する前にハエの外側に着色されたほこりを適用することを含む。この方法は、フィールドによりトンで個人を追跡するために使用されているOマーキングの期間とマーキング質量の容易さは24飛ぶ。我々は、明示的に交配試験では、この方法をテストしていませんが、それは、ほこりが特にショウジョウバエ 25、26に、交配における重要な感覚で持つことができる。種では、腸の染色が可能ではないが、どこにどんな影響を調べることが重要であろうこれらの方法は適切である可能性がある。 結論として、我々は、試験した3種（D.のpseudoobscuraとのD. subobscura）の2つの中のCO 2麻酔またはオスの交尾能力に食品着色料のいずれかで見ても効果がなかったことがわかった。 DのCO 2麻酔の負の影響キイロ検出されたが、食品着色料は、この種の成功を交配に影響しなかった。全体として、色素法は、同等またはCO 2麻酔を必要とする方法よりも優れている個々のショウジョウバエを識別するための簡単で安価な非侵襲的方法を提供する。それこの方法は、種の範囲にわたって動作します可能性があります。

過去数十年にわたり進化1,2上の男性への影響との間にどのように性的選択と競争の中で関心が高まっている。配偶行動に関する実験性選択3,4の理論を開発およびテストに重要な役割を果たしてきた。特に、属ショウジョウバエの種を用いた研究は、性的選択と行動の理解に大きく貢献しています。しかし、一般的に使用される技術は、標準的な交配実験5,6の結果を人工的にバイアスをかける可能性があるかどうかを調べることが重要である。 麻酔は、多くの場合、実験7における取扱いと識別のために使用されている。例えば、ハエは、一般的に交配前に収集され、又は二酸化炭素（CO 2）麻酔を用いて遺伝子型または実験的治療に分類。二つ以上の個体を区別する必要の実験では、フルオロをanaesthetiseするのが一般的である新設翼オフのクリップ部分は、個々のまたは治療グループ5,8を識別する。しかし、CO 2治療は行動にどのような影響を与えるかを理解すること、が重要である。 CO 2に暴露され、男性れるキイロショウジョウバエで検討されているCO 2麻酔の効果がかみ合うようにかなり時間がかかったし、全体的な非麻酔し、男性または男性より低い交尾成功を持っていた冷5への露出を使用して麻酔。麻酔を、実験の日に適用したときのハエが回復する一日投与したとき、この効果は、両方の観察された。しかし、この研究は、独身男性は、各女性5に提示されただけ調べる試験で制限されていました。女性による麻酔の男性のフィットネスのより微妙な損失の検出を可能にするかもしれない男性、間の競争を可能にする複数の男性9,10に遭遇するのがより現実的なシナリオがある。 CO 2麻酔の使用もなけれいる大人D.の繁殖力と長寿を減少させることがわかっEN収集処女が11を飛ぶとき一般的であるように彼らは、間もなく羽化後に露出されているキイロ 。 2麻酔をCOへの代替は、彼らに染料4,6,10,12,13で着色食品を供給することによりハエをマークすることです。この色素は、ハエの腸に入り、腹部を通して見ることができる、着色されたハエは、ハエから無色、または異なる色で標識されたハエから区別することを可能にする。方法は、これを適用することができる方法が異なります：染め補足酵母ペースト6を介して、または新規染め食品基板13への曝露を経由して、食品12に直接添加されている。これらのマーキング技術は、嵌合性能4,6には影響を示さないように見える。しかし、紙に直接大人Dに同じ食品着色料の影響を調べるキイロは寿命14の強い削減を発見した。以前の研究はまた、ALM焦点を当ててきたD.に完全に韓国ドラマOST キイロ、両方のCO 2麻酔5,11及び食品着色料14メソッドの影響に関して。現在、CO 2麻酔または腸の着色の使用は他のショウジョウバエの交尾行動にどのように影響するかに関する情報はほとんどない。 以下の研究では、 ショウジョウバエの3種（キイロショウジョウバエ、D.のpseudoobscura、およびD.のsubobscura）の交尾行動上のCO 2麻酔の効果を評価する。 CO 2にハエを集める効果が単一の二雄型試験の両方で調べた。 CO 2の効果は、Dで変化することが見出されているCO 2への暴露との嵌合の間キイロ 5ので、異なる待ち時間期間を試験した。麻酔翼クリッピングマーキング方法の代替は：ハエを染色するための食用色素を使用することも評価される。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plastic tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>TWT-200-061G</td>
			<td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine mesh</td>
			<td>Any haberdashery</td>
			<td>-</td>
			<td>Fine curtain mesh is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml pipette tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83007-376</td>
			<td>Various brands of pipette tips would be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Vials</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>58.49</td>
			<td>Larger vials or bottles could also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Balls</td>
			<td>Lewis Medical Solutions</td>
			<td>28170</td>
			<td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue Food colouring</td>
			<td>Thesugarcraftcompany</td>
			<td>-</td>
			<td>Other dye colours and brands can have variable results.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Tank</td>
			<td>BOC</td>
			<td>BOC 40VK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpie Markers</td>
			<td>Steadtler</td>
			<td>Lumocolor 313 S</td>
			<td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Salter</td>
			<td>SL3920</td>
			<td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

ショウジョウバエを用いて、交配実験は性的選択と行動の理解に大きく貢献してきた。実験は、多くの場合、裁判での個人間で区別するために、シンプル、簡単で安価な方法を必要とする。このための標準的な手法は、それぞれのフライをクリップするCO 2麻酔した後、ラベル付けまたは翼です。しかし、これは侵襲的であり、動作に影響を与えることが示されている。他の技術は、ハエを同定するために着色を使用している。この記事では、食品着色料を使用して、それらを個別の実験内で識別することを可能にする標識のショウジョウバエのためのシンプルかつ非侵襲的な方法を提示します。この方法は、2つの男性は女性と嵌合する競合試験で使用されている。染色は、迅速かつ容易に同定を可能にした。試験した3つの種を超え着色の強さのいくつかの違いが、しかし、ありました。データは、染料を示す提示されているショウジョウバエのメラノ中のCO 2よりも交尾行動に低い影響を与えているガスター。 CO 2麻酔の影響がDで、 ショウジョウバエの種に依存することが示されているpseudoobscuraとD. subobscura、D.のに対しては影響を示さないキイロ男性は交尾の成功を減少させた。提示色素法は、実験計画の広い範囲に適用可能である。

2つの雄交配試験-交尾行動にCO 2麻酔の効果 CO 2麻酔の効果の変化を説明するために発見された最良のモデルは、因子として（D.のpseudoobscuraおよびD.のsubobscura、お互いの間に差は認められなかったとして融合して）種を含有していた。 D.でpseudoobscuraとD. subobscura 2男性の臨床試験（Z 1589 = 0.087、P = 0.931）で交尾成功時にCO 2麻酔の有意な影響は認められなかった。 Dのキイロ 、2麻酔をCOにさらさ男性はかなり低い交尾成功（Z1,589 = 2.467、P = 0.014）であった。 D.見られる大きな効果を有する種と治療の間に有意な相互作用（χ2 1589 = 6.83、P = 0.009）もありましたキイロを試験した（ 表1）の前に収集または1日でガスに曝露した。 Howevえー、D.キイロ男性は実験的な裁判は、CO 2の効果を示さなかった二日前にCO 2に曝露した。 2つの雄交配試験 - 交尾行動に腸の着色の影響モデルの単純化は、3種（P&gt; 0.1）のいずれかのために見出される食品着色料の有意な効果を示さなかった。治療または気体の状態が分析に含めたときに、これらはまた、（P&gt; 0.1）、有意ではなかった。治療全体で着色ハエ成功交配の割合を表2に示す。ハエとの間の着色の差が着色及び非着色食品に保管図1に見ることができる。腸の食品着色料の強度はDに大きかったpseudoobscuraとD. D.よりもsubobscuraキイロ 。 シングル交配試験- M上のCO 2麻酔を使用する効果ating挙動 CO 2麻酔が最近大人出現収集するために使用された3種のいずれかのための交配の待ち時間に差はなかった。効果は、Dに交配期間に発見されたそれは二日間の試験（;表2、図2および図3）を交配前にCO 2に暴露したsubobscura。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> 図1.着色および非着色フライ食品（A）のバイアルを示す写真やマレDの腸着色の強さSubobscura（B）。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> 男性は麻酔したときは、独身男性試験で研究3種のために交尾レイテンシ図2.平均および95％信頼区間D（ライトバー）か否麻酔し（暗いバー）性成熟前に処女として収集するとき。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> 性成熟前に処女として収集するとき（暗いバー）男性は麻酔独身男性試験、（ライトバー）で調べたりしない麻酔し3種のための交尾継続時間の平均値と95％信頼区間3.図。 <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td>治療</td><td>種</td><td>いいえトライアル</td><td>いいえハエは交尾その色</td><td> p値</td><td>いいえハエは交尾そのガス処刑</td><td> p値</td></tr><tr><td rowspan="3"> CO 2でのコレクション</td><td> D.メル</td><td> 73 </td><td> 36 </td><td> 1 </td><td> 27 </td><td> 0.0344 </td></tr><tr><td> D.のPSE </td><td>79 </td><td> 41 </td><td> 0.8221 </td><td> 44 </td><td> 0.3682 </td></tr><tr><td> D.サブ</td><td> 71 </td><td> 40 </td><td> 0.3425 </td><td> 33 </td><td> 0.6353 </td></tr><tr><td rowspan="3">前2 18時間のCOにさらさ</td><td> D.メル</td><td> 57 </td><td> 28 </td><td> 1 </td><td> 19 </td><td> 0.0163 </td></tr><tr><td> D.のPSE </td><td> 65 </td><td> 32 </td><td> 1 </td><td> 31 </td><td> 0.8043 </td></tr><tr><td> D.サブ</td><td> 68 </td><td> 38 </td><td> 0.3961 </td><td> 35 </td><td> 0.9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 2 2日のCOにさらさ。 </td><td> D.メル</td><td> 56 </td><td> 19 </td><td> 0.0222 </td><td> 32 </td><td> 0.3497 </td></tr><tr><td> D.のPSE </td><td> 70 </td><td> 32 </td><td> 0.5504 </td><td> 33 </td><td> 0.7202 </td></tr><tr><td> D.サブ</td><td> 56 </td><td> 29 </td><td> 0.8939 </td><td> 26 </td><td> 0.6889 &lt;/ TD&gt; </tr></tbody></table> 表試験したすべての種と治療アクロス2つの雄の選択実験から。結果。 <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td>種</td><td>トレイト</td><td> DF </td><td> t値</td><td> p値</td></tr><tr><td rowspan="2"> キイロショウジョウバエ </td><td>待ち時間</td><td> 58 </td><td> 1.379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td>デュレーション</td><td> 58 </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. pseudoobscura </td><td>待ち時間</td><td> 109 </td><td> 0.419 </td><td> 0.676 </td></tr><tr><td>デュレーション</td><td> 109 </td><td> 0.436 </td><td> 0.664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. subobscura </td><td>待ち時間</td><td> 83 </td><td> 0.098 </td><td> 0.922 </td></tr><tr><td>デュレーション</td><td> 83 </td><td> 1.767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> 表交尾レイテンシと継続時間にCO 2麻酔にコレクションの影響を調べるシングル交配実験から2.結果。テストは、 ショウジョウバエ （ キイロショウジョウバエ、D.のpseudoobscuraとのD. subobscura）の3種について行った。

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Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

行動アッセイの染色昆虫：麻酔の配偶行動<em&gt;ショウジョウバエ</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

dyeing-insects-for-behavioral-assays-mating-behavior-anesthetized

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.7K ビュー.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

ビデオ: Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

昆虫における単一感覚子録音キイロショウジョウバエとハマダラカ</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

神経科学

Studying the Neural Basis of Adaptive Locomotor Behavior in Insects

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those leg movements that result from passive forces and interactions with other legs through the common contact with the substrate. If we want to understand, which part of a given movement is produced by nervous system motor output, kinematic analysis of stepping movements, therefore, needs to be complemented with electrophysiological recordings of motor activity. The recording of neuronal or muscular activity in a behaving animal is often limited by the electrophysiological equipment which can constrain the animal in its ability to move with as many degrees of freedom as possible. This can either be avoided by using implantable electrodes and then having the animal move on a long tether (i.e. Clarac et al., 1987; Duch &amp; Pfl&uuml;ger, 1995; B&ouml;hm et al., 1997; Gruhn &amp; Rathmayer, 2002) or by transmitting the data using telemetric devices (Kutsch et al, 1993; Fischer et al., 1996; Tsuchida et al. 2004; Hama et al., 2007; Wang et al., 2008). Both of these elegant methods, which are successfully used in larger arthropods, often prove difficult to apply in smaller walking insects which either easily get entangled in the long tether or are hindered by the weight of the telemetric device and its batteries. In addition, in all these cases, it is still impossible to distinguish between the purely neuronal basis of locomotion and the effects exerted by mechanical coupling between the walking legs through the substrate. One solution for this problem is to conduct the experiments in a tethered animal that is free to walk in place and that is locally suspended, for example over a slippery surface, which effectively removes most ground contact mechanics. This has been used to study escape responses (Camhi and Nolen, 1981; Camhi and Levy, 1988), turning (Tryba and Ritzman, 2000a,b; Gruhn et al., 2009a), backward walking (Graham and Epstein, 1985) or changes in velocity (Gruhn et al., 2009b) and it allows the experimenter easily to combine intra- and extracellular physiology with kinematic analyses (Gruhn et al., 2006).
We use a slippery surface setup to investigate the timing of leg muscles in the behaving stick insect with respect to touch-down and lift-off under different behavioral paradigms such as straight forward and curved walking in intact and reduced preparations.

We describe a method to record motor activity, timed to the electrically recorded tarsal contact signal in a tethered insect, walking on a slippery surface. This is used to study the neural basis of adaptive behavior under reduced influence of mechanical interaction between legs through the substrate.

昆虫に適応運動行動の神経基盤を研究し

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

アッセイのメソッドショウジョウバエ行動

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

での採餌行動のためのシングル·フライアッセイ<em&gt;ショウジョウバエ</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

齧歯類の中枢神経系の生体光遺伝学的刺激

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

臭気誘導挙動の高分解能定量<em&gt;キイロショウジョウバエ</em&gt;使用<em&gt; Flywalk</em&gt;パラダイム

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

でMARCMベースのクローンのMechanosensationための行動アッセイ<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their worlds when trying to understand their behavior and ecology. Sensitivity to the ultraviolet spectrum (UV; 300 - 400 nm) is found across multiple genera of birds, fish, reptiles, amphibians, and even mammals. This protocol describes a technique for examining organisms for the presence of UV-reflecting structures and a method for testing whether these cues are used as social signals in the context of mate choice. A spectrophotometer is used to detect the presence of UV reflectance and variation in reflective intensity between individuals and sexes. An example of this technique is presented in which a dichotomous mate choice test exposes sexually receptive individuals to opposite sex individuals whose visual appearance can be manipulated by filters that either transmit full spectrum or block UV wavelengths. This system allowed for the determination that female, but not male, sailfin mollies (Poecilia latipinna) were using UV markings as part of their mating decisions. These types of studies serve to expand our knowledge of the range of organisms that utilize UV and provide insight into how UV plays a role in their lives.

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

This protocol outlines the use of spectrophotometry to detect ultraviolet-reflecting structures on organisms (in this example, the sailfin molly Poecilia latipinna) and describes dichotomous choice tests for fish that allow inferences to be made on the role of ultraviolet cues during mate selection.

UV反射構造を検出してのSailFinモリーを使用して、メイト優先でその重要性を決定するためのアッセイ<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

使用して報酬を求める行動の変化を測定するための簡単な方法<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

ショウジョウバエのグルーミング行動の定量

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...