The authors have no acknowledgements.

1.細菌懸濁液の調製： <ol><li>画線培養プレートから、無菌的に無菌の接種ループを介して適切な成長培地（ 表1）の100 mlを含む250 mlの滅菌ボトルに単一コロニーを接種します。 </li><li>定期的成長のためにチェックする、1〜2日間適切な条件（ 表1）での軌道振盪インキュベーターにボトルを置きます。 140 RPMにシェーカー速度を設定します。 </li><li>無菌的に23℃で20分間3000×gで2滅菌50mlコニカルチューブと遠心チューブに細菌懸濁液を移します。 </li><li>上清を吸引除去し、滅菌ペプトン水15mlで各細菌ペレットを再懸濁します。必要に応じて渦。 1チューブ/容器内に浮遊細菌文化を結合します。 </li><li>保存培養力価を決定するために、セクション4につき三連でストック培養物を力価。 </li><li> 4時までの2週間冷蔵77; 2°C必要になるまで。再タイター使用時の文化は、ステップ4.8を参照してください。 </li></ol> 2.血小板製品の製造： <ol><li>認定血液バンクでの標準的なアフェレーシスヒト血小板製品を収集します。 90〜360ミリリットルの容量と0.8 -3.8×10 6血小板/μlの濃度：血小板製剤は、次のコレクションの仕様を満たしている必要があります。 <ol><li>血小板製剤は、病原体低減のための前処理に2時間の最小値のため休養していることを確認してください。これら2時間攪拌することなく、血小板インキュベーターで22±2℃で製品を保管してください。 2時間後、血小板製剤は、血小板インキュベーターで22±2℃で撹拌されていることを確認。最大22時間後の収集のために製品を使用してください。 </li></ol></li><li> 3ミリリットルの注射器を使用すると、血小板製剤のpH 22Cを測定するための2ミリリットルのサンプルを削除します。製品を確実にするために、血液ガス分析装置を使用して、pHを&gt; 6.6有し。血液学的分析器を用いて血小板製剤の血小板濃度を測定するために、同じサンプルを使用してください。製品は0.80から3.8×10 6血小板/μlの回収濃度の要件を満たしていることを確認します。 </li><li>視覚的に血小板製剤の渦を評価します。製品は「0」を有する場合、製品が廃棄される渦。 </li><li>直接白色光源下で血小板バッグを持ち、簡単に血小板バッグを絞ります。視覚的に血小板サンプルの旋回パターンを観察します。以下のスケールを使用して製品をスコア。 注：2 - 正渦巻き：強いコントラストでバッグ全体を通して目に見える不均一性を渦巻きます。 1 - 中級渦巻き：一部の不均一性の可視が、唯一のいくつかの場所でとコントラストが低いです。 0 - 負渦巻き：前と血小板バッグを圧搾した後、残りの濁り均質性</li></ol> 3.リボフラビンとUVライトプロセス： <ol><li>トラン滅菌チューブドッキングデバイスを使用して、リボフラビンおよびUV光照明や収納袋に血小板製剤sfer。転送後、チューブシーラーを使用して空の血小板ユニット収集袋を取り外し、バイオハザード廃棄物として空の袋を捨てます。 </li><li>その光保護外側ラップから原液リボフラビン、500μMの35ミリリットルの袋を取り出します。治療と収納袋の入口ライン上に無菌ドックリボフラビンキット。内容は血小板ユニットに排出できるようにします。 </li><li>リボフラビンポーチ/治療およびリボフラビンポーチから設定保存用バッグを掛け、ゆっくりと治療と収納袋の外へとリボフラビンバッグに残留空気を発現します。血小板製剤の少量はまた、血小板製剤に任意の残留リボフラビンをすすぐためにリボフラビンの袋の中に表現されていることを確認します。リボフラビンおよび血小板ソリューションが戻って治療や収納袋に排出できるようにして、入口ラインをクランプ。空のリボフラビンバッグ私たちを削除チューブシーラーをるとバイオハザード廃棄物として空の袋を捨てます。 </li><li>無菌ドック照明およびストレージ袋の入口ライン上にメスシリンジコネクタと6 &quot;チューブライン。メスシリンジコネクタに（プランジャーを削除）を10 mlシリンジバレルを取り付けます。 </li><li>無菌ピペットシリンジバレルに株式細菌の5ミリリットルを追加します。入口ラインのクランプを開き、細菌が血小板製剤に排出することができます。いくつかの血小板製品を10mlのシリンジバレルに逆流することを可能にすることによって、シリンジバレルをすすぎます。 10ミリリットルのシリンジバレルを削除します。 </li><li>無菌的に30mLのシリンジを接続して、血小板製剤に混入されたストック・細菌を確実にするために、入口ポートを最低2回フラッシュします。製品が十分に混合された後、きれいな5〜10ミリリットル注射器を使用し、2ミリリットルの前処理サンプルを削除します。新しい注射器を使用すると、接種工程やサンプリングステップから導入された空気がないことを確認してください。 <ol><li>部4ごとの前処理試料を滴定。 </li></ol></li><li>処理及び貯蔵バッグから入口ラインを取り外し、製品の重量を量ります。 </li><li>照明に製品を置き、標準血小板治療を開始するために、画面上のコマンドを実行します。 <ol><li>オペレータIDに入力します。 </li><li>照明装置のプラテンにバッグを固定し、マウントします。 </li><li>バーコードリーダーまたは手動入力キーパッドのいずれかを使用して照明装置にサンプルIDを入力します。 </li><li>スキャンの製品タイプ。 </li><li>石英クランプを閉じます。 </li><li>照明装置は、自動的にエネルギーの6.24 J / mlにお届けします。典型的な処理時間は5〜10分かかります。 </li></ol></li><li>治療と収納袋のサンプル電球ラインにメスシリンジコネクタと6 &quot;チューブライン治療無菌ドックの後。製品が十分に混合されていることを確認した後、5 mlシリンジを接続し、2ミリリットル後処理サンプルを削除します。 <ol><li>後処理SAMを滴定セクション4あたりPLE。 </li></ol></li></ol> 4.細菌力価<ol><li>前処理および後処理のサンプルの力価を推定し、各サンプルの終点連続希釈を行うために必要な5 mlの希釈チューブの適切な数を準備します。無菌ペプトン水1.8 mlを必要とチューブを埋めます。 </li><li>力価が10倍連続希釈スキームを用いて、各サンプル。無菌的には、最初の希釈用チューブ（10 -1）に希釈していないサンプルから0.2ミリリットルを転送します。渦この希釈管と、次の希釈チューブに0.2ミリリットルを転送します。希釈液の必要数を介して段階希釈を続行します。 <ol><li>無菌的に転送各希釈液100μlを、適 ​​切な寒天プレート（ 表1）にメッキします。 </li></ol></li><li>滅菌細胞スプレッダーを使用して、均等に各寒天プレート上にサンプルを配布します。 </li><li> （反転して、適切な条件でプレートをインキュベート<stroNG&gt;定期的に成長するためのチェック1-2日間表1）。 </li><li> 30〜300個のコロニーを有するプレートを数えます。 300より大きいコロニーを含むプレートを（TNTC）をカウントするためには多すぎると考えられています。 30未満のコロニーを含むプレートを、定量限界（LOQ）以下であると考えられます。 </li><li>各試験サンプルの力価を計算し、CFU / mlとして結果を記録。 <ol><li> CFU / mlのを計算するには、次の式を使用します。 <img alt="式（1）" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li>最低希釈プレートにはコロニーが存在しない場合は、検出（LOD）の限界を計算するために、以下の式を使用します。 <img alt="式（2）" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> と <img alt="式3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> ここで： P中の粒子のNは=最低数（CFU）自信を持って検出することができroduct。 微生物が検出されないであろうと、Pは=確率。微生物を検出する95％の信頼性のため、Pは0.05を=。 ミリリットルで、V =総生産量 プレートのV =ボリュームメッキ（ミリリットル）×希釈レベル</li></ol></li><li>ネガティブコントロールのために、2つの寒天プレートのそれぞれの上に連続希釈のために使用されるペプトン水0.5mlをプレート。サンプルをテストするのと同じプレート型を使用します。裏返し、1~2日は、定期的に成長するためにチェックするために適切な条件でプレートをインキュベートします。 <ol><li>成長がいずれかの寒天プレート上で観察されている場合は、使用ペプトン水のボトルを廃棄しなければなりません。この研究の結果はまた、無効化されています。 </li></ol></li><li>陽性コントロール、再タイターを使用した細菌の保存培養のために。裏返し、1~2日は、定期的に成長するためにチェックするために適切な条件で培養します。力価は、レコードの1.0ログCFU / mlの±でなければなりません有効と見なされるための研究のために（1.5節を参照してください）​​株式価を編。 </li></ol>

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この論文のすべての著者は、現在テルモBCT、ミラソルPRTシステムの開発メーカーで採用されています。このビデオ記事の出版料はテルモBCTによって支払われています。

細菌スクリーニングは、血液金融機関で一般的になってきているし、多くの場所のためには、細菌汚染された血小板の輸血を防止するための主な方法として機能します。細菌のスクリーニングは、一般的に、Sのような急成長中のグラム陰性菌の大部分をinterdictsが、 マルセッセンス、E。大腸菌およびE.クロアカ 、それは 、Sのような成長の遅いグラム陽性菌を検出するのに苦労黄色ブドウ球菌 、 連鎖球菌属および S. 表皮8。残念ながら、これらの3グラム陽性細菌は、すべての汚染された血小板単位の50％の上方に関与していると、これら三つの生物を含む血小板製剤の輸血は、患者の死亡率1につながりました。 細菌のスクリーニングは、少なくとも一つの生物は、典型的な4-8 mlのスクリーニング試料内に含まれるように十分に十分に高いことが血小板製剤中の細​​菌力価に依存しています。細菌は、4-8 mlのサンプル容積内に捕捉されるために、細菌力価が十分に高くない場合、ユニットは、誤って陰性としてフラグが設定され、それは輸血のために解放されます。細菌のスクリーニングに別のアプローチは、すべての血小板単位で行うことができ、かつ、非機能などの汚染生物をレンダリングすることができ積極的なプロセスを採用する可能性があります。 本研究では、細菌の高い力価は、意図的に、リボフラビンおよびUV光の病原体低減プロセスの総削減容量をテストするために血小板ユニットに添加しました。この研究で試験された細菌の負荷がはるかに寄付する際に、通常の血液製品に見られるものを超えているが、この研究では、リボフラビンおよびUV光処理が著しくによって汚染血小板ユニット内生菌の力価を低下させることができることを実証するのに役立ち2.6 5.4ログ（細菌汚染の99.7から99.9996まで％減少）（ 図2）。 ACCURAを取得するにはTE対数減少値は、細菌力価の手順を実行する際に、オペレータが正確なピペッティングのスキルと一緒に良い無菌技術を持っていることが重要です。連続希釈液を実施不正確なピペッティングは、誤差の蓄積、したがって、不正確な力価測定につながることができます。 この研究で収集されたデータは、低レベルに対してシステムに挑戦リボフラビンおよびUV光で前の仕事、臨床的に関連する菌血症（&lt;20 CFU /ユニット）をサポートしています。以前の研究は、実際の臨床汚染事象を模倣するように設計され、その結果は、リボフラビンおよびUV光を7日間血小板保存期間にわたって細菌増殖を防ぐのに有効であったが示されました。以前の研究からのデータに基づいてモデル化は、血小板生成物の細菌汚染の現在のリスク推定値は、現在のレベルが8からできるだけ多く98％削減することができることを示唆しています。リボフラビンおよびUV光プロセスは、細菌の画面に匹敵します臨床的に関連する細菌負荷8でチャレンジしたときにのみ血小板単位の細菌の汚染物質を検出するために、66％の有効性を示している、る。 全ての技術と同様に、細菌で汚染された血小板ユニットに関連した合併症を防止するための血小板製剤のPRT処理は限界があります。 PRTシステムは、細菌胞子に対して有効ではなく、PRTシステムは残りのエンドトキシンがまだ受信者に敗血症性ショックを引き起こす可能性がグラム陰性菌の高力価を不活性化することができるので、場合でも、エンドトキシンを不活性化しません。細菌が高力価に伝播することができる前に、PRTは、最適なストレージの初期に行われています。 結論として、これらの二つの試験の組み合わせによって示されるように、リボフラビンおよびUV光処理の両方、グラム陰性およびグラム陽性生物の細菌負荷を減少させるのに有効であり、細菌のスクリーニングの実行可能な代替案を提供することができます。定期treatinリボフラビンおよびUV光でグラム血小板製剤はまた、ウイルスや寄生虫のような他の血液由来の薬剤の潜在的な伝達を低減させる付加的な利点を持っています。

血小板、血漿、濃厚赤血球、全血液製剤の輸血は、現代医学に大きな役割を果たしていると、様々な医学的状態を処置するための重要な流体を交換し、最終的には命を救うために使用することができます。血小板は、どちらかの全血から単離され、輸血投与量にプール又は血小板アフェレーシスの過程で収集されている細胞の産物です。体内の血小板の主な役割は、創傷部位での出血を停止し、止血を維持するのを助けるためにあります。低い血小板細胞数（血小板減少症）に罹患している患者は、自発的な出血事象に感受性であり、それらの血小板細胞は正常範囲内に戻ってカウントをもたらすために血小板と輸血されます。収集された血小板は、5-7日の最大のために保存され、一定の攪拌下にしながら、22±2℃で保存されています。 血小板輸血の救命性質にもかかわらず、そこに共同による輸血レシピエントへのわずかなリスクのまま寄生虫、細菌やウイルス11でこれらの製品のntamination。ウイルス核酸検査（NAT）の実装を大幅にそのようなC型肝炎ウイルス（HCV）、B型肝炎ウイルス（HBV）およびヒト免疫不全ウイルス（HIV）5などの主要な血液媒介剤のウイルス伝播の危険性を減少しました。カナダ血液サービスからの最近の刊行物は、これらの薬剤は、HBV 15 170万の寄付につき670万HCVの寄付や1あたりHIV、1のための100万8あたり寄付されるようにするための残存リスクを推定します。 細菌は、通常、一般の人々にあまり注目を集めるものの、血小板製剤中の細菌汚染の頻度は1と高いと推定されている：1,000 7および血小板製品の何百万人が毎年輸血されているため、多数の受信者は、合併症を脅かす潜在的に生命にさらされています敗血症6のように。研究では、一度に細菌負荷ことを示唆しています汚染が低いの、&lt;100コロニー形成単位（CFU）/製品2,16は、しかし 、栄養豊富な環境と室温保存は輸血前に危険な高力価に増殖する細菌を汚染することができます。現在、血小板の受信者に届くの細菌汚染された製品を防ぐために利用可能な唯一の承認された方法は、文化ベースのシステムとケア検査の迅速なポイントを使用することです。簡単に述べると、培養ベースのシステムのための血小板製剤は、4-8 mlのサンプルを瓶に血小板生成物から除去し、接種された際に細菌が、製品中で増殖することができるように、12-24時間、22℃で攪拌機に保存されています栄養培地を含みます。ボトルは、細菌の増殖のためのボトルを監視する機器内に配置されます。器具はボトル内細菌増殖を検出した場合には、フラグが設定され、対応する血小板ユニットは破棄されます。このプロセスは、高速GROを検出することを合理的に成功しているが翼の生物は、成長の遅い種の多くは、このように輸血7,12,14,16,22のためにリリースされる偽陰性ユニットの可能性を作成し、検出することが十分に高い力価に成長しません。細菌負荷が有意に増加した場合、培養ベースの検出システムとは異なり、医療検査の迅速な点は、典型的には、血小板の保存期間後に行われます。ケア検査のポイントは文化ベースのシステムよりも敏感であり、彼らは力価に達するとだけ確実に細菌を検出≥1×10 3 CFU / mlの17以来、高い力価が必要です。しかし、そのようなテストは、サンプリングの1時間以内に結果を提供することができます。これらのテストの性能の変動は、受信者9で致命的な敗血症反応を引き起こし、偽陰性製品のリリースにつながっています。 血小板製剤の細菌汚染の問題に対処する別の方法は、病原体低減のprocの日常使用によるものです汚染細菌を不活性化する代わりに、それらを検出しようとすることができESS。 UV光との組み合わせで、光増感剤としてリボフラビン用いて、細菌3,4,8,10,19-21リボフラビンおよびUVの【選択使用を含む、病原性の血液由来の汚染物質の広範囲の感染性を減少させることが示されています病原体低減のための光は、非毒性および非変異であり、リボフラビンおよびUV光で処理されたコンポーネントは、輸血レシピエントのためだけでなく、血液製剤18を扱う人のために安全であることが示されています。簡単に言えば、リボフラビン分子は、細菌、寄生虫、ウイルス、および任意の有核細胞（ 例えば、白血球）の核酸（DNA及びRNA）と結合することができます。 UV光への曝露は、このように複製および/ ​​または核酸の転写を防止し、13を不活性化生物を残して、核酸（主にグアニン塩基）の官能基に化学的変化を引き起こし、リボフラビンを活性化します。プレートなどの無核細胞でき及び赤血球を伴う核酸の欠如にリボフラビン化学により影響されません。 リボフラビンおよびUV光技術による以前の研究は、臨床的に関連する細菌負荷（&lt;20 CFU /製品）8で汚染された血小板製剤を模倣することを目的と実験計画を用いて細菌の選択グループを評価しました。この研究の目的は、高い力価の細菌汚染に対するリボフラビンおよびUV光のプロセスを評価することであった（&gt; 1.0×10 5 CFU / ml）をシステムの全細菌還元能力を測定するために、プラズマで処理血小板製品。 hemovigilance研究1から収集したデータに基づいて、一般的に存在するグラム陰性およびグラム陽性生物のパネルが、本研究で評価のために選択し、以下の種含まれていました： 表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌、ストレプトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス・ピオゲネス、セラチア菌、腸炎エルシニアを、ブルセラneotomae、セレウス菌（栄養型）、エシェリキア・コリ、緑膿菌や肺炎桿菌 。 B.除くすべての生物、 セレウスは 、ATCCから入手し、優先度は、血液成分から単離されていると同定された細菌株を得る上に置きました。 B.この研究でテストしたセレウスは、汚染された血小板製剤から内部で分離された臨床株です。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mirasol Illuminator</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirasol Treatment/Storage Bag</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematology Analyzer</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td>Ac&#8226;T diff&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Gas Analyzer</td>
			<td>Siemens</td>
			<td>RapidLab 1265&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Docking Device</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>TSCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet Incubator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PC2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital Incubator Shaker</td>
			<td>Lab-Line</td>
			<td align="right">4628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Incubator</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Iso-temp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II A/B3 Biosafety Cabinet</td>
			<td>Thermo-forma</td>
			<td align="right">1286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing Sealer</td>
			<td>Sebra</td>
			<td>Smart Sealer II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table Top Centrifuge</td>
			<td>IEC</td>
			<td>Centra GP8R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">309650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Dilution Tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>211-0058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td align="right">430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>P-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td>Rainin</td>
			<td>R-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Repeat Pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td align="right">4780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-200 &#181;L Filter Tip</td>
			<td>Costar</td>
			<td align="right">4810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL Disposable Serrological Pipette</td>
			<td>Costar</td>
			<td align="right">4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Disposable Serrological Pipette</td>
			<td>Costar</td>
			<td align="right">4487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mL 500 &#181;M Riboflavin</td>
			<td>Terumo BCT</td>
			<td>35 mL 500 &#181;M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brucella Agar with 5% Horse Blood</td>
			<td>BBL</td>
			<td align="right">221547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>B9993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone Water</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">257087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase Soy Broth</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">299113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase Soy Agar</td>
			<td>Remel</td>
			<td>R01917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Inactivated Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td align="right">26050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

treatment of platelet products with riboflavin and uv light: effectiveness against high titer bacterial contamination

細菌による血小板単位の汚染が長く、それらの供血後の保存条件に重大な輸血のリスクとして認識されています。製品は、日常的に、攪拌シェーカー上で22℃での細菌の増殖を促進することができる条件が記憶されています。血小板製剤中に導入されると考えられた細菌の総数が非常に低いが、これらの細菌は、潜在的に重篤な有害事象が生じる前輸血に非常に高い力価に増殖することができます。本研究の目的は、血小板製剤の一般的な汚染物質として同定された細菌のパネルに対してリボフラビン基づく病原体低減プロセスを評価することでした。 S.：このパネルには、以下の生物が含まれます表皮、黄色ブドウ球菌、S。ミチス、化膿レンサ球菌、S。マルセッセンス、Y。エンテロコリチカ、B。neotomae、セレウス菌、大腸菌、緑膿菌および K. ニューモニエ 。各血小板ユニットは高細菌負荷を接種し、サンプルをBを除去し、処理前後のOTH。コロニー形成アッセイは、終点希釈スキームを使用して、前処理および後処理の細菌力価を決定しました。 log減少は、治療前の力価から後処理力価を差し引いて計算しました。以下の対数減少が観察された。S.表皮 4.7ログ（99.998パーセント）、黄色ブドウ球菌 4.8ログ（99.998パーセント）、Sは 3.7ログ（99.98パーセント） ミチス、化膿連鎖球菌 2.6ログ（99.7％）、S。マルセッセンス 4.0ログ（99.99％）、Y。エンテロコリチカ 3.3ログ（99.95％）、B。neotomae 5.4ログ（99.9996パーセント）、セレウス 2.6ログ（99.7％）、大腸菌 ≥5.4ログ（99.9996パーセント）、緑膿菌 4.7ログ（99.998パーセント） および K 。ニューモニエ 2.8ログ（99.8％）。この研究の結果は、プロセスが細菌汚染に関連した重篤な有害事象輸血のリスクを低減するのに役立つ可能性があり示唆しています。

11の異なる細菌種の減少は、リボフラビンおよびUV光ベースのPRTプロセスを使用して評価しました。これらの薬剤は、血小板製剤のより一般的な汚染物質のいくつかを表しており、5グラム陽性および6グラム陰性生物を含みます。少なくとも6つの血小板生成物は、生物ごとに評価し、各製品は、血小板生成物中の細菌の&gt; 1.0×10 5 CFU / mlの最終力価を得るために十分な細菌を接種しました。治療前のサンプルは、血小板生成物は速やかにリボフラビンおよびUVプロセスで処理した後、前処理の力価を決定するために除去しました。以下の対数減少が観察された血小板製剤の治療を以下：Sを表皮 4.7ログ（99.998パーセント）、黄色ブドウ球菌 4.8ログ（99.998パーセント）、Sは 3.7ログ（99.98パーセント） ミチス、化膿連鎖球菌 2.6ログ（99.7％）、S。マルセッセンス 4.0ログ（99.99％）、Y。エンテロコリチカ 3.3ログ（99.95％）、B。neotomae 5.4ログ（99.9996パーセント）、セレウス菌 2.6ログ（99.7％）、大腸菌 ≥5.4ログ（99.9996パーセント）、P。緑膿菌4.7ログ（99.998パーセント）と肺炎桿菌2.8ログ（99.8％）（ 図2）。リボフラビンとUVプロセスのために上述したようにすべてのユニットは、システムの仕様を満たしていました。追加の還元試験を用いて行ったS.バフィーコート由来の血小板を用いて、 化膿連鎖 。有意差は、Sの減少は観察されませんでした。アフェレーシス血小板に対する軟膜由来の血小板においてピオゲネス （データは示さず）。 <img alt="表1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> 表1：リボフラビンおよびUV光を用いて評価した細菌種の成長条件 。血小板製剤を汚染することが示されている両方のグラム陰性およびグラム陽性細菌のパネルは、この研究のために選択しました。成長条件（温度およびメディア種類）を伝播するために使用され、タイトR生物が表示されます。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> 図1：リボフラビンおよびUV光の病原体低減プロセス 。リボフラビンは、500μMの名目上の濃度で、0.9％生理食塩水に溶解しました。解決策は、接続されており、各血小板製剤中に排出滅菌しました。細菌は、各血小板ユニットに無菌的に添加し、次いでUVエネルギー（約6-10分）の6.2 J / mlで処理しました。 このインビトロで後処理血小板部が最終細菌力価を決定するためにサンプリングした研究。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> 図2：種々の細菌種の還元リボフラビンおよびUV光で処理リボフラビンおよびUV光は、血小板製剤の一般的な細菌汚染物の細菌負荷を減少させるために使用しました。ログ10減少が違いです平均前処理力価と平均後処理力価との間である。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

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Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

リボフラビンとUVライトと血小板製品の治療：高力価の細菌汚染に対する有効

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.5K ビュー.  Scientific Affairs. The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

ビデオ: Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen interactions 1. The major cell types of the innate immune system, macrophages and neutrophils, develop during the first days of embryogenesis prior to the maturation of lymphocytes that are required for adaptive immune responses. The ease of obtaining large numbers of embryos, their accessibility due to external development, the optical transparency of embryonic and larval stages, a wide range of genetic tools, extensive mutant resources and collections of transgenic reporter lines, all add to the versatility of the zebrafish model. Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) and Mycobacterium marinum can reside intracellularly in macrophages and are frequently used to study host-pathogen interactions in zebrafish embryos. The infection processes of these two bacterial pathogens are interesting to compare because S. typhimurium infection is acute and lethal within one day, whereas M. marinum infection is chronic and can be imaged up to the larval stage 2, 3. The site of micro-injection of bacteria into the embryo (Figure 1) determines whether the infection will rapidly become systemic or will initially remain localized. A rapid systemic infection can be established by micro-injecting bacteria directly into the blood circulation via the caudal vein at the posterior blood island or via the Duct of Cuvier, a wide circulation channel on the yolk sac connecting the heart to the trunk vasculature. At 1 dpf, when embryos at this stage have phagocytically active macrophages but neutrophils have not yet matured, injecting into the blood island is preferred. For injections at 2-3 dpf, when embryos also have developed functional (myeloperoxidase-producing) neutrophils, the Duct of Cuvier is preferred as the injection site. To study directed migration of myeloid cells towards local infections, bacteria can be injected into the tail muscle, otic vesicle, or hindbrain ventricle 4-6. In addition, the notochord, a structure that appears to be normally inaccessible to myeloid cells, is highly susceptible to local infection 7. A useful alternative for high-throughput applications is the injection of bacteria into the yolk of embryos within the first hours after fertilization 8. Combining fluorescent bacteria and transgenic zebrafish lines with fluorescent macrophages or neutrophils creates ideal circumstances for multi-color imaging of host-pathogen interactions. This video article will describe detailed protocols for intravenous and local infection of zebrafish embryos with S. typhimurium or M. marinum bacteria and for subsequent fluorescence imaging of the interaction with cells of the innate immune system.

Transparent zebrafish embryos have proved useful model hosts to visualize and functionally study interactions between innate immune cells and intracellular bacterial pathogens, such as Salmonella typhimurium and Mycobacterium marinum. Micro-injection of bacteria and multi-color fluorescence imaging are essential techniques involved in the application of zebrafish embryo infection models.

細胞内細菌性病原体を持つゼブラフィッシュ胚の感染

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

免疫・感染学

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

Leishmaniasis is one of the world's most neglected diseases, largely affecting the poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million people are considered at risk of contracting leishmaniasis, and approximately 2 million new cases occur yearly1. Leishmania donovani is the causative agent for visceral leishmaniasis (VL), the most fatal form of the disease. The choice of drugs available to treat leishmaniasis is limited 2;current treatments provide limited efficacy and many are toxic at therapeutic doses. In addition, most of the first line treatment drugs have already lost their utility due to increasing multiple drug resistance 3. The current pipeline of anti-leishmanial drugs is also severely depleted. Sustained efforts are needed to enrich a new anti-leishmanial drug discovery pipeline, and this endeavor relies on the availability of suitable in vitro screening models.
In vitro promastigotes 4 and axenic amastigotes assays5 are primarily used for anti-leishmanial drug screening however, may not be appropriate due to significant cellular, physiological, biochemical and molecular differences in comparison to intracellular amastigotes. Assays with macrophage-amastigotes models are considered closest to the pathophysiological conditions of leishmaniasis, and are therefore the most appropriate for in vitro screening. Differentiated, non-dividing human acute monocytic leukemia cells (THP1) (make an attractive) alternative to isolated primary macrophages and can be used for assaying anti-leishmanial activity of different compounds against intracellular amastigotes.
Here, we present a parasite-rescue and transformation assay with differentiated THP1 cells infected in vitro with Leishmania donovani for screening pure compounds and natural products extracts and determining the efficacy against the intracellular Leishmania amastigotes. The assay involves the following steps: (1) differentiation of THP1 cells to non-dividing macrophages, (2) infection of macrophages with L. donovani metacyclic promastigotes, (3) treatment of infected cells with test drugs, (4) controlled lysis of infected macrophages, (5) release/rescue of amastigotes and (6) transformation of live amastigotes to promastigotes. The assay was optimized using detergent treatment for controlled lysis of Leishmania-infected THP1 cells to achieve almost complete rescue of viable intracellular amastigotes with minimal effect on their ability to transform to promastigotes. Different macrophage:promastigotes ratios were tested to achieve maximum infection. Quantification of the infection was performed through transformation of live, rescued Leishmania amastigotes to promastigotes and evaluation of their growth by an alamarBlue fluorometric assay in 96-well microplates. This assay is comparable to the currently-used microscopic, transgenic reporter gene and digital-image analysis assays. This assay is robust and measures only the live intracellular amastigotes compared to reporter gene and image analysis assays, which may not differentiate between live and dead amastigotes. Also, the assay has been validated with a current panel of anti-leishmanial drugs and has been successfully applied to large-scale screening of pure compounds and a library of natural products fractions (Tekwani et al. unpublished).

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

A parasite-rescue and transformation assay with THP1 cells infected in vitro with Leishmania donovani has been optimized for anti-leishmanial drug screening. The assay involves differentiation of THP1 cells, infection with promastigotes, treatment with test drugs, controlled lysis of the infected macrophages, rescue of amastigotes, transformation to promastigotes and monitoring promastigote growth and proliferation with a fluorometric assay.

細胞内の抗リーシュマニアに対するスクリーニングのための寄生虫のRescue and形質転換試験<em&gt;ドノバンリーシュマニア</emTHP1ヒト急性単球性白血病細胞株における&gt;無鞭毛

Leishmaniasis is  one of the world's most neglected diseases, largely affecting the  poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million ...

A Tetracycline-regulated Cell Line Produces High-titer Lentiviral Vectors that Specifically Target Dendritic Cells

Lentiviral vectors (LVs) are a powerful means of delivering genetic material to many types of cells. Because of safety concerns associated with these HIV-1 derived vectors, producing large quantities of LVs is challenging. In this paper, we report a method for producing high titers of self-inactivating LVs. We retrovirally transduce the tet-off stable producer cell line GPR to generate a cell line, GPRS, which can express all the viral components, including a dendritic cell-specific glycoprotein, SVGmu. Then, we use concatemeric DNA transfection to transfect the LV transfer plasmid encoding a reporter gene GFP in combination with a selectable marker. Several of the resulting clones can produce LV at a titer 10-fold greater than what we achieve with transient transfection. Plus, these viruses efficiently transduce dendritic cells in vitro and generate a strong T cell immune response to our reporter antigen. This method may be a good option for producing strong LV-based vaccines for clinical studies of cancer or infectious diseases.

Here, we use retroviral transduction and concatemeric transfection to create a cell line that can express the components of a lentiviral vector (LV) in the absence of tetracycline. This LV encodes GFP and is pseudotyped with a glycoprotein, SVGmu, which is specific for a receptor on dendritic cells.

テトラサイクリン調節細胞株は、具体的に樹状細胞を標的とする高力価レンチウイルスベクターを生成

Lentiviral  vectors (LVs) are a powerful means of delivering genetic material to many types  of cells. Because of safety concerns associated with these ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence factors, which can subvert and manipulate key host functions. The study of host/pathogen interactions is therefore extremely important to understand bacterial infections and develop alternative strategies to counter infectious diseases. This approach however, requires the development of new high-throughput assays for the unbiased, automated identification and characterization of bacterial virulence determinants. Here, we describe a method for the generation of a GFP-tagged mutant library by transposon mutagenesis and the development of high-content screening approaches for the simultaneous identification of multiple transposon-associated phenotypes. Our working model is the intracellular bacterial pathogen Coxiellaburnetii, the etiological agent of the zoonosis Q fever, which is associated with severe outbreaks with a consequent health and economic burden. The obligate intracellular nature of this pathogen has, until recently, severely hampered the identification of bacterial factors involved in host pathogen interactions, making of Coxiella the ideal model for the implementation of high-throughput/high-content approaches.

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Coxiella burnetii is an obligate intracellular Gram-negative bacterium responsible for the zoonotic disease Q fever. Here we describe methods for the generation of Coxiella fluorescent transposon mutants as well as the automated identification and analysis of the resulting internalization, replication and cytotoxic phenotypes.

発生とのマルチ表現型ハイコンテンツスクリーニング<em&gt; Q熱リケッチア</em&gt;トランスポゾン変異体

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional Chinese medicine and food safety/toxicology. Many of the classical analysis techniques require expensive equipment and/or expertise. Notably, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) have become an emerging method for the analysis of foods and natural products. This method is based on antibody-mediated detection of the target components. However, as many of the bioactive components in natural products are small (&lt;1,000 Da) and do not induce an immune response, creating monoclonal antibodies (mAbs) against them is often difficult. In this protocol, we provide a detailed explanation of the steps required to generate mAbs against target molecules as well as those needed to create the associated indirect competitive (ic)ELISA for the rapid analysis of the compound in multiple samples. The procedure describes the synthesis of the artificial antigen (i.e., the hapten-carrier conjugate), immunization, cell fusion, monoclonal hybridoma preparation, characterization of the mAb, and the ELISA-based application of the mAb. The hapten-carrier conjugate was synthesized by the sodium periodate method and evaluated by MALDI-TOF-MS. After immunization, splenocytes were isolated from the immunized mouse with the highest antibody titer and fused with the hypoxanthine-aminopterin-thymidine (HAT)-sensitive mouse myeloma cell line Sp2/0 -Ag14 using a polyethylene glycol (PEG)-based method. The hybridomas secreting mAbs reactive to the target antigen were screened by icELISA for specificity and cross-reactivity. Furthermore, the limiting dilution method was applied to prepare monoclonal hybridomas. The final mAbs were further characterized by icELISA and then utilized in an ELISA-based application for the rapid and convenient detection of the example hapten (naringin (NAR)) in natural products.

This article provides a detailed protocol for the preparation and evaluation of monoclonal antibodies against natural products for use in various immunoassays. This procedure includes immunization, cell fusion, indirect competitive ELISA for positive clone screening, and monoclonal hybridoma preparation. The specifications for antibody characterization using MALDI-TOF-MS and ELISA analyses are also provided.

天然物に対するモノクローナル抗体の作製

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing activity by assessing the ability of antibodies in serum to bind to bacteria and activate complement. This complement activation results in the lysis and killing of the target bacteria. These assays are valuable because they go beyond quantifying antibody production to elucidate the biological functions that these antibodies have, allowing researchers to study the role that antibodies may play in preventing infection. SBAs have been used to study immune responses for many human pathogens, but there is no widely accepted methodology for Shigella at present. Historically, SBAs have been very labor-intensive, requiring many time-consuming steps to accurately quantify surviving bacteria. This protocol describes a simple, robust, and high-throughput assay that measures functional antibodies specific for Shigella in serum in vitro. The method described here offers many advantages over traditional SBAs, including the use of frozen bacterial stocks, 96 well assay plates, a micro-culture system, and automated colony-counting. All of these modifications make this assay less labor-intensive and more high-throughput. This protocol is simpler and faster to perform than traditional SBAs while still using simple technologies and readily available reagents. The protocol has been successfully applied in multiple independent laboratories and the assay is robust and reproducible. The assay can be used to assess immune responses in pre-clinical as well as clinical studies. Quantifying shigellacidal antibody titers both before and after antigen exposure (either by immunization or infection) allows for a broader understanding of how functional antibody responses are generated and their contribution to protective immunity. The development of this standardized, well-characterized assay may greatly facilitate Shigella vaccine design.

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Here we present a protocol to measure Shigellacidal activity of antibodies in serum. Serum is mixed with bacteria and exogenous complement, incubated, and the reaction mixture is plated on agar plates. Viable bacteria form colonies which are counted, using an automated colony enumerator, and used to determine the bactericidal titer.

高スループット赤痢菌-特定の殺菌試験

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental procedure in which phagocytic cells are co-cultured with bacterial units. The immune cells will phagocytose and kill the bacterial cultures in a complement-dependent manner. The efficiency of the immune-mediated cell killing is dependent on a number of factors and can be used to determine how different bacterial cultures compare with regard to resistance to cell death. In this way, the efficacy of potential immune-based therapeutics can be assessed against specific bacterial strains and/or serotypes. In this protocol, we describe a simplified OPKA that utilizes basic culture conditions and cell counting to determine bacterial cell viability after co-culture with treatment conditions and HL-60 immune cells. This method has been successfully utilized with a number of different pneumococcal serotypes, capsular and acapsular strains, and other bacterial species. The advantages of this OPKA protocol are its simplicity, versatility (as this assay is not limited to antibody treatments as opsonins), and minimization of time and reagents to assess basic experimental groups.

This opsonophagocytic killing assay is used to compare the ability of phagocytic immune cells to respond to and kill bacteria based on different treatments and/or conditions. Classically, this assay serves as the gold&#160;standard for assessing effector functions of antibodies raised against a bacterium as opsonin.

病原性細菌に対する免疫学的応答を評価するための Opsonophagocytic 殺害アッセイ

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

Measurement of Specific Mycobacterial Mistranslation Rates with Gain-of-function Reporter Systems

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 per codon, the actual error rates vary widely, depending on the species, environment, and codons being studied. We have previously shown that mycobacteria use a two-step pathway for the generation of aminoacylated glutamine and asparagine tRNAs and that this is specifically associated with relatively high error rates due to the modulation of mistranslation rates by an essential component of the pathway, the amidotransferase GatCAB. We modified a previously employed Renilla-Firefly dual-luciferase system that had been used to measure mistranslation rates in Escherichia coli for use in mycobacteria to measure specific mistranslation rates of glutamate at glutamine codons and aspartate for asparagine codons. Although this reporter system was suitable for the accurate estimation of specific error rates, lack of sensitivity and requirements for excessive manipulation steps made it unsuitable for high-throughput applications. Therefore, we developed a second gain-of-function reporter system, using Nluc luciferase and green fluorescent protein (GFP), which is more amenable to medium/high-throughput settings. We used this system to identify kasugamycin as a small molecule that can decrease mycobacterial mistranslation. Although the reporters that we describe here have been used to measure specific types of mycobacterial mistranslation, they may be modified to measure other types of mistranslation in a number of model systems.

In this article, we present two complementary methods to measure specific rates of translational error and mistranslation in the model mycobacterium, Mycobacterium smegmatis, using gain-of-function reporter systems. The methods can be employed to measure accurate error rates in low throughput or relative error rates in a more high-throughput setting.

機能向上レポーター・システムによる特異的マイコバクテリア・誤訳率の測定

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 ...

Production of High-Titer Infectious Influenza Pseudotyped Particles with Envelope Glycoproteins from Highly Pathogenic H5N1 and Avian H7N9 Viruses

The occasional direct transmission of the highly pathogenic avian influenza A virus H5N1 (HPAI H5N1) and H7N9 to humans and their lethality are serious public health issues and suggest the possibility of an epidemic. However, our molecular understanding of the virus is rudimentary, and it is necessary to study the biological properties of its envelope proteins as therapeutic targets and to develop strategies to control infection. We developed a solid viral pseudotyped particle (pp) platform to study avian influenza virus, including the functional analysis of its hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) envelope glycoproteins, the reassortment characteristics of the HAs and NAs, receptors, tropisms, neutralizing antibodies, diagnosis, infectivity, for the purposes of drug development and vaccine design. Here, we describe an experimental procedure to establish pps with the envelope glycoproteins (HA, NA) from two influenza A strains (HAPI H5N1 and 2013 avian H7N9). Their generation is based on the capacity of some viruses, such as murine leukemia virus (MLV), to incorporate envelope glycoproteins into a pp. In addition, we also detail how these pps are quantified with RT-qPCR, and the infectivity detection of native and mismatched virus pps depending on the origin of the HAs and NAs. This system is highly flexible and adaptable and can be used to establish viral pps with envelope glycoproteins that can be incorporated in any other type of enveloped virus. Thus, this viral particle platform can be used to study wild viruses in many research investigations.

This protocol describes an experimental process to produce high-titer infectious viral pseudotyped particles (pp) with envelope glycoproteins from two influenza A strains and how to determine their infectivity. This protocol is highly adaptable to develop pps of any other type of enveloped viruses with different envelope glycoproteins.

高病原性H5N1および鳥類H7N9ウイルス由来のエンベロープ糖タンパク質を用いた高力性インフルエンザ擬似型粒子の生産

The occasional direct transmission of the highly pathogenic avian influenza A virus H5N1 (HPAI H5N1) and H7N9 to humans and their lethality are serious ...

Establishing a Porcine Ex Vivo Cornea Model for Studying Drug Treatments against Bacterial Keratitis

When developing novel antimicrobials, the success of animal trials is dependent on accurate extrapolation of antimicrobial efficacy from in vitro tests to animal infections in vivo. The existing in vitro tests typically overestimate antimicrobial efficacy as the presence of host tissue as a diffusion barrier is not accounted for. To overcome this bottleneck, we have developed an ex vivo porcine corneal model of bacterial keratitis using Pseudomonas aeruginosa as a prototypic organism. This article describes the preparation of the porcine cornea and protocol for establishment of the infection. Bespoke glass molds enable straightforward setup of the cornea for infection studies. The model mimics in vivo infection as bacterial proliferation is dependent on the ability of the bacterium to damage corneal tissue. Establishment of infection is verified as an increase in the number of colony forming units assessed via viable plate counts. The results demonstrate that infection can be established in a highly reproducible fashion in the ex vivo corneas using the method described here. The model can be extended in the future to mimic keratitis caused by microorganisms other than P. aeruginosa. The ultimate aim of the model is to investigate the effect of antimicrobial chemotherapy on the progress of bacterial infection in a scenario more representative of in vivo infections. In so doing, the model described here will reduce the use of animals for testing, improve success rates in clinical trials and ultimately enable rapid translation of novel antimicrobials to the clinic.

This article describes a step-by-step protocol to set up an ex vivo porcine model of bacterial keratitis. Pseudomonas aeruginosa is used as a prototypic organism. This innovative model mimics in vivo infection as bacterial proliferation is dependent on the ability of the bacterium to damage corneal tissue.

細菌性角膜炎に対する薬物治療を研究するためのブタEx Vivoコルネアモデルの確立

When developing novel antimicrobials, the success of animal trials is dependent on accurate extrapolation of antimicrobial efficacy from in vitro tests to ...