Name: long-term behavioral and reproductive consequences of embryonic exposure to low-dose toxicants
Uploaded: 2018-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-term Behavioral and Reproductive Consequences of Embryonic Exposure to Low-dose Toxicants at JoVE.com

NSF (EPSCoR EPS 0814251) によってサポートし、NIH (1P20GM103653 01A1) 時価と HSD、MDM (タイトル III HBGI) と KRS (NIH INBRE) にデラウェア州州立大学機関学生のサポートには感謝して承諾します。線虫の野生型 N2 ひずみのc. の elegans遺伝子センター (研究基盤プログラム P40 OD010110 の NIH のオフィスでサポートされている) のおかげで。

以下のプロトコルは、初期胚発生に伴う BPA 暴露の効果をテストするのには標準化されているし、BPS、BPF や他の内分泌かく乱化学物質とc. の elegans胚毒性物質との使用のため変更可能性があります。
1. 素材のセットアップ
<ol><li>塩化ナトリウム 1.5 g、ペプトン、1.25 g、8.5 g を 500 mL の水で寒天を溶解して線虫成長メディア (NGM)18メディアの 500 mL を準備します。オートクレーブ滅菌 (121 ° C、15 PSI、20 分) 後、追加のコレステロール (5 mg/mL のエタノール)、0.5 mL 1 M MgSO4、1 M CaCl2と 1 M カリウム リン酸バッファー、pH 7.4 (108.3 g KH2PO4 12.5 mL 0.5 mL の 0.5 mL、K2HPO4、水 1 L に 35.6 g)。</li>
	<li>1 N 島の 25 mL、漂白剤、4 mL と水の 71 mL を混合することによって、次亜塩素酸を準備します。このソリューションを新しくします。</li>
	<li>KH2PO4の 3 g、6 g の Na2HPO4、塩化ナトリウム 5 g、MgSO4と 1 l の水の 1 M の 5 mL を混合することによって M9 バッファーを準備します。</li>
	<li>129 0.02 M K2HPO4mL、KH2PO4, 871 mL、塩化ナトリウム 5.85 g を混ぜて18 S バッファーを準備します。</li>
	<li>M9 と S バッファーをオートクレーブで滅菌します。</li>
	<li>大腸菌 (OP 50 株) 20 mL ルリア スープ (LB) の夜通し文化を育てます。</li>
	<li>1 mM の原液 10% エタノールで BPA を解散します。S バッファーで 0.1 μ M、0.5 μ M、1 μ M、5 μ M、10 μ M の後続の希釈液を作る。 注: S 緩衝水溶液の希釈は大幅エタノールの濃度を低減します。たとえば、このプロトコル (10 μ M) に記載されている最高の BPA 濃度でエタノールの濃度は 0.1 %v/v。</li>
</ol>2線虫養殖と同期。
<ol><li>100 mm の版 (約 25 mL/プレート) に NGM メディアを注ぐし、固めることができます。凝固させる為、一度一晩成長液体培養からエシェリヒア属大腸菌OP50 の 150 μ L を広めることでプレートをシードします。37 ° C でプレートを一晩インキュベートします。</li>
	<li>次の日は、1 cm 角のおおよそのスラブをチャンキングによる新しいプレートに N2 ワームを転送します。目に見える胚を含む栄養の十分な成熟した大人とプレートが作成されるまで、20 ° C で 3 日間の成長するワームを許可します。</li>
	<li>同期、プレート間に 5 mL の M9 バッファーをピペッティングにより各プレートを洗います。滅菌 15 mL の円錐形遠心チューブに液体を転送します。 注: 同期は大人のワームを殺すし、比較的同じ段階である胚を収集することです。</li>
	<li>成虫の餌の緩やかなを取得するために室温で 4 分間 3,000 × g で遠心分離機します。</li>
	<li>10 mL のピペットを使用すると、ペレットをそのまま残すために上澄みを慎重に取り外します。次亜塩素酸溶液 5 mL を加え、軽く混ぜます。</li>
	<li>3,000 x g常温で 4 分間遠心します。</li>
	<li>10 mL のピペットで上澄みを削除し、7 mL の M9 バッファーで洗浄します。この手順を 2 回繰り返します。</li>
</ol>3. BPA にワームを公開します。
<ol><li>上記のステップ 2.7 から最後の洗浄後 M9 バッファーと卵の約 100 μ L を中断します。既に S バッファーで希釈した BPA の適切な濃度を含む 2 mL の microfuge の管に卵の約 50 μ L を転送します。チューブあたり BPA (0.0 μ M、0.1 μ M、0.5 μ M、1.0 μ M、5.0 μ M と 10 μ M) の正しい最終濃度を確保する S バッファーの量を調整します。表 1 は、これらの希釈液を作る方法の 1 つを示しています。</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>最終の BPA 濃度</td>
			<td>BPA をストック (100 μ M)</td>
			<td>S バッファー</td>
			<td>同期のワーム</td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1 Μ M</td>
			<td>1 Μ L</td>
			<td>949 Μ L</td>
			<td>50 Μ L</td>
		</tr>
<tr>
<td>0.5 Μ M</td>
			<td>5 Μ L</td>
			<td>945 Μ L</td>
			<td>50 Μ L</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 Μ M</td>
			<td>10 Μ L</td>
			<td>940 Μ L</td>
			<td>50 Μ L</td>
		</tr>
<tr>
<td>5 Μ M</td>
			<td>50 Μ L</td>
			<td>900 Μ L</td>
			<td>50 Μ L</td>
		</tr>
<tr>
<td>10 Μ M</td>
			<td>100 Μ L</td>
			<td>850 Μ L</td>
			<td>50 Μ L</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1: 株式 BPA、S バッファーと我々 の研究に使用される必要な濃度を達成するために使用される同期のワーム。
<ol start="2"><li>シェーカーにチューブを置き、軽く振るシェーカー 25 rpm またはロッキング シェーカー傾斜 25/分で、20 ° C で 4 時間。</li>
	<li>4 h 後チューブ ホルダーに管を配置し、解決するワームを許可します。</li>
	<li>上澄みを廃棄し、ワームをシード プレート (エシェリヒア属大腸菌OP50 NGM 板) に転送します。1.5 で述べたように液体のエシェリヒア属大腸菌OP50 文化で 2.1 で述べたようにプレートをシードします。</li>
	<li>20 ° C で 60 h の成長ワームを聞かせてください。汚染の毎日のプレートを確認します。汚染された NGM プレートは通常変色し、個々 のコロニーを伴います。過密の顕微鏡下でワームをチェックします。エシェリヒア属大腸菌OP50 芝生と小さなスポットで集中してワームの欠如を意味する過密。</li>
</ol>4. 前方タッチ慣れアッセイ
<ol><li>新しいシードされていない NGM プレート火災滅菌 30 G プラチナ ワイヤを使用して大人のワームを選ぶ約 10 同期の若者を転送します。ワームのままにそれらを許可するように 5 分間妨げられていない新しいプレートに順応する時間。</li>
	<li>慣れ応答木製の串やつまようじの端に付す眉毛を使用し、70% エタノールに浸漬して消毒します。きれいな糸くずティッシュで拭くし、エタノールを蒸発させ 1 分待ちます。頭 (咽頭の球根の前方) にワームをそっと触れる眉の毛を使用しています。10 を許可するタッチを繰り返して回復するワームを許可するために接触の間に s。</li>
	<li>ワームはもはや後方移動するまで (10 秒刺激間隔を許可) をタッチし続けます。この時点で、ワームには刺激に慣れます。慣らすにワームに必要なタッチの数を記録します。</li>
	<li>平均慣れテューキー事後テストが続く一方通行 ANOVA を使用して処理と未処理のコントロール率の違いを分析します。</li>
</ol>5. ワームの多産の試金
<ol><li>個々 の L3 ワームをプラチナのピックを使用して新鮮でシード プレートに転送します。その 1 つだけのワームはプレートごとに配置されていることを確認します。 注: 後 L3 幼虫ワームは L4 幼虫期と成人期に発展します。早くそれらを拾っては、カウントでは見逃されることを卵を既にレイアウトしていない彼らを確保しながら、個々 の動物の転送のために十分に大きいという点で便利です。</li>
	<li>すべての 12-24 h の卵数をカウントします。カウント後に新しいプレートに親虫を転送します。ワームは、通常 5 日後、産卵を停止を繰り返して、20 ° C で培養したとき 注: 平均すると、野生型ワームことができます最大 300 の卵を産むしたがって、毎日新しいプレートに親を転送するを防ぐ過密。</li>
	<li>テューキー事後テストが続く一方通行 ANOVA を使用して処理と未処理のコントロールにより産卵数の平均の違いを分析します。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Gore, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+Summary+to+EDC-2:+The+Endocrine+Society's+Second+Scientific+Statement+on+Endocrine-Disrupting+Chemicals.">Executive Summary to EDC-2: The Endocrine Society's Second Scientific Statement on Endocrine-Disrupting Chemicals.</a> Endocr. Rev. 36, 593-602 (2015).</li><li>Braun, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-life+exposure+to+EDCs:+role+in+childhood+obesity+and+neurodevelopment.">Early-life exposure to EDCs: role in childhood obesity and neurodevelopment.</a> Nat. Rev. Endocrinol. 13, 161-173 (2017).</li><li>Melnik, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Summary+of+the+National+Toxicology+Program's+Report+of+the+Endocrine+Disruptors+Low-Dose+Peer+Review.">Summary of the National Toxicology Program's Report of the Endocrine Disruptors Low-Dose Peer Review.</a> Environ. Health Perspect. 110, 427-431 (2002).</li><li>Kortenkamp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten+years+of+mixing+cocktails:+a+review+of+combination+effects+of+endocrine-disrupting+chemicals.">Ten years of mixing cocktails: a review of combination effects of endocrine-disrupting chemicals.</a> Environ. Health Perspect. 115 Suppl 1, 98-105 (2007).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocr. Rev. 33, 378-455 (2012).</li><li>Eramo, S., Urbani, G., Sfasciotti, G. L., Brugnoletti, O., Bossu, M., Polimeni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogenicity+of+bisphenol+A+released+from+sealants+and+composites:+a+review+of+the+literature.">Estrogenicity of bisphenol A released from sealants and composites: a review of the literature.</a> Ann Stomatol. (Roma). 1, 14-21 (2010).</li><li>Cantonwine, D. E., Ferguson, K. K., Mukherjee, B., McElrath, T. F., Meeker, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+Bisphenol+A+Levels+during+Pregnancy+and+Risk+of+Preterm+Birth.">Urinary Bisphenol A Levels during Pregnancy and Risk of Preterm Birth.</a> Environ. Health Perspect. 123, 895-901 (2015).</li><li>Vandenberg, L. N., Maffini, M. V., Sonnenschein, C., Rubin, B. S., Soto, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bisphenol-A+and+the+great+divide:+a+review+of+controversies+in+the+field+of+endocrine+disruption.">Bisphenol-A and the great divide: a review of controversies in the field of endocrine disruption.</a> Endocr. Rev. 30, 75-95 (2009).</li><li>Suzuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+and+neonatal+exposure+to+bisphenol-a+enhances+the+central+dopamine+d1+receptor-mediated+action+in+mice:+enhancement+of+the+methamphetamine-induced+abuse+state.">Prenatal and neonatal exposure to bisphenol-a enhances the central dopamine d1 receptor-mediated action in mice: enhancement of the methamphetamine-induced abuse state.</a> Neuroscience. 117, 639-644 (2003).</li><li>Rosenfeld, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bisphenol+A+and+phthalate+endocrine+disruption+of+parental+and+social+behaviors.">Bisphenol A and phthalate endocrine disruption of parental and social behaviors.</a> Front. Neurosci. 9, 1-15 (2015).</li><li>Patisaul, H. B., Adewale, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+effects+of+environmental+endocrine+disruptors+on+reproductive+physiology+and+behavior.">Long-term effects of environmental endocrine disruptors on reproductive physiology and behavior.</a> Front. Behav. Neurosci. 3, 10 (2009).</li><li>Lee, D., Jacobs, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+issues+in+human+studies+of+endocrine+disrupting+chemicals.">Methodological issues in human studies of endocrine disrupting chemicals.</a> Rev. Endocr. Metab. Disord. 16, 289-297 (2015).</li><li>Mimoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+estrogenic+hormone+receptor+in+Caenorhabditis+elegans.">Identification of an estrogenic hormone receptor in Caenorhabditis elegans.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 364, 883-888 (2007).</li><li>Allard, P., Colaiacovo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bisphenol+A+impairs+the+double-strand+break+repair+machinery+in+the+germline+and+causes+chromosome+abnormalities.">Bisphenol A impairs the double-strand break repair machinery in the germline and causes chromosome abnormalities.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 20405-20410 (2010).</li><li>Mersha, M. D., Patel, B. M., Patel, D., Richardson, B. N., Dhillon, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+BPA+and+BPS+exposure+limited+to+early+embryogenesis+persist+to+impair+non-associative+learning+in+adults.">Effects of BPA and BPS exposure limited to early embryogenesis persist to impair non-associative learning in adults.</a> Behav. Brain. Funct. 11, 27 (2015).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+the+BPA-Substitute+Bisphenol+S+Causes+Unique+Alterations+of+Germline+Function.">Exposure to the BPA-Substitute Bisphenol S Causes Unique Alterations of Germline Function.</a> PLoS Genet. 12, e1006223 (2016).</li><li>Rankin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Habituation+revisited:+an+updated+and+revised+description+of+the+behavioral+characteristics+of+habituation.">Habituation revisited: an updated and revised description of the behavioral characteristics of habituation.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 92, 135-138 (2009).</li><li>Hope, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> C elegans: A Practical Approach. , (1999).</li><li>Sanchez, K., Mersha, M., Dhillon, H. S., Temburni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+Effects+of+Endocrine+Disrupting+Compounds+on+the+Development+of+Vertebrate+Neural+Network+Function+Using+Multi-electrode+Arrays.">Assessment of the Effects of Endocrine Disrupting Compounds on the Development of Vertebrate Neural Network Function Using Multi-electrode Arrays.</a> J. Vis. Exp. , (2017).</li><li>Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WormBook The C. elegans Research Community. , (2007).</li></ol>

著者は、開示するものがあることを宣言します。

急速な成長の胚など開発フェーズは、BPA を含む様々 な内分泌撹乱物質の有害な影響を特に受けやすい。我々 は BPA や胚の生存率 (図 2) に及ぼす影響を評価するために濃度の範囲の便利な滴定により線虫無脊椎動物モデルで他の有害物質への暴露の影響を調べるため詳細なプロトコルを提供します。.フォロー アップ行動実験胚から開発された露出低用量 BPA のこと神経機能 (図 3) の長期的な影響を試金大人を存続します。線虫モデルの初期胚発生期間中に様々 な有害物質に胚を公開するための詳しいプロトコルを提供するためには、本稿の中心的な考え方(20 ° C) で、11.5 時間萌芽期の開発の期間の最初の 4 h ウィンドウは器官形成が続いている増殖期に対応します。この終わりに向かって産卵および連合学習の試金によって端点の検証を実施しています。BPA 及び他のビスフェノール類の行動のメカニズムの基礎はこの分野の研究を目的とした方向の聖杯が、我々 しないこの方法論の焦点を当てた記事で BPA のアクションの機械論的説明を提供しようとしました。ただし、線虫モデルがさらに作用のメカニズムを解剖する理想的なシステムを提供することを指摘したいと思います。たとえば、今後の作業での BPA の作用メカニズムを解読するのに線虫変異体は生成することができますと BPA の効果への抵抗の上映し、こうして経路を解読するための道を開きます。さらに、私たちの仲間の紙は脊椎動物、毒性物質の影響19の潜在的なメカニズムの調査のための基礎を理解する別の道を提供するニューラル ネットワーク同期レベルの BPA の影響を扱っています。
余分なを実行する必要があります重要な手順のいくつか本稿で詳細な方法論、慎重に次のとおりです: 成熟した卵を解剖顕微鏡の下で目に見えると大人は非常に重要ですよく供給の線虫のプレートを選択してこの手順に従わないと、EDC 曝露実験のための胚の不十分なサンプル サイズになります。また、次亜塩素酸のソリューションは新鮮初期胚発生中に BPA 露出を実行する能力を妨げる、非同期の人口を得ることを避けるために作られているかどうかを確認することが重要です。(次亜塩素酸の露出) の後 M9 とペレットの洗浄も非常に重要なステップです。適切に行われない死胚で高濃度の漂白剤の可能性があります。また、4 h 後シード NGM プレートに胚を転送する必要があります。長期間の BPA ソリューションは、胚は長寿命期間直幼虫へと発展する可能性が高いです。これが著しく多産アッセイと行動実験干渉します。これらの手順のいずれかを逃したが場合、非常に最初から手順を開始することをお勧めします。何らかの理由でワームに NGM プレート、汚染されているまたは十分な食料がない、それはそれにより収集されたデータを傾斜ワームにストレスを追加します。このようなプレートは、破棄する必要があり、実験では使用しないで。
以前は、顕著な研究は、BPA14生殖細胞の DNA 修復機構の故障に起因による染色体異常を示す線虫モデルを使用するしました。ただし、上記の研究デザインがその寿命全体で BPA の高用量に c. のelegansの連続の BPA 暴露を使用していたことは注目に値するです。我々 の方法論は、初期胚、胚の生存率に及ぼす影響と、生存者の微妙な長期的な影響を分析するために低用量の BPA 暴露を研究に設計されました。我々 の知識に方法論が開発され非常に低用量 BPA の指定した期間に限定する初期段階の胚を公開するにはしたがって、メソッドは、ここで小説で紹介。
また、プロトコルを提供ここで胚の増殖段階で他の内分泌かく乱化学物質の効果を研究に容易に適応することができます。しかし、後期胚を研究するためにプロトコルは、フォーカスの下で開発の重要な期間に主要な修正が要求されます。それが耐性がある 2 番目の脱皮のサイクルで寿命の長い期間直逮捕に終って代替開発経路の可能性を開くとさらに、我々 のプロトコルは毒性物質への露出のより長い時間を必要とする実験に適してできません。過酷な条件の20。それ以上の修正と改良が必要を通して毒性物質または EDCなどを代謝する可能性がない食料源との補足のより長い露光時間のオートクレーブ大腸菌。結論として、私たちの方法論を活用して、無脊椎動物モデル系の様々 なホルモン多産と神経機能の化学物質の影響を評価すること線虫。

環境有害物質への暴露は特に、その開発を妨害する傾向があり、近年の科学的な精査の下でされている化合物します。日常の使用で 1000 人以上の化学物質は、内分泌かく乱化合物 (EDC)1として分類されます。急速な成長と開発、萌芽期、乳児と小児期の期間は、低用量でも EDC に有害な影響を特に受けるを指摘されています。その効果は引き起こす生殖および発達障害2に示されています。米国環境保護庁と米国国家毒性プログラムのパネル ガイドラインあたり低用量は、観察可能な生物学的変化を引き起こす損害3と報告されている 1 つのレベルの下の線量として定義されるかもしれません。個々 の内分泌かく乱化学物質の低用量作用、ほか低濃度環境では、さまざまな内分泌かく乱化学物質の混合物に実質的な累積効果4可能性があります。
ビスフェノール A (BPA や 4,4'-(propane-2,2-diyl)) は水のボトル、店の領収書、シーラント、飲料のライニングなど一般的に使用されるアイテムは、重合剤、食品缶5。17 β エストラジ オール (E2) その構造的類似性と ERα と ERβ のエストロゲン受容体への親和性、BPA は、内分泌かく乱化学物質 (EDC)5,6として分類されています。弱く、両性の生殖システムに影響を与えるし、安全7,8と見なされている用量で神経機能を混乱させるエストロゲンの受容器に BPA の親和性を示されています。9BPA に暴露したマウスに長期的な神経障害を引き起こす epigenetically 規制メカニズムを介して DNA メチル化の変化を観測されています。具体的には、BPA はまた慢性曝露後マウス大脳辺縁系の脳における D1 ドパミン受容体に見られる増加薬に感度の向上、注意欠損多動性の増加率の可能な原因として関与しています。9,10. 内分泌かく乱化学物質の人の健康に有害な影響の重要な証拠は個体群でも低用量5; 環境有害物質の慢性露出を中心に相関研究に基づいてただし、根拠のない誇大広告11,12の批判に対応しながら人間の研究からの推論、実験的コントロールの操作の制限を受け入れられています。
そのステロイド ホルモン受容体の遺伝子、研究者が機能および作用機構に及ぼす内分泌かく乱化学物質を解明するこの遺伝的扱いやすい lab モデルを利用したに関して哺乳類の線虫の遺伝子の保全のためなど13線虫を用いた実験は BPA や BPS などこれらの化合物のアポトーシス、胚性致死、混乱を二本鎖 DNA 休憩修復機構と神経機能14,15 がこと示されている。 ,16。
私たちの研究室以前初期胚発生に限定も低線量の露出が存続大人15行動の赤字と下げられた多産をもたらすことを示しました。繰り返し刺激慣れ線虫 c. エレガンスを含むモデル システムでは連合学習の形態であり、私たちの方法論に萌芽期の露出の長期効果を測定する行動の出力として連合学習のこのフォームを使用して、17有害物質 BPA 暴露における線虫 c. エレガンスに描かれている全体的な回路図を含む胚性致死でその即効性と大人の行動の長期的な影響を研究するため詳細なプロトコルを提供私たち具体的には、図 1。産卵および連合学習の試金から代表的な結果は、我々 の方法論の有効性を強調するため提供されます。

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Fisher</td><td>S25761B</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher</td><td>BP1423-500</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11470</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher</td><td>7487-88-9</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher</td><td>P286-1</td><td></td></tr><tr><td>K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher</td><td>7758-11--4</td><td></td></tr><tr><td>KOH</td><td>Fisher</td><td>1310-58-3</td><td></td></tr><tr><td>Bleach</td><td>Clorox</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher</td><td>BP332-500</td><td></td></tr><tr><td>LB</td><td>Fisher</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>BPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>239658-250g</td><td></td></tr><tr><td>BPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>103039-100g</td><td></td></tr><tr><td>EtOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>E.coli OP50</td><td>CGC</td><td></td><td>Repository at U of Minnesota</td></tr><tr><td>N2 (Wild-type C. elegans) worms</td><td>CGC</td><td></td><td>Repository at U of Minnesota</td></tr><tr><td>Platinum wire pick</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-AWP</td><td></td></tr><tr><td>Petri plates</td><td>Fisher</td><td>07-202-011</td><td></td></tr><tr><td>Dissection Microscope</td><td>AmScope</td><td>SM-2TYY</td><td></td></tr></tbody></table>

long-term behavioral and reproductive consequences of embryonic exposure to low-dose toxicants

ビスフェノール類、ビスフェノール A (BPA) など、ビスフェノール S (BPS) は、プラスチックおよび多数の日常使用製品の生産で広く使用されるエージェントを重合します。その化学構造とエストラジ オールのような生物学的性質に基づいて、彼らは内分泌撹乱物質 (EDC) として分類されています。内分泌かく乱化学物質、低用量で長期曝露は、初期の発育期間中に示される大きな脆弱性と癌、行動障害、不妊を含む様々 な健康の欠陥にリンクされています。遺伝的に解き得る線虫モデル線虫の細胞・分子の研究は、BPA への暴露は、アポトーシスを引き起こす、胚性致死性と DNA の破壊を修復メカニズムを実証しています。については異なるビスフェノール類減少の多産の低用量にc. の elegans胚の露出を報告しました。また、我々 は開発の非常に早い段階での露出の効果と慣れ現象、連合学習のフォームを定量化することで大人になって永続化を示しています。ここでは、低用量内分泌かく乱化学物質と同様に関連付けられている多産と前方に萌芽期の露出のための詳しいプロトコル タッチ代表結果とともに、慣れの試金を提供します。

線虫での以前の研究は、胚の発育と成人期を通じて高い BPA の集中 (≥ 1 ミリメートル) への継続的な暴露が産卵数14を低下させることを報告しています。当研究室の報告以降の研究は、大人15 (図 2) として実行可能な卵の数の減少を示した彼らの開発の初期段階で 4 時間の限られた期間の BPA にさらされている胎児を置いたことを示しています。方法論の 2 つの主要機能は、(i) 使用の BPA 濃度も有意 (10 μ M の範囲を 0.1 μ M) を下げるし、(ii) の露出は早い萌芽期の期間に限られていた.低用量でも減少多産のほか私たちの慣れの試金は BPA に暴露される胚は、ワームに比べて慣れになってより多くの刺激を必要に応じてワームが車両だけで15 (図 3) にさらされることを明らかにしました。これらの効果は、低用量 BPA 暴露、次の神経機能形態学的に明らかにすることができない微妙な効果が行動の変化を識別する可能性があることの理論的根拠に基づいているという点で注目に値する。一言で言えば、代表的な結果を提示したここアンダー スコア胚への BPA 暴露の有害な影響にc. の elegansの大人の行動実験によって評価することができます神経の機能を含む、その開発が影響します。ここで提供するプロトコルは、内分泌の破壊的な化合物を含む他の潜在的な毒性の低用量および長期的なのと同様の効果をテストするため使用できます。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56771/56771fig1.jpg"> 図 1: 実験的なデザインの概略図。成熟したワームは、収集され、同期された胚を収集するために、次亜塩素酸にさらされています。胚は、4 h の BPA 濃度の異なるにさらされたし。露出胚に移ったシード NGM プレートの上には、20 ° C で 60 h に成長することができた開発の初期段階中に露出の有効性をテストするために L4 ワームは個々 のプレートに移され、多産のためにテストし、前方タッチ慣れ若い大人を調べた。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56771/56771fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56771/56771fig2.jpg"> 図 2: BPA が下降する多産します。1 μ M および BPA の高い濃度への露出 (水平方向の行によって表されるコントロールに比べて産卵数が減少n = 10、*p < 0.05)。誤差範囲を示す分散分析, テューキー事後テストを使用して行わ SEM. 分析。この図は、Mersha et al., 201515から変更されています。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56771/56771fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56771/56771fig3.jpg"> 図 3: 萌芽期ビスフェノール A 曝露の長期的影響は、大人の行動に反映されます。BPA 濃度 0.1 μ M に影響を与える大人で非連想前方タッチ慣れとして低にさらされる胚 (n = 60、*p < 0.05)。誤差範囲を示す SEM;分散分析, テューキー事後テスト。この図は、Mersha et al., 201515から変更されています。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56771/56771fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

Watch this Scientific Journal Video about Long-term Behavioral and Reproductive Consequences of Embryonic Exposure to Low-dose Toxicants at JoVE.com

Long-term Behavioral and Reproductive Consequences of Embryonic Exposure to Low-dose Toxicants

環境有害物質への暴露鋭く、長期的な効果との開発に影響を与えます。詳しいプロトコルは早期萌芽期ビスフェノール A 曝露の影響を検討するため効果的な lab モデルを使用した戦略を説明するために提供されます。多産と私たちの毒性物質の暴露のバイオ試金の有効性を監視するための行動のアッセイを提供します。

低線量の毒性に萌芽期の露出の長期的な行動および生殖の影響

Bisphenols, such as bisphenol A (BPA) and bisphenol S (BPS) are polymerizing agents widely used in the production of plastics and numerous everyday-use ...

long-term-behavioral-reproductive-consequences-embryonic-exposure-to

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

6.0K ビュー.  Johns Hopkins School of Medicine. 環境有害物質への暴露鋭く、長期的な効果との開発に影響を与えます。詳しいプロトコルは早期萌芽期ビスフェノール A 曝露の影響を検討するため効果的な lab モデルを使用した戦略を説明するために提供されます。多産と私たちの毒性物質の暴露のバイオ試金の有効性を監視するための行動のアッセイを提供します。

ビデオ: Long-term Behavioral and Reproductive Consequences of Embryonic Exposure to Low-dose Toxicants

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several independent laboratories have demonstrated robust alterations in the social behavior of rodents exposed to alcohol during brain development across a wide range of exposure durations, timing, doses, and ages at the time of behavioral quantification. Prior work from this laboratory has identified reliable alterations in specific forms of social interaction following moderate prenatal alcohol exposure (PAE) in the rat that persist well into adulthood, including increased wrestling and decreased investigation. These behavioral alterations have been useful in identifying neural circuits altered by moderate PAE1, and may hold importance for progressing toward a more complete understanding of the neural bases of PAE-related alterations in social behavior. This paper describes procedures for performing moderate PAE in which rat dams voluntarily consume ethanol or saccharin (control) throughout gestation, and measurement of social behaviors in adult offspring.

The goal of the protocol presented here is to describe procedures to expose rats to moderate levels of alcohol during prenatal brain development and to quantify resulting alterations in social behavior during adulthood.

適度な出生前アルコール暴露と成体ラットにおける社会行動の定量化

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

行動学

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term effects are very important in judging their consequences in the environment and on human health. In demonstrating long-term influences, effects of chemicals over generations in recent studies provide new insight. Here, we describe protocols for studying effects of chemicals over multiple generations using free-living nematode Caenorhabditis elegans. Two aspects are presented: (1) trans-generational (TG) and (2) multi-generational effect studies, the latter of which is separated to multi-generational exposure (MGE) and multi-generational residual (MGR) effect studies. The TG effect study is robust with a simple purpose to determine whether chemical exposure to parents can result in any residual consequences on offspring. After the effects are measured on parents, sodium hypochlorite solutions are used to kill the parents and keep the offspring so as to facilitate effect measurement on the offspring. The TG effect study is used to determine whether the offspring are affected when their parent is exposed to the pollutants. The MGE and MGR effect study is systematical used to determine whether continuous generational exposure can result in adaptive responses in offspring over generations. Careful pick-up and transfer are used to distinguish generations to facilitate effect measurement on each generation. We also combined protocols to measure locomotion behavior, reproduction, lifespan, biochemical and gene expression changes. Some example experiments are also presented to illustrate the trans- and multi-generational effect studies.

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Trans- and multi-generational effects of persistent chemicals are essential in judging their long-term consequences in the environment and on the human health. We provide novel detailed methods for studying trans- and multi-generational effects using free-living nematode Caenorhabditis elegans.

毒性物質のトランスおよび多世代効果の研究のためのカエナルハブ炎エレガンスの使用

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term ...

環境学

Assessment of the Effects of Endocrine Disrupting Compounds on the Development of Vertebrate Neural Network Function Using Multi-electrode Arrays

Bis-phenols, such as bis-phenol A (BPA) and bis-phenol-S (BPS), are polymerizing agents widely used in the production of plastics and numerous everyday products. They are classified as endocrine disrupting compounds (EDC) with estradiol-like properties. Long-term exposure to EDCs, even at low doses, has been linked with various health defects including cancer, behavioral disorders, and infertility, with greater vulnerability during early developmental periods. To study the effects of BPA on the development of neuronal function, we used an in vitro neuronal network derived from the early chick embryonic brain as a model. We found that exposure to BPA affected the development of network activity, specifically spiking activity and synchronization. A change in network activity is the crucial link between the molecular target of a drug or compound and its effect on behavioral outcome. Multi-electrode arrays are increasingly becoming useful tools to study the effects of drugs on network activity in vitro. There are several systems available in the market and, although there are variations in the number of electrodes, the type and quality of the electrode array and the analysis software, the basic underlying principles, and the data obtained is the same across the different systems. Although currently limited to analysis of two-dimensional in vitro cultures, these MEA systems are being improved to enable in vivo network activity in brain slices. Here, we provide a detailed protocol for embryonic exposure and recording neuronal network activity and synchrony, along with representative results.

Exposure to environmental toxins can acutely impact developing embryos. Endocrine disrupting chemicals such as bisphenols are known to adversely affect the nervous system. Here we describe a protocol using an in vitro vertebrate (chick embryo) neuronal network model to study the functional impact of toxin exposure on early embryos.

ホルモン多電極アレイを用いた脊椎動物の神経回路網関数の開発化合物の影響の評価

Bis-phenols, such as bis-phenol A (BPA) and bis-phenol-S (BPS), are polymerizing agents widely used in the production of plastics and numerous everyday ...

発生生物学

Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae are a preeminent model for the neurobehavioral study of environmental pollutants. Here, a detailed experimental protocol is provided for the evaluation of the neurotoxicity of environmental pollutants using zebrafish larvae, including the collection of the embryos, the exposure process, neurobehavioral indicators, the test process, and data analysis. Also, the culture environment, exposure process, and experimental conditions are discussed to ensure the success of the assay. The protocol has been used in the development of psychopathic drugs, research on environmental neurotoxic pollutants, and can be optimized to make corresponding studies or be helpful for mechanistic studies. The protocol demonstrates a clear operation process for studying neurobehavioral effects on zebrafish larvae and can reveal the effects of various neurotoxic substances or pollutants.

A detailed experimental protocol is presented in this paper for the evaluation of neurobehavioral toxicity of environmental pollutants using a zebrafish larvae model, including the exposure process and tests for neurobehavioral indicators.

ゼブラフィッシュ幼虫に対する環境汚染物質の神経行動効果の研究

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae ...

Ecotoxicological Effects of Microplastics on Bird Embryo Development by Hatching without Eggshell

Microplastics are an emerging global pollutant type that poses a great health threat to animals due to their uptake and translocation in animal tissues and organs. Ecotoxicological effects of microplastics on the development of bird embryos are not known. The bird egg is a complete development and nutrition system, and the entire embryo development occurs in the eggshell. Therefore, a direct record of bird embryo development under the stress of pollutants such as microplastics is highly limited by the opaque eggshell in traditional hatching. In this study, the effects of microplastics on quail embryo development were visually monitored by hatching without an eggshell. The main steps include the cleaning and disinfection of fertilized eggs, the incubation before exposure, the short-term incubation after exposure, and the sample extraction. The results show that compared with the control group, the wet weight and body length of the microplastics-exposed group displayed a statistical difference and the liver proportion of the whole exposed group significantly increased. Additionally, we evaluated external factors that affect the incubation: temperature, humidity, egg rotation angle, and other conditions. This experimental method provides valuable information on the ecotoxicology of microplastics and a novel way to study the adverse effects of pollutants on the development of embryos.

This paper introduces a method of hatching without using an eggshell for toxicological studies of particle pollutants such as microplastics.

卵殻を使わない孵化による小可塑性の微生物の発生毒性による鳥胚発生への影響

Microplastics are an emerging global pollutant type that poses a great health threat to animals due to their uptake and translocation in animal tissues ...

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). At the most severe end of the spectrum is Fetal Alcohol Syndrome (FAS), characterized by growth retardation, craniofacial dysmorphology, and neurobehavioral deficits. Studies with animal models, including rodents, have elucidated many molecular and cellular mechanisms involved in the pathophysiology of FASDs. Ethanol administration to pregnant rodents has been used to model human exposure during the first and second trimesters of pregnancy. Third trimester ethanol consumption in humans has been modeled using neonatal rodents. However, few rodent studies have characterized the effect of ethanol exposure during the equivalent to all three trimesters of human pregnancy, a pattern of exposure that is common in pregnant women. Here, we show how to build vapor chambers from readily obtainable materials that can each accommodate up to six standard mouse cages. We describe a vapor chamber paradigm that can be used to model exposure to ethanol, with minimal handling, during all three trimesters. Our studies demonstrate that pregnant dams developed significant metabolic tolerance to ethanol. However, neonatal mice did not develop metabolic tolerance and the number of fetuses, fetus weight, placenta weight, number of pups/litter, number of dead pups/litter, and pup weight were not significantly affected by ethanol exposure. An important advantage of this paradigm is its applicability to studies with genetically-modified mice. Additionally, this paradigm minimizes handling of animals, a major confound in fetal alcohol research.

We demonstrate the construction of alcohol vapor chambers using readily available materials that simultaneously house 6 mouse cages. We further describe their use in a mouse model of fetal alcohol exposure equivalent to all 3&#160;trimesters of human pregnancy. This paradigm exposes animals during gestation and postnatal days 1-12.

人間開発の3つのすべての学期の等価時にはアルコールにマウスを公開するために使用蒸気チェンバースの建設

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

医学

Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is well-defined, and it is relatively easy to achieve precise and timely exposure via multiple methods. Moreover, the process of heart development in chicken embryos is similar to mammals, also resulting in a four-chambered heart, making it a valuable alternative model in the assessment of developmental cardiotoxicities. In our lab, the chicken embryo model is routinely used in the assessment of developmental cardiotoxicities following exposure to various environmental pollutants, including per- and polyfluoroalkyl substances (PFAS), particulate matter (PMs), diesel exhaust (DE) and nano materials. The exposure time can be freely selected based on the need, from the beginning of development (embryonic day 0, ED0) all the way to the day prior to hatch. The major exposure methods include air-cell injection, direct microinjection, and air-cell inhalation (originally developed in our lab), and the currently available endpoints include cardiac function (electrocardiography), morphology (histological assessments) and molecular biological assessments (immunohistochemistry, qRT-PCR, western blotting, etc.). Of course, the chicken embryo model has its own limitations, such as limited availability of antibodies. Nevertheless, with more laboratories starting to utilize this model, it can be used to make significant contributions to the study of developmental cardiotoxicities.

Chicken embryos, as a classical developmental model, are used in our lab to assess developmental cardiotoxicities following exposure to various environmental contaminants. Exposure methods and morphological/functional assessment methods established are described in this manuscript.

発達的心毒性の評価における強力なツールとしての鶏胚の使用

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has transparent embryos and rapid external development. Zebrafish embryos can, therefore, also be used for the rapid evaluation of toxicity of the drugs that are precious and available in small quantities. In the present article, a method for the efficient screening of the toxicity of chemical compounds using 1-5-day post fertilization embryos is described. The embryos are monitored by stereomicroscope to investigate the phenotypic defects caused by the exposure to different concentrations of compounds. Half-maximal lethal concentrations (LC50) of the compounds are also determined. The present study required 3-6 mg of an inhibitor compound, and the whole experiment takes about 8-10 h to be completed by an individual in a laboratory having basic facilities. The current protocol is suitable for testing any compound to identify intolerable toxic or off-target effects of the compound in the early phase of drug discovery and to detect subtle toxic effects that may be missed in the cell culture or other animal models. The method reduces procedural delays and costs of drug development.

Zebrafish embryos are used for evaluating the toxicity of chemical compounds. They develop externally and are sensitive to chemicals, allowing detection of subtle phenotypic changes. The experiment only requires a small amount of compound, which is directly added to the plate containing embryos, making the testing system efficient and cost-effective.

ゼブラフィッシュ胚を用いる化学化合物の毒性の迅速評価

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ecologically-important endpoints, though they are rarely considered in toxicological studies. D. melanogaster is emerging as a toxicology model for the behavioral, neurological, and genetic impacts of toxicants, to name a few. More importantly, species in the genus Drosophila can be utilized as a model system for an integrative framework approach to incorporate emergent properties and answer ecologically-relevant questions in&#160;toxicology research. The aim of this paper is to provide a protocol for exposing species in the genus Drosophila to pollutants to be used as a model system for a range of phenotypic outputs and ecologically-relevant questions. More specifically, this protocol can be used to 1) link multiple biological levels of organization and understand the impact of toxicants on both individual- and population-level fitness; 2) test the impact of toxicants at different stages of developmental exposure; 3) test multigenerational and evolutionary implications of pollutants; and 4) test multiple contaminants and stressors simultaneously.

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

In this paper, we provide a detailed protocol for exposing species in the genus Drosophila to pollutants with the goal of studying the impact of exposure on a range of phenotypic outputs at different developmental stages and for more than one generation.

無脊椎動物モデル システムとしてショウジョウバエを使用して毒性を実験室でテストするための実験プロトコル

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

生物学

ゼブラフィッシュ胚の毒性評価のための驚愕アッセイ

Evaluating Toxicity of Chemicals using a Zebrafish Vibration Startle Response Screening System

We developed a simple screening system for the evaluation of neuromuscular and general toxicity in zebrafish embryos. The modular system consists of electrodynamic transducers above which tissue culture dishes with embryos can be placed. Multiple such loudspeaker-tissue culture dish pairs can be combined. Vibrational stimuli generated by the electrodynamic transducers induce a characteristic startle and escape response in the embryos. A belt-driven linear drive sequentially positions a camera above each loudspeaker to record the movement of the embryos. In this way, alterations to the startle response due to lethality or neuromuscular toxicity of chemical compounds can be visualized and quantified. We present an example of the workflow for chemical compound screening using this system, including the preparation of embryos and treatment solutions, operation of the recording system, and data analysis to calculate benchmark concentration values of compounds active in the assay. The modular assembly based on commercially available simple components makes this system both economical and flexibly adaptable to the needs of particular laboratory setups and screening purposes.

著者スポットライト:ゼブラフィッシュ胚驚愕反応アッセイを用いたハイスループット毒性スクリーニング

We describe a screening system's workflow and data analysis for evaluating chemical compound toxicity based on the zebrafish embryo vibration startle response. The system records the movements of zebrafish embryos upon exposure to a vibration stimulus and allows for an integrated evaluation of general toxicity/lethality and neuromuscular toxicity.

ゼブラフィッシュ振動驚愕応答スクリーニングシステムを用いた化学物質の毒性評価

We developed a simple screening system for the evaluation of neuromuscular and general toxicity in zebrafish embryos. The modular system consists of ...

低線量の毒性に萌芽期の露出の長期的な行動および生殖の影響

要約

さらに動画を探す

この動画の章

適度な出生前アルコール暴露と成体ラットにおける社会行動の定量化

毒性物質のトランスおよび多世代効果の研究のためのカエナルハブ炎エレガンスの使用

ホルモン多電極アレイを用いた脊椎動物の神経回路網関数の開発化合物の影響の評価

ゼブラフィッシュ幼虫に対する環境汚染物質の神経行動効果の研究

卵殻を使わない孵化による小可塑性の微生物の発生毒性による鳥胚発生への影響

人間開発の3つのすべての学期の等価時にはアルコールにマウスを公開するために使用蒸気チェンバースの建設

発達的心毒性の評価における強力なツールとしての鶏胚の使用

ゼブラフィッシュ胚を用いる化学化合物の毒性の迅速評価

無脊椎動物モデルシステムとしてショウジョウバエを使用して毒性を実験室でテストするための実験プロトコル

ゼブラフィッシュ振動驚愕応答スクリーニングシステムを用いた化学物質の毒性評価

低線量の毒性に萌芽期の露出の長期的な行動および生殖の影響

要約

さらに動画を探す

この動画の章

適度な出生前アルコール暴露と成体ラットにおける社会行動の定量化

毒性物質のトランスおよび多世代効果の研究のためのカエナルハブ炎エレガンスの使用

ホルモン多電極アレイを用いた脊椎動物の神経回路網関数の開発化合物の影響の評価

ゼブラフィッシュ幼虫に対する環境汚染物質の神経行動効果の研究

卵殻を使わない孵化による小可塑性の微生物の発生毒性による鳥胚発生への影響

人間開発の3つのすべての学期の等価時にはアルコールにマウスを公開するために使用蒸気チェンバースの建設

発達的心毒性の評価における強力なツールとしての鶏胚の使用

ゼブラフィッシュ胚を用いる化学化合物の毒性の迅速評価

無脊椎動物モデル システムとしてショウジョウバエを使用して毒性を実験室でテストするための実験プロトコル

ゼブラフィッシュ振動驚愕応答スクリーニングシステムを用いた化学物質の毒性評価

無脊椎動物モデルシステムとしてショウジョウバエを使用して毒性を実験室でテストするための実験プロトコル