体外培養肺胞上皮細胞におけるハロゲン化ガスの濃度を制御する方法

この方法は、急性呼吸窮迫症候群の潜在的な新しい治療法としてハロゲン化付加物をテストするなどの肺損傷および修復の研究分野における重要な質問に答えるのに役立つ。この技術の主な利点は、細胞を培養し、正確で制御された濃度に到達するためにハロゲン化剤にそれらを公開する非常に簡単な方法に依存していることです。気密室を構成するには、6.5リットルの容量を持つ密閉ポリプロピレンボックスを使用してください。

箱の側面の底面に直径2.5センチの穴を開けます。次に、ガス空気混合入力パイプとして機能する緑色のマークを持つ波形チューブを挿入します。そして、シリコーンでそれを密封します。

次に、反対側の側面の上側に直径2.5センチメートルの2番目の穴を開けます。赤いマークを付けた別の波形の管を挿入し、ガス空気混合ガス出力パイプとして機能する炭フィルターとそれを接続します。その後、シリコーンでそれを密封します。

その後、壁の中央に4ミリメートルの直径を持つタイトな穴を掘削します。回転する男性のルアーロックで多様体に接続されている短い注入チューブを挿入します。ガス分析装置に差し込み、シリコーンで密封します。

その後、気密室の中にデジタル温度計を置きます。実験室の抽出器のフードの下で、二酸化炭素によって亜酸化窒素ガスラインを切り替えるために麻酔機械回路をカスタマイズする。麻酔機と気密室の間のパイプに加熱加湿器を挿入し、ガス流れの混合物を約37°Cに温めます。

緑のマーク付き段ボールチューブで気密室をカスタマイズされた麻酔機械回路に差し込みます。次に、気密室を37°Cに設定したホットプレートの上に置きます。ヒト肺胞上皮細胞を含む6つのウェルプレートを気密室に入れ、蓋を密封します。

ガス流量を調整して、CO2の5%を迅速に得る。次いでハロゲン化剤蒸発器を開き、所望の割合を調整します。目標値が達成されたら、新鮮なガスの流量を1分あたり1リットルに下げます。

気密室は実験のために必要な限りこのガス流量と維持することができる。培地中のセボフルランおよびイソフルラン濃度のコースは、時間の経過とともに類似していた。ハロゲン化剤の必要濃度が設定された直後に、最初の1時間にわたって濃度が上昇した。

その後、ハロゲン化剤の投与が停止するまで持続する高原に達した。投与中断後、濃度は1時間以内に減少した。ここに示されているのは、気体分析装置で測定された気密室における時間経過に伴うハロゲン化剤の分画である。

この手順は比較的安価で、研究者が以前に気密室を操作したことがない場合でも採用するのは非常に簡単です。この手順に従って、タンパク質およびRNA定量、免疫蛍光、タンパク質透過性および遊離輸送の測定のような他の方法は、上皮肺損傷およびその分解能の間にハロゲン化剤の特定の効果に関する質問に答えるために行うことができる。その開発後、この技術は、ARDS中の上皮性肺損傷に関与するメカニズムをさらに研究し、新しい治療法をテストするために、急性呼吸窮迫症候群の分野での研究への道を開く可能性があります。